第２８卷第４期 青海医学院学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＱＩＮＧＨＡＩ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ Ｖ０１．２８ Ｎｏ．４ ２００７ ２００７车 ＨＧＦ和１，２５一（ＯＨ）２ ＶｉｔＤ３对兔骨髓基质干 细胞成骨活性的联合诱导 祁玉林 刘丽梅 （１．青海省人民医院骨科；２．第三军医大学西南医院病理科） 摘要 目的观察肝细胞生长因子（ＨＧＦ）和１，２５一（ＯＨ） ＶｉｔＤ 对兔骨髓基质干细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）成骨活性的诱导作用。方法 采用ＨＧＦ和１，２５一（ＯＨ） ＶｉｔＤ 联合诱 导兔ＢＭＳＣｓ后检测其碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性、骨钙素和胶原蛋白Ｉ、ＩＩ的含量 并观察其成骨分化特性的变化。结果ＨＧＦ和１，２５一（ＯＨ），ＶｉｔＤ 联合诱导的兔ＢＭＳＣｓ的ＡＬＰ 活性、骨钙素水平和胶原蛋白Ｉ、ＩＩ在细胞中表达水平均明显高于对照组细胞。结论一ＨＧＦ和１，２５ （ＯＨ） ＶｉｔＤ 联合诱导作用可以促使兔ＢＭＳＣｓ明显表现出成骨分化特性。 关键词 骨髓基质干细胞ＨＧＦ １，２５一（ＯＨ） ＶｉｔＤ 成骨分化成骨诱导 中图分类号Ｑ８１ Ｒ７３３．７ 文献标识码Ａ ＯＳＴＥＯＧＥＮＩＣ ＤＩＦＦＥＲＥＮＴＩＯＮ ＣＡＰＡＣＴＩＹ ＯＦ ＲＡＢＢＩＴ ＢＯＮＥ ＭＡＲＲＯＷ ＳＴＲＯＭＡＬ ＣＥＬＬＳ ＩＮＤＵＣＣＤ ＢＹ ＨＧＦ ＡＮＤ １，２５一（ＯＨ）２ ＶＩＴＤ３ Ｑｉ Ｙｕｌｉｎ ，Ｌｉｕ Ｌｉｍｅｉ （１．Ｑｉｎｇｈａｉ ｐｒｏｖｅｎｃｉａｌ ｈｏｓｐｉｔａｌ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｏｓｅｏｇｅｎｉｃ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｒａｂｂｉｔ ＢＭＳＣｓ（ｂｏｍｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ） ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＨＧＦ（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）ａｎｄ １，２５一（ＯＨ）２ ＶｉｔＤ３．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔ ＢＭＳＣｓ ｗａｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＨＧＦ ａｎｄ １，２５一（ＯＨ）２ ＶｉｔＤ３，ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｏｓｔｅｏｇｃｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃａｐａｃｉｔｙ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｂｙ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＬＰ（ａｌｋａｌｉｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｅ）ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ ａｎｄ ＩＩ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＩ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ ａｎｄ ＩＩ ｏｆ ＢＭＳＣｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＨＧＦ ａｎｄ １，２５一（ＯＨ）２ＶｉｔＤ３ ｗｅｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｔｉｍｅ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎ・ ｃｌｕｓｉｏｎ ｔｈｅ ｏｓｔｅｎｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ＢＭＳＣｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＨＧＦ ａｎｄ １，２５一（ＯＨ）２ ＶｉｔＤ３． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ＨＧＦ １，２５一（ＯＨ）２ ＶｉｔＤ３ Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｃａｐａｃｉｔｙ Ｏｓｔｅｎｇｅｎｉｃ ｉｎ－ ｄＵＣｔｉ０ｎ 各种创伤和骨病导致的骨缺损是临床上的常见 疾病，组织工程的发展为解决这一难题提供了新的 治疗途径。骨髓基质干细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）具有很强的扩增能力并能被诱导分化 为多种间质组织。研究发现多种因子可以诱导ＢＭ． ＳＣｓ向成骨细胞分化，但对这些诱导因子的作用存 在不少争议。本实验通过ＨＧＦ和１，２５一 （ＯＨ） ＶｉｔＤ，共同作用于体外培养的兔ＢＭＳＣｓ，通 祁玉林（１９６８一），男，汉族，江苏籍，主治医师 ２４０ 维普资讯 http://www.cqvip.com
过检测ＡＬＰ活性、骨钙素水平和胶原蛋白Ｉ、ＩＩ的含 量，观察ＨＧＦ和１，２５一（ＯＨ）２ＶｉｔＤ，对兔ＢＭＳＣｓ成 骨活性的诱导作用。 １材料与方法 １．１ 试剂 实验组和对照组细胞，每组取１ ｘ １０。个细胞，离心 后弃上清并在细胞沉淀中加入６００ Ｉｘｌ的ＴｒｉｔｏｎＸ一 １００，震荡３０ ｓ，４ｃｃ过夜，粉碎，按试剂盒说明书测定 ＡＬＰ活性（单位： ｇ／ｍ１）。 １．５细胞内骨钙素的测定 ０．２５％的胰酶消化收集第３、６、９、１２ ｄ培养的 实验组和对照组细胞，每组取１ ｘ １０。个细胞，离心 日本大耳白兔（第三军医大学动物中心）；淋巴 细胞分离液（天津ＴＢＤ公司）；ＤＭＥＭ／Ｆ一１２培养 基、胎牛血清（美国Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）；胰蛋白酶（美国 ｓｉｇｍａ公司）；ＨＧＦ、１，２５一（ＯＨ）２ＶｉｔＤ３（美国ｓｉｇｍａ 后弃上清并在细胞沉淀中加入１ｍｌＰＢＳ与０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ—Ｘ（含４ ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ），按１：１混合，静置 １０ ｍｉｎ后按放免试剂盒说明由本校核医学教研室检 测骨钙素含量。 １．６胶原蛋白Ｉ和ＩＩ的Ｗｅｓｔｅｒｎ检测 公司）；抗胶原蛋白Ｉ和ＩＩ抗体（武汉博士德公司）； 二抗（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚｓ公司）；化学发光剂（Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ公 司）；碱性磷酸酶检测试剂盒（南京建成公司）；骨钙 素放免试剂盒（北方生物所）。 １．２兔ＢＭＳＣｓ的培养 取３～４个月龄日本大耳白兔３只，无菌条件下 作双侧股骨髁上骨髓腔穿刺抽取４ ｍｌ骨髓，按比例 （１：２）加入到含淋巴细胞分离液的离心管中，以转 速２０００ ｒ／ｍｉｎ离心，吸取中间层单个核细胞，接种 （３ Ｘ １０ ／ｃｍ ），置于含有２０％胎牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ 一将培养１、２ Ｗ的兔ＢＭＳＣｓ在冰上每孔加入细 胞裂解液Ｉ ｘ ＲＩＰＡ ｂｕｆｆｅｒ（裂解液含５０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ —ＨＣＩ、１５０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣ１、１０ ｍｌ／Ｌ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ一１００、 １ｇ／Ｌ ＳＤＳ、１０ ｇ／Ｌ脱氧胆酸、５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ，于 使用前加入５ ｇ／Ｌ Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ、２．０ ｍｍｏ￣Ｌ ＰＭＳＦ）。 匀浆后离心取上清液冻存，提取蛋白质用Ｆｏｌｉｎ一酚 法进行定量，并行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳，转膜，依次加 入一抗（１：５００）、二抗（１：１０００）杂交，封闭，化学发 １２培养基中，在３７￣Ｃ、５％ＣＯ 的孵育箱中培养， 每２ ｄ换液一次。待原代细胞生长至瓶底面积的 ８０％后用０．２５％胰蛋白酶消化传代，再次接种（１ ｘ １０ ／ｃｍ ），置于含１０％胎牛血清的培养基中，待 光显色，用Ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｎｅ ４．４软件分析图像，用积分 光密度值比较蛋白的表达。 １．７统计方法 ， 长满瓶底后消化传代。 １．３实验分组 采用ＳＰＳＳ １０．０统计分析软件对数据进行统计 学处理，结果以（ ±ｓ）表示，组间比较采用ｔ检验， 取第二代兔ＢＭＳＣｓ细胞用于实验，用仅含ＩＴＳ 的培养基培养２４ ｈ。实验组加入ＨＧＦ（２０￣ｇ／Ｌ）、１， ２５一（ＯＨ）２ＶｉｔＤ，（１０ ｍｏｌ／Ｌ）；对照组加人不含 同一组不同时间之间结果的比较采用双因素方差分 析。 ２结果 ＨＧＦ和１，２５一（ＯＨ）２ＶｉｔＤ 的培养基，分别培养３、 ６、９、１２ ｄ后检测ＡＬＰ的活性和骨钙素的水平，培养 １、２ Ｗ检测胶原蛋白Ｉ、ＩＩ的表达，每组ｎ：３。 １．４碱性磷酸酶活性测定 ０．２５％的胰酶消化收集第３、６、９、１２ ｄ培养的 表１ ２．１碱性磷酸酶活性测定 诱导培养兔ＢＭＳＣｓ的ＡＬＰ活性随培养时间的 延长逐渐增高，９ ｄ时到达最高峰，各时相点ＡＬＰ活 性均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），见表１。 ＨＧＦ和１，２５一（ＯＨ）２ＶｉｔＤ３联合诱导下ＢＭＳＣｓ不同时相点ＡＬＰ的活性（ｎ：３， ±Ｓ） Ｔａｂ １ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆＡＬＰ ｏｆＢＭＳＣｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＨＧＦ ａｎｄ １，２５一（ＯＨ）２ＶｉｔＤ３ ａｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ（ｎ＝３， ±Ｓ） 注：诱导组Ｆ＝１３．５３０，Ｐ＝０．０２， 表示与３ ｄ组比较Ｐ＜０．０１，其余各组间比较均Ｐ＞０．０５；对照组Ｆ＝１．８２７，Ｐ＝ ０．２２０，无统计学意义． ２４１ 维普资讯 http://www.cqvip.com ２．２骨钙素水平的测定 兔ＢＭＳＣｓ诱导培养３ ｄ后ＡＬＰ活性显著高于 表２ 对照组，随着培养时间的延长，骨钙素含量逐渐升 高，且在各时相点均高于对照组（Ｐ＝０．００），见表２。 ＨＧＦ和ｌ，２５一（ＯＨ）：ＶｉｔＤ 联合诱导下骨髓基质干细胞不同相点骨钙素的水平（ｎ：３， ±ｓ） Ｔａｂ ２ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ ｏｆ ＢＭＳＣｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＨＧＦ ａｎｄ ｌ，２５一（ＯＨ）２ＶｉｔＤ３ ａｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ（ｎ＝３， ±Ｓ） 培养时间（天） ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｉｍｅ（ｄ） ３ ｄ 对照Ｃｏｎｔｒｏｌ 诱 ｉｎｄｕ ｎ （￣ｇ／ｍ１） 值 ～ （ ｍ１） １．５４９ ４－０．２４５ Ｐ值 ３．１４８±０．３７２ ６．２ｌ８ ０．０３ ６ ｄ １．８８２ ４－＿０．３５０ ８．０９２±０．４２７ １９．４８２ ０．００ ９ ｄ ２．２４７±０．３４９ １０．３２０±０．２５７ ▲ ３２．２６２ ０．ｏｏ １２ ｄ ２．２３６±０．３１７ １４．３２０±０．３５２ ▲☆ ４４．１８４ ０．ｏｏ 注：诱导组Ｆ＝５１０．０１３，Ｐ＜０．０ｌ， 表示与３ ｄ组比较Ｐ＜０．０１；▲表示与６ ｄ比较均Ｐ＜０．０１；☆表示与９ ｄ组比较Ｐ＜ ０．０１．对照组Ｆ＝３．３０２，Ｐ＝０．０７９差别无统计学意义． ２．３ Ｉ、ＩＩ型胶原蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎ检测 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ结果显示，ＨＧＦ和ｌ，２５一（ＯＨ） 量在７ ｄ和１４ ｄ均显著升高，明显高于各自对照组 和０ ｄ组（Ｐ＜０．０１），见表３；Ｉ、ＩＩ型胶原蛋白Ｗｅｓｔ． ｅｒｒ—ｂｌｏｔ结果见图ｌ～２。 ２ＶｉｔＤ３联合诱导后ＢＭＳＣｓ的Ｉ、ＩＩ型胶原蛋白表达 表３ ＨＧＦ和１，２５一（ＯＨ）：ＶｉｔＤ 联合诱导下骨髓基质干细胞不同相点胶原蛋白Ｉ、 Ｉ１型的表达（ｎ＝３， ±Ｓ，单位：ＩＯＤ） Ｔａｂ ３ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ ａｎｄⅡｏｆ ＢＭＳＣｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＨＧＦ ａｎｄ １，２５一（ＯＨ）２ ＶｉｔＤ３ ａｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ （ｎ＝３， ±Ｓ ｕｎｉｔ：ＩＯＤ） 胶原蛋白Ｉ ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ 检测 时间 （天） 胶原蛋白ｌＩ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｌＩ 对照 对旦ｆ｛ Ｃｏｎｔｒｏ１ 诱导 Ｐ值 （ｎ＝３） １０３．５２± ｌ１５．７４ 诱导 ｉｎｄｕｃｏｎ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｔ值 Ｐ值 （ｎ＝３） １０３７．５２± （ｎ＝３） （ｎ＝３） ９８４．３９± １０８．３５ ９８４．３９± ｌ０８．３５ ０ ｄ ｌｌ５．７４ １１３５．９８± ７ ｄ １２６．７５ １９７５．４３ ４－ ７．３３６ ０．００ １２３８．３４± １４５．９３ １７３７．３３± １５２．３８丰丰 ２１７．６７‘‘ ．． ３．２９８ ０．０３ １２２４．３６± １４ ｄ １１２．５０ ２０３５．６４ ４－ ５．２２６ ２４４．１９ ０．００ １１４７．４２± １９４５．５２± ３０４．２０＂＂ ３．６８５ ０・０２ｌ ２１９．５５ 注：胶原蛋白Ｉ，对照组Ｆ＝１．８６７，Ｐ＝０．２３４；诱导组Ｆ＝２９．２９３，Ｐ＜０．０１。 表示与０ ｄ比较均Ｐ＜０．０ｌ；胶原蛋白 Ⅱ对照组Ｆ＝１．８３４，Ｐ＝０．２３９；诱导组Ｆ＝１５．１７４，Ｐ＝０．０４；▲▲表示与０ｄ比较均Ｐ＜０．０１． ２４２ 维普资讯 http://www.cqvip.com 图１胶原蛋白１ ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ结果 Ｆｉｇｌ ｔｈｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ ３讨论 ＢＭＳＣｓ存在于骨髓等组织中，具有典型干细胞 的特点，在特定的条件下可以分化为骨、软骨、肌肉、 脂肪等问充质组织。存在于骨髓中的ＢＭＳＣｓ具有 自我复制能力和多向分化潜能，在不同的条件的诱 导下能分化为多个细胞系，如成骨细胞、纤维细胞、 软骨细胞、脂肪细胞、肌肉胞、内皮细胞、神经细胞及 肝细胞等多种细胞¨ 。ＢＭＳＣｓ与其它问充质干细 胞具有极为类似的基因表达图谱和分化特性，在受 到创伤和局部神经体液因素的刺激下，ＢＭＳＣｓ可以 迅速增殖向成骨和软骨细胞分化，形成新的骨组织 参于创伤的修复。ＢＭＳＣｓ在骨髓中的含量虽然很 少，但因其具有很强的多向分化增殖能力，能诱导分 化为多种问质组织，是组织工程中重要的种子细胞， 从而具有广泛的应用前景 Ｊ，研究ＢＭＳＣｓ的诱导分 化的因素和其细胞分子机制具有重要的临床意义。 研究证实多种因素可以诱导ＢＭＳＣｓ成骨分化， 包括多种生长因子，如ＢＭＰ、 ＦＧＦ—Ｂ、ＩＬ一６等 ， 以及一些药物如地塞米松、Ｂ一甘油磷酸钠、维生素 Ｃ、抗坏血酸等，能促进ＢＭＳＣｓ向成骨细胞分化，使 ＡＬＰ的ｍＲＮＡ的表达水平及活性增高，成骨细胞的 标志物骨桥蛋白、骨钙素和胶原的ｍＲＮＡ水平及蛋 白合成增加，同时抑制其向其他细胞如脂肪细胞或 骨骼肌细胞分化 ‘。Ｊ。最近的研究发现，ＨＧＦ能促 进ＢＭＳＣｓ的成骨分化，其作用是通过跨膜的酷氨酸 激酶受体，从而刺激包括ＢＭＳＣｓ在内的多种细胞的 增殖、分化和细胞因子的分泌。１，２５一（ＯＨ）：ＶｉｔＤ 可以促进ＢＭＳＣｓ向成骨细胞分化，同时抑制其向脂 图２胶原蛋白ＩＩ Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ结果 Ｆｊｇ２ ｔｈｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ ＩＩ 肪细胞转化，１，２５一（ＯＨ）：ＶｉｔＤ，可以协同促进其他 细胞因子ＢＭＳＣｓ成骨作用＂ 。 本实验采用已经较为成熟的贴壁法对兔ＢＭ— ＳＣｓ进行体外分离培养，因其具有较强的粘附特性， 通过梯度离心和多次换液去除血系细胞和脂肪细 胞，再通过贴壁培养可得到较纯的ＢＭＳＣｓ，体外培 养的ＢＭＳＣｓ有利于对其分化增殖的特性进行系统 的研究 。 本实验中研究发现，在ＨＧＦ和１，２５一 （ＯＨ） ＶｉｔＤ，的共同诱导下，ＢＭＳＣｓ的ＡＬＰ活性升 高，骨钙素的水平和胶原蛋白Ｉ、ＩＩ的表达上调，表 现出明显的向成骨细胞和软骨细胞分化的活性。目 前对诱导因子和定向诱导的控制等研究仍不十分明 确，ＨＧＦ和１，２５一（ＯＨ）２ＶｉｔＤ，共同成功诱导ＢＭ－ ＳＣｓ成骨分化为这方面的研究提供了新的线索。 参考文献 ［１］Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｎ，Ｔｅｒａｉ Ｓ，Ｏｈａｔａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｕｂｐｏｐｕｌａ— ｌｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｔｔｌａｌＴｏ－￣；ｃｅｌｌｓ ｄｅｐｌｅｔｅｄ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ａｎｔｉ— Ｌｉｖ ８，ｉｓ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｔｏ ｒｅｐａｉｒ ｄａｍａｅｄ ｌｉｖｅｒ［Ｊ］．Ｂｉｏ— ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００４，３１３ （４）：１１１０—１１１８ ［２］Ｂｒｕｄｅｒ ＳＰ，Ｆｏｘ ＢＳ．Ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｂｎｎｅ：ｃｅｌｌ ｂａｓｅｄ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｏｒｔｏｐ，１９９９（３６６ Ｓｕｐｐ１）：６８—８３ ［３］Ｈｏｒｉ Ｙ，Ｉｎｏｕｅ Ｓ，Ｈｉｒａｎｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａ— ｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔ ｂｏｎｅ ｎｌａｌｌ＇ｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｔｉｓ— ｓｕｅ—Ｅｎｇ，２００４，１０（７—８）：９５５—１００５ ［４］Ｑｉｎ Ｙ，Ｐｅｉ ＧＸ，Ｘｉｅ ＤＭ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍｏｒ・ ｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ Ｏ１３ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ｒａｂｂｉｔ ｂｏｎｅ ｎｌａｉＴｏｗ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． （下转第２７６页） ２４３ 维普资讯 http://www.cqvip.com ＨＩＦ一１ 可作为肿瘤患者预后的独立指标。借鉴以 Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｏｘｏａ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ １ ａ ｉｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ 上的研究，我们可以推测子宫颈癌患者测定ＨＩＦ一 ａｎ ｕｎｆａｖｏｒａｂｌｅ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｅａｒｌｙ——ｓｔａｇｅ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｅｍｌｅ・・ １ 对临床估计预后、指导治疗意义非常。 ｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０００，６０：４６９３—４６９６ 参考文献 ［６］林爽，李力，王云．缺氧诱导因子一１ 及Ｅ一钙粘 ［１］Ｂｒｉｚｄ ＤＭ，Ｓｃｕｌｌｙ ＳＰ，Ｈａｒｒｅｌｓｏｎ ＪＭ．ｅｔ １ａ．Ｔｕｍｏｒ ＯＸ— 蛋白在宫颈癌中的表达及意义．第三军医大学学报，２００５， ｙｇｅｎａｔｉｏｎ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ ｏｆｄｉｓｔａｎｔ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｈｕ— ２７（１０）：１０２６—１０２９ ｍａｎ ｓｏｆｔ ｔｉｓｓｕｅ ｓａｒｃｏｍａ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９６，５６：９４１— ［７］Ｂｒｏｗｎ ＪＭ，Ａｍａｔｏ Ｊ Ｇ．Ｔｈｅ ｕｎｉｑｕｅ Ｐ ｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ９４３ ｔｕｍｏｒｓ：ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ（ａｎｄ ｐｒｏｂｌｅｍｓ）ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］． ［２］Ｍａｘｗｅｌｌ ＰＨ，Ｄａｃｈｓ ＧＵ，Ｇｌｅａｄｌｅ ＪＭ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｏｘ— Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９８，５８：１４０８ ｉａ—ｉｎ ｄｕｓｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ一１ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ［８］Ｂｒｉｚｅｌ ＤＭ，Ｓｃｕｌｌｙ ＳＰ，Ｈａｒｒｅｌｓｏｎ ＪＭ，ｅｔ ａ１．Ｔｕｍｏｒ ｔｕｍｏｒ ａｎｄ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｂｏｔｈ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］． ｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ ｏｆ ｄｉｓｔａｎｔ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｌ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９９７，９４（１５）：８１０４ ｈｕｍａｎ ｓｏｆｔ ｔｉｓｓｕｅ ｓａｒｃｏｍａ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９６，５６ ［３］Ｓｅｍｅｎｚａ ＧＬ．ＨＩＦ一１：ｍｅｄｉａｔｏｒ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ （５）：９４１ ｐａｔｈ。ｐｈｙｓｉｏ１ｏｇｉｃａｌ ｒｅ—ｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｈｙｐｏｘｉａ［Ｊ］．Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ， ［９］Ｈｏｃｋｅｌ Ｍ，Ｓｃｈｌｅｎｇｅｒ Ｋ，Ａｒｌａ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ２０００，８８（４）：１４７４—１４８０ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｕｍｏｒ ｈｙｐｏｘｉａ ａｎｄ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ［４］Ｚｈｏｎｇ Ｈ，Ａｎｇｅｌｏ Ｍ，Ｌａｕｇｈｎｅｒ ｄ。ｅｔ ａ１．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓ－ ｃａｎｃｅｒ ｏｆｔｈｅ ｕｔｅｒｉｎｅ ｃｅｒｖｉｘ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９６，５６（１９）： ｓｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉａ２ｉｎｄｕｅｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ １ ｃｔｉｎ ｃｏｍｍｏｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒｓ ４５０９ 收稿２００６—１０—２６ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９９．５９：５８３０—５８３９ ［５］Ｐｅｔｅｒ Ｂｉｍｅｒ，Ｍｏｎｉｋａ Ｓｃｈｉｎｄ，Ａｎｄｒｅａｓ Ｏｂｅｒｍａｉｒ，ｅｔ ａ１． 篷 鲨 蛙 蹙 曩蓦 囊堂； 甚 毒 ； 乓 美 ； 芸双毫 童 些鼍垡≥ 莲篓 矗堂 省 ：叁 ：美蓝：美 篓 （上接第２４３页） ［７］Ｉｐｐｏｌｉｔｏ ＧＤ，Ｓｃｈｉｌｌｅｒ ＰＣ，Ｐｅｒｅｚ—ｓｔａｂｌｅ Ｃ，ｅｔ １ａ．Ｃｏ－ Ｄｉ—Ｙｉ—Ｊｕｎ—Ｙｉ—Ｄａ—Ｘｕｅ—Ｘｕｅ—Ｂａｏ，２００３，２３（１０）： ｏｐｅｒａｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ １，２５一ｄｉ— １０２１—１０２４ ｈｙｄｒｏｘｙ ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ３ ｉｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｖｅｒｔｅ— ［５］Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ Ｂ，Ｙｏｏ ＪＵ．Ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｐｒｏ— ｂｒｌａ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｏｒｍａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｏｎｅ，２００２，３１（２）：２６９— ｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｒｅｐａｉｒ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｏｒｔｈｏｐ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｒｅｓ， ２７５ １９９９，３６７：１５６—１６２ ［８］Ｐａｒｋ ＳＡ，Ｓｈｉｎ ＪＷ，Ｙａｎｇ ＹＩ，ｅｔ ａｌ，Ｉｎｖｉｔｏｒ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ［６］Ｅｒｉｃｅｓ Ａ，Ｃｏｎｇｅｔ Ｐ，Ｒｏｊａｓ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｇｐ １３０ ａｃｔｉｖａ— ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｏｎ ｈｅａｔ— ｔｉｏｎ ｂｙ ｓｏｌｕｂｌｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２６ ｒｅｃｅｐｔｏｒ／ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一６ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｐｏｒｃｉｎｅ ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ ｂｏｎｅ ｂｌｏｃｋｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉｌａｓ，２００４， ｏｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ ｄｉｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ—．ｄｅｒｉｖｅｄ ｒｕｅｓ．． ２５（３）：５２７—３５ ｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，２００２，２８０（１）：２４－３２ 收稿２００７一Ｏｌ一１８ ２７６
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