化疗联合细胞免疫治疗对卵巢癌患者细胞免疫功能的影响及其临床疗效分析

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《中国医学前沿杂志（电子版）》2019年第11卷第4期

DOI：10.12037/YXQY.2019.04-15

化疗联合细胞免疫治疗对卵巢癌患者细胞免疫功

能的影响及其临床疗效分析

朱颛顼1，赵旻2（1．十堰市太和医院　妇科，湖北　十堰　442000；2．武汉大学基础医学院，武汉　430071）

【摘要】 目的 探讨化疗联合细胞免疫治疗对卵巢癌患者细胞免疫功能的影响及其临床疗效。方法 选择2017年3月至2018年3月十堰市太和医院收治的卵巢癌患者90例为研究对象，采用随机数表法将其分为观察组（45例）和对照组（45例），观察组患者采用化疗联合细胞免疫治疗，对照组患者采用单纯化疗，比较两组患者治疗前后外周血T细胞亚群变化情况、化疗不良反应发生情况及临床疗效。结果 治疗后，观察组患者外周NK细胞、CD4+/CD8+比值、CD3+CD4+、CD3+水平均显著高于同期对照组及本组治疗前（P均＜0.01），CD8+水平显著低于同期对照组及本组治疗前（P均＜0.01），CD4+CD25+水平显著低于本组治疗前（P＜0.01），但高于同期对照组（P＜0.01）。观察组患者化疗后骨髓抑制和肝功能损害发生率均显著低于对照组（P均＜0.01）。观察组患者治疗总有效率显著高于对照组（P＜0.05）。结论 化疗联合细胞免疫治疗能够提高卵巢癌患者的细胞免疫功能，降低化疗不良反应发生率，提高疗效。【关键词】 化疗；细胞免疫治疗；卵巢癌；临床疗效

Analysis of the effect of chemotherapy combined with cellular immunotherapy on cellular immune function in patients with ovarian cancer and its clinical efficacy

ZHU Zhuan-xu1, ZHAO Min2 (1. Department of Gynecology, Taihe Hospital of Shiyan City, Hubei, Shiyan 442000, China; 2. Wuhan University School of Basic Medicine Sciences, Wuhan 430071, China)Corresponding author: ZHU Zhuan-xu, E-mail: 541652372@qq.com【Abstract】 Objective　To investigate the effect of chemotherapy combined with cellular immunotherapy on cellular immune function in patients with ovarian cancer and its clinical effect. Method　From March 2017 to March 2018, 90 patients with ovarian cancer admitted to Taihe Hospital of Shiyan City were randomly divided into observation group (n＝45) and control group (n＝45).Patients in observation group were treated with chemotherapy combined with cellular immunotherapy, while patients in control group were treated with chemotherapy alone, the changes of T lymphocyte subsets in peripheral blood, the occurrence of adverse reactions of chemotherapy and the clinical efficacy were compared between the two groups before and after treatment. Result　After treatment, the levels of peripheral NK cells, CD4+/CD8+ ratio, CD3+CD4+ and CD3+ in observation group were significantly higher than those in control group at the same time and this group before treatment (Pall＜0.01), the level of CD8+ was significantly lower than that of control group at the same time and this group before treatment (Pall＜0.01), the level of CD4+CD25+ was significantly lower than that before treatment (P＜0.01), but higher than that of control group at the same time (P＜0.01). The incidence of myelosuppression and liver function damage in observation group after chemotherapy was significantly lower than that in control group (Pall＜0.01). The total effective rate of observation group was significantly higher than that of control group (P＜0.05). Conclusion　Chemotherapy combined with cellular immunotherapy can improve the cellular immune function of patients with ovarian cancer, reduce the incidence of adverse reactions of chemotherapy, and improve the efficacy.【Key words】 Chemotherapy; Cellular immunotherapy; Ovarian cancer; Clinical efficacy

卵巢癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一，由于临床早期诊断方法匮乏，其病死率已超过

40%[1]。卵巢癌的治疗以手术联合放化疗为主，单纯手术治疗效果欠佳[2]。研究表明，经静脉或腹腔

基金项目：湖北省卫生计生委面上项目（WJ2017M001）

通讯作者：朱颛顼 E-mail：541652372@qq.com

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化疗能够杀灭肿瘤细胞，延长患者生存期[3]。但化疗常会导致患者细胞免疫功能下降，其生存期及生存质量难以保证[4]。细胞免疫治疗能够提高患者化疗效果，同时不影响患者的细胞免疫功能[5]。本研究旨在探讨化疗联合细胞免疫治疗对卵巢癌患者细胞免疫功能的影响及其临床效果，以期为临床制订治疗方案提供参考依据。具体报道如下。1　资料与方法

1.1　一般资料　选取2017年3月至2018年3月十堰市太和医院收治的卵巢癌患者90例为观察对象。纳入标准：①KPS评分＞70分、预期生存期＞6个月；②血淋巴细胞绝对值≥1×109/L，白细胞计数＞8.0×109/L，血常规检查无明显异常；③临床分期为Ⅰ期。排除标准：①心、肝、肾、肺等脏器功能明显异常患者；②未采用全面分期手术切除肿瘤组织的患者。采用随机数表法将入选患者分为观察组（45例）和对照组（45例）。观察组：年龄：26～74岁，平均（54.32±5.47）岁；术后病理诊断类型：黏液性囊腺癌11例，浆液性囊腺癌29例，膜性腺癌5例；临床分期：Ⅰa期15例，Ⅰb期20例，Ⅰc期10例。对照组：年龄25～73岁，平均（53.29±6.17）岁；术后病理诊断类型：黏液性囊腺癌13例，浆液性囊腺癌27例，膜性腺癌5例；临床分期：Ⅰa期14例，Ⅰb期20例，Ⅰc期11例。两组患者一般资料比较均无显著差异（P均＞0.05），具有可比性。入选患者均签署知情同意书，本研究经十堰市太和医院伦理委员会审核批准。1.2　治疗方法

1.2.1　对照组患者采用单纯化疗　化疗前常规静脉滴注地塞米松10 mg＋西咪替丁0.2 mg＋阿扎司琼50 ml。应用紫杉醇＋奈达铂（TP）化疗方案。根据体表面积法计算，紫杉醇用量为135～175 mg/m2，奈达铂用量为100 mg/m2。给药顺序：常规药物静脉滴注30 min后将30 mg紫杉醇加入100 ml 0.9%氯化钠注射液中静脉滴注，时间为30 min；之后将剩余紫杉醇加入500 ml 0.9%氯化钠注射液中静脉滴注，时间为2.5 h。当患者尿量超过100 ml/h时，将奈达铂100 mg/m2加入500 ml 0.9%氯化钠注射液中静脉滴注，时间＞1 h。TP方案27 d为1个疗程。

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1.2.2　观察组患者采用化疗联合细胞免疫治疗　化疗方案与对照组相同。在行TP方案化疗前24 h采集患者外周血进行树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（dendritic cell-cytokine-induced killer，DC-CIK细胞）培养。患者采血前清淡饮食，取60 ml外周血置于抗凝管中，离心后提取血浆备用，加入等体积生理盐水稀释血浆，加淋巴分离液收集单个核细胞，经洗涤培养后将细胞按1×109/L的数量悬浮于含有10%自体血浆的完全培养基中，加3×106 U/L的重组人干扰素-ɤ，置于37℃ CO2培养箱中。1 d后加入浓度为50 μg/L的Anti-CD3 mAb和1.5×106 U/L的重组人白介素-2（recombinant human interle uk in-2，rhIL-2），每隔72 h更换1次培养基，同时增加rhIL-2培养液，培养7～10 d后形成体外细胞培养液，并将其分10次回输给患者，21 d为1个疗程。1.3　评价标准　采用新版实体瘤疗效评价标准[6]评定疗效：①完全缓解（complete response，CR）：目标病灶消除，且维持4周及以上；②部分缓解partial response，PR）：目标病灶半径之和减少不低于30%，且维持4周以上；③疾病进展（progressive disease，PD）：目标病灶半径之和增加超过20%，且半径之和＞5 mm或出现新的病灶；④疾病稳定stable disease，SD）：介于缓解和进展之间。有效率＝（CR例数＋PR例数）/总例数×100%。1.4　观察指标　①治疗前及治疗30 d后，采用流式细胞仪检测外周血T细胞亚群变化情况；②化疗不良反应发生情况；③临床疗效。

1.5　统计学方法　采用SPSS 22.0软件进行数据统计分析。符合正态分布的计量资料以x±s表示，比较采用t检验；计数资料以%表示，比较采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有显著性。2　结果

2.1　治疗前后两组患者外周血T细胞亚群变化情况比较　治疗后，观察组患者外周NK细胞、CD4+/CD8+比值、CD3+CD4+、CD3+水平均显著高于同期对照组及本组治疗前（P均＜0.01），CD8+水平显著低于同期对照组及本组治疗前（P+均＜0.01），CD4+CD25水平显著低于本组治疗前（P＜0.01），但高于同期对照组（P＜0.01）（表1）。

（（76

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表1　两组患者治疗前后外周血T细胞亚群变化情况比较（x±s）

组别时间

对照组（n＝45）治疗前

治疗后

观察组（n＝45）治疗前

治疗后

CD8+（%）33.25±7.2432.80±7.1234.09±7.8326.90±5.03*#CD4+CD25+（%）12.14±2.168.16±2.60*11.41±2.3210.84±5.31*#

NK细胞（%）13.54±4.7615.39±6.80*13.94±4.5425.67±6.18*#

CD4+/CD8+0.99±0.240.98±0.261.06±0.191.43±0.19*#CD3+CD4+（%）29.25±6.6430.26±7.0930.85±7.1642.68±9.16*#CD3+（%）50.13±4.3451.68±2.37*51.46±10.0063.79±12.39*#

注：与本组治疗前比较，*P＜0.01；与同期对照组比较，#P＜0.01

2.2　两组患者化疗不良反应发生情况比较　观察组患者化疗后骨髓抑制和肝功能损害发生率均显著低于对照组（P均＜0.01），而消化道反应和周围神经毒性发生率虽然低于对照组，但均无显著差异P均＞0.05）（表2）。

表2　两组患者化疗不良反应发生情况比较[例（%）]

组别消化道反应骨髓抑制肝功能损害周围神经毒性对照组18（40.00）23（51.11）20（44.44）7（15.56）n＝45）

观察组15（33.33）4（8.89）5（11.11）6（13.33）n＝45）

χ20.24638.29524.3860.014P0.619＜0.001＜0.0010.904

2.3　两组患者临床疗效比较　观察组患者治疗总有效率显著高于对照组（P＜0.05）（表3）。

表3　两组患者临床疗效比较[例（%）]

组别CRPRSDPD总有效对照组16（35.56）10（22.22）12（26.67）7（15.56）26（57.78）n＝45）观察组20（44.44）18（40.00）4（8.89）3（6.67）38（84.44）n＝45）

χ27.788P0.005注：CR：完全缓解；PR：部分缓解；SD：疾病稳定；PD：疾病进展

3　讨论

卵巢癌的治疗以手术治疗为主，结合化疗为辅[7]。卵巢癌早期患者以争取治愈为主，中晚期患者以延长生存期及提高生活质量为主[8]。临床上化疗主要采用紫杉醇结合铂类联合化疗方案。研究显示，奈达铂针对卵巢癌患者的化疗效果高于顺铂[9,10]。通过手术结合合理化疗能够在一定程度上达到缩小肿瘤及治愈的目的[11]。但患者术后易出现免疫抑制、肝功能异常等化疗不良反应，导致耐受性差[12]。随着时代的发展，卵巢癌的治疗方式不再局限于手术或放化疗，细胞免疫治疗也已成为晚期、复发性卵巢癌的新的治疗手段，是手术及放化疗等的良好补充[13]。

在细胞免疫过程中，T淋巴细胞和NK细胞发挥重要的免疫调节作用。NK细胞数量随着肿瘤细胞

的生长而减少，CD3+可反映成熟的T淋巴细胞总量，CD4+作为辅助性T细胞，是机体抗肿瘤免疫的主要成员，CD8+是细胞免疫损伤的标志物，CD4+/CD8+比值可以预测患者机体对肿瘤细胞的杀伤能力。本研究结果显示，观察组患者治疗后外血周NK细胞、CD4+/CD8+比值、CD3+CD4+、CD3+水平均显著高于同期对照组和本组治疗前，这是由于细胞免疫疗法能够与靶细胞结合发挥直接杀伤作用，而且能够产生大量细胞因子，从而达到间接杀伤肿瘤的目的，诱导肿瘤细胞凋亡及坏死。本研究观察组患者治疗后CD8+水平降低更明显，且降至正常范围，机体免疫水平提升。观察组患者治疗后CD4+CD25+水平显著低于本组治疗前，但高于同期对照组。CD4+CD25+属于参与机体免疫反应和自身免疫反应的T细胞亚群，能够双向调节机体免疫功能，被认为是活化的CD4+细胞。化疗药物具有细胞毒性，选择性差，可损伤机体免疫细胞，因而本研究两组患者治疗后CD4+CD25+水平均显著降低，但观察组患者CD4+CD25+水平仍高于对照组。可见，化疗联合细胞免疫疗法对卵巢癌患者的免疫功能具有保护作用。

研究认为，化疗与细胞免疫治疗存在一定的拮抗性和独立性，二者协同性较差[14]。主要原因在于免疫细胞受化疗影响出现非特异性增殖细胞凋亡，造成淋巴细胞大量减少，降低了细胞免疫疗法的疗效[15]。化疗引起的细胞凋亡是非炎性过程，无免疫细胞激活和增殖，可引发肿瘤浸润T细胞抗原表达被抑制，出现免疫耐受[16]。但本研究通过调整细胞免疫治疗与化疗的时间，二者交替进行，有效避免了患者免疫耐受，从而使细胞免疫治疗成为化疗的“增敏剂”[17]。研究显示，采用DC-CIK细胞免疫治疗能够促进外周血CD4+、CD25+、Treg数量增多，改善患者T细胞功能低下及亚群比例失调状况[18]。因此，化疗联合细胞免疫治疗可帮助患者恢复免疫功能。本研究中观察组患者骨髓抑制和肝功

（（（（（《中国医学前沿杂志（电子版）》2019年第11卷第4期

能损害发生率均显著低于对照组。单纯化疗不仅会损伤肿瘤细胞，也会对正常细胞造成一定的损害，从而发生化疗不良反应，其中骨髓抑制和肝功能损害是相对严重的不良反应[19]。严重的骨髓抑制会造成机体免疫力下降，出现白细胞、血小板减少及贫血等，而长期肝功能损害会引发肝脏解毒和代谢功能紊乱，无法顺利排出体内毒素。本研究通过化疗联合细胞免疫治疗，有效减少了患者骨髓抑制和肝功能损伤的发生。本研究采用DC-CIK细胞免疫治疗，DC细胞具有抗原识别、激活机体免疫系统的增殖及防御能力；CIK细胞具有杀伤肿瘤细胞作用，其通过自身细胞毒性及细胞因子分泌而发挥杀伤甚至杀灭肿瘤细胞的作用；DC-CIK细胞作为二者的结合体，既能够提高患者的机体免疫功能，又可以杀灭肿瘤细胞[20]，而且其获取渠道是患者体内，采集方便，经过一系列诱导程序后，将DC-CIK细胞输入患者体内，不会产生免疫排异反应，在不损伤机体正常免疫细胞功能的前提下，杀灭肿瘤细胞。本研究中观察组患者治疗总有效显著高于对照组，证明化疗联合细胞免疫治疗对卵巢癌治疗效果较好。通过培养DC-CIK细胞的自体细胞回输进行治疗，有研究表示，通过DC-CIK细胞免疫治疗能够增强机体杀伤肿瘤细胞的作用，既能够辅助杀灭肿瘤细胞，又能够保障机体正常的免疫功能不被破坏，且具有取材广泛、应用便捷的特点。

综上所述，化疗联合细胞免疫治疗能够增强卵巢癌患者的细胞免疫功能，降低化疗不良反应发生率，提高疗效。

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收稿日期：2018-11-15