高通量测序在非小细胞肺癌基因突变研究中的应用

·1161·

·论 著·

高通量测序在非小细胞肺癌基因突变研究中的应用*

杨静丽1,葛 闯2,易 琳2,张海伟2,林昌海2,唐万燕2,陈 霞2,辇伟奇2

(重庆医科大学附属儿童医院新生儿诊治中心/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/1.

国家儿童健康与疾病临床医学研究中心/儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地/儿童感染免疫

重庆市重点实验室,重庆4重庆大学附属肿瘤医院肿瘤转移与个体化诊治00014;2.

目的 对非小细胞肺癌(精准化诊疗相关的2分析多 摘 要:NSCLC)8种肿瘤驱动基因进行高通量测序,

基因突变与疾病临床特征的关系。方法 收集重庆大学附属肿瘤医院2017年1月至2018年10月396例基因突变频率最高的前5个基因占总突变的6表现出明显的肿瘤主基因突变聚集现象。E3.%,GFR基因亚

)转化研究重庆市重点实验室,重庆400030

对ENSCLC患者标本,GFR、ALK、ROS1、KRAS、NRAS、HRAS、PIK3CA、TP53、PTEN、BRAF、HER2、

且RET、MET等28种基因进行高通量测序分析。结果 EGFR基因突变占基因突变总检出例数的35.35%,、型同样呈明显的主次分布规律,其中最常见的突变亚型是1分别占49delL858R,5.00%、41.43%。EGFR基

、、因的1而T9delL858R和20ins3个亚型多为单突变,790M、G719X、S768IL861Q等亚型则常表现为共突变。

T790M伴随L858R突变常常是原发性突变,T790M与19del共突变则常常是获得性突变。EGFR突变标本发生

其他多基因突变的检出率显著低于无E可能是因为EGFR突变标本,GFR基因突变抑制了其他基因发生突变。结论 高通量测序可高效检测N可为研究多基因突变的内在关SCLC患者与靶向治疗相关驱动基因的突变情况,系及突变负荷提供有效工具,为临床医生制订NSCLC患者的精准诊疗方案提供有力支撑。

关键词:非小细胞肺癌; 高通量测序; 精准化诊疗; 驱动基因; 基因突变

:/DOI10.3969.issn.1673-4130.2020.10.003j

()文章编号:1673-4130202010-1161-06

文献标识码:A

中图法分类号:R734.2

Alicationofhih-throuhutseuenciningenemutationstudfnon-smallcelllunancerppggpqgyogc122222

YANGJinli,GEChuanYILin,ZHANGHaiwei,LINChanhai,TANGWanan,gg,gy22

CHENXia,NIANWeiiq*

throuhutseuencinasperformedon28tumordrivergenesrelatedtotheprecisiondianosisandtreat-gpqgwg

mentofnon-smallcelllunancer(NSCLC).Methods Atotalof396NSCLCsamlesfromChoninni-gcpgqgU

/DevelomentandCriticalDisordersChonineaboratorhildInectionandpgqgKyLyofCfImmunitChildren'sHositalohoninedicalUniversitChonin00014,China;y,pfCgqgMy,gqg4

2.ChonineaboratorranslationalResearchforCancerMetastasisgqgKyLyofTandIndividualizedTreatment,ChoninniversitancerHosital,Chonin00030,China)gqgUyCpgqg4

:,AbstractObective Toanalzetherelationshietweengenemutationsandclinicalcharacteristicshih-ypbgj

(/1.DeartmentoeonatoloMinistrducationKeaboratorpfNgyyofEyLyof/ChildDeveloentandDisordersNationalClinicalResearchCenterorChildHealthandpmf/DisordersChinaInternationalScienceandTechnoloooerationBaseohildgyCpfCreationofmaorgenemutations.TheEGFRhotesalsoshowedanobviousprimarndsecondaris-ggjypypyayd

,tributionamonhichthemostcommonmutantsubsetswere19delandL858R,accountinfor45.00%andgwg

,,versitancerHositalwerecollectedandgenesincludinGFR,ALK,ROS1,KRAS,NRAS,HRASyCpgE

,,,PIK3CA,TP53PTEN,BRAFHER2RET,METwereanalzedbih-throuhutseuencin.Results EGFRyyhggpqg

,enemutationaccountedfor35.35%ofthetotalnumberofgenemutationsdetectedandthefirst5genesg

,withthehihestmutationfreuencccountedfor63.%ofthetotalmutationwhichshowedanobviousa-gqyag

)。cstc2017xl130048、cstc2017xl130026jjjj

*

;基金项目:重庆市自然科学基金先锋科学基金项目(重庆市科研机构绩效激励引导专项(cstc2019c-xfkxX0003)cstc2018xl130057、jyjjj

杨静丽,女,医师,主要从事新生儿肿瘤分子机制及检测相关研究。 作者简介:

1166.

]:杨静丽,葛闯,易琳,等.高通量测序在非小细胞肺癌基因突变研究中的应用[国际检验医学杂志, 本文引用格式:J.2020,41(10)1161-

·1162·

,,,国际检验医学杂志2020年5月第41卷第10期 IntJLabMedMa020Vol.41No.10y2

,L858RmutationwasoftenaprimarutationwhileT790Mwith19delco-mutationwasoftenanacuiredymqmutation.Thedetectionrateofothermulti-enemutationsinEGFRmutantsamleswassinificantlowergpgyl

,thanthatinEGFRunmutatedsamlesossiblGFRgenemutationinhibitedothergenesfrommutatin.ppyEg

,41.43%,resectivel.The19delmutationL858Rpointmutationand20insofEGFRgeneweremostlinlepyysg

,mutationswhileT790M,G719X,S768IandL861Qwereoftenaccomaniedbo-mutations.T790Mwithpyc

,tionshifgenemutationloadandprovidemoregeneticinformationofpatientstomakeaccuratedianosispog

andtreatmentplans.

:;;;Keordsnon-smallcelllunancer hih-throuhutseuencin accuratedianosisandtreatmentgcggpqggyw

Conclusion Hih-throuhutseuencinanefficientletectthemutationsof28kindsofdrivergenesrelat-ggpqgcyd

,edtotaretedtherainNSCLCpatientswhichcanprovideaneffectivetoolforstudinheinternalrela-gpyygt

; drivergene genemutation

肺癌的发病率和病死率均居我国恶性肿瘤的首位。非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80%~

平5%[1]

,越来越多的肿瘤靶向基因从基础研究走向临床应。人们对NSCLC的分型认知已经迈入分子水用,如吉非替尼、埃克替尼、奥希替尼等酪氨酸激酶抑

制剂([2

]T克唑替尼KI)的靶、点色瑞替尼基因表、皮劳拉替尼等的靶点基因生长因子受体(EG-

间变性淋巴瘤激酶R),

(靶点基因高通量测序是一种大规模平行测序技术BRAF、MEAKLK等)

。

,达拉非尼联合曲美替尼的,可用作

基因点突变、插入缺失突变、基因重排和基因拷贝数

突变等多种突变类型的分析。临床上,高通量测序可以针对药物的特定靶向基因进行深度测序,从而为肿瘤患者提供更多的治疗选项[3]

。本研究对396例

高通量测序SCLC患者的外周血循环肿瘤,以分析不同类型基因突变与临床病理资DNA(ctDNA)进行料的关系,旨在为疾病的精准化诊疗提供基因水平的参考。

资料与方法.1 一般资料年1月至2018年 收集重庆大学附属肿瘤医院10月396例NSCLC患者的标20本17。

标本类型为外周血。男性患者例,年龄30~86岁。所有病例2均55例,女性患者经组织病理学检14查

1确诊,其中腺癌患者293例,鳞状细胞癌患者103例。本研究获得该院医学伦理学委员会批准,临床资料及标本采集均获患者知情同意。

.2 仪器与试剂分析纯)、血浆游离NA提取试剂盒购 无水乙醇(

自中国天根公司;

高速冷冻离心机购自韩国自中国其林贝Ge尔ne公sp

e司ed公司;混匀仪、涡旋振荡器购;恒温金属浴购自德国orf公司;Qubit荧光计、磁力架购自美国Epp

en-isherScientific公司;

生物安全柜购自中国T海he尔rm公o

司;超微量分光光度计购自美国NanoDrop公司;

m5o00荧光定量FisherScienPtCifiR仪、数字c公司;碎仪购自比利时BioPrCuR仪购自美国tor􀆿

Pico超声Th波er破-国北京吉艾姆公D司ia;g

生en物ode公司p;真空浓缩仪购自中分析仪购自中国Biop

tic公司;.3N e方法

xtSeq5

50基因测序仪购自美国Illumina公司。m.L3.1 核酸提取离心管底,加 吸取入5mL500制μ备L血Pr浆ote(i1n0asmeLK于全血50

,

0000r/min离心10min,取上清;8/0sm,in瞬,离收;集60上℃清水血浴浆,3)0,加min入;B000rmin加uf入ferBu1ffeMrix2,,

混离心

混匀匀提吸附柱中进行抽吸5~30s,冰浴5min。;然后加入将冰浴后溶液加入真空泵抽空抽吸;加入600μLBuffer3,

真无水乙醇,真空抽吸750μL;B将吸附柱放入干净套管uffer4,真空抽吸;加入,710/min离心3min

,丢弃套管。将吸附柱装入0μ0L

0

干.5,1mmL收in;集悬管空中滴,加开盖,室温静置80μLmNF-Wat1e0r

,m室in温;56洁净的静℃置烘

5液in;再;14次00滴0r加/m5i0n离心μLN1F-min,保留约,室温75静μL置D5NmA溶

;取4300μ0Lr/DmNiAn离心原液以1mQinub,i保留约Watert荧光计评估核酸120μLDNA溶液in

。质量及水平。剩余使用可冻存于

-DNA原液如不立即.830.2℃冰箱。

文库构建及测序 将400新的DNA剪切专用Covaris管中进行剪切后ng的移至DNA原液转,

转移至A1”.5mL;连离心管中并纯化;接接头序列并用进行AMPDuNreA末端修复,加“操作XP磁珠纯

化连接后的扩增体系DNA标本;在,0.2配制PCR混匀、mL低吸附用增后的DNA文PC库R扩增,磁珠纯化扩;Qubit荧AMPC光计PuR管中

测re定X文

P

库DCNRA水平,吸取管。≤600ng文库的P将文DN库A至新的浓缩至o4c5k℃环境下,入配制好的BlMix溶液、P5Blocker、P750Bμ.2mloLc,

ke加L各1μL,PCR扩增;捕获和洗脱杂交的文库Dr

磁珠进行纯化CR扩增上一步得到的文库;库DNA水平应Q≥ub1it荧光计测定文库DNA,并用DAMNAP水平ureN,

XA文P

;

行稀释,稀释液的终水平为ng/μ

L。1.根5量文库DNA有效水平。使用Nn据egx/文tSμ

eL库q;DqPNCA水平进R精确定仪进行高通量测序。

5

50基因测序811F2131N11r1111D7dFP,,,国际检验医学杂志2020年5月第41卷第10期 IntJLabMedMa020Vol.41No.10y2

·1163·

1.3.3 生物信息学分析 使用测序数据质控软件

_q_n使用kcew2去除下机数据中质量较低的数据;p

)序列比对软件BWA(版本V将原始数据与人0.7.12V0.1.22标记测序数据中的重复reads并进行去重;

_V使用samtools0.1.19将比对文件SAM格式转换为B并用SAM格式,ambamba_V0.5.8对BAM文件进行排序,用GenomeAnalsisTK_V3.8局部重比y

对及碱基质量重校正,过滤掉突变频率0.5%以上的

比对质量值≥985%,5%。99.50%的标本文库复杂

度>2测序数据质量可靠。经生物信息学分析比5%,对,排除非目标区突变、低质量突变、胚系突变及同义突变。

2.2 NSCLC患者外周血基因突变分布 396例NSCLC患者的28种ctDNA基因谱表明,67.42%的标本至少检出1个基因突变类型,其中EGFR基因突变所占比例最高为3其余的主要突变基因包5.35%,、R、P括KRAS(9.85%)OS1(7.58%)IK3CA(、A、R、T5.56%)LK(5.56%)ET(4.80%)SC1(、、、4.04%)PTEN(3.79%)HER2(3.28%)BRAF(、、。基因突2.78%)DDR2(2.78%)MET(2.27%)变检出率最高的前5个基因占比为6前13.%,0个基因占比为8表现出明显的主基因突变聚集2.58%,现象。见图1。

EGFR基因亚型同样呈现出明显的主次分布规

、律,其中最常见的突变亚型是1分别占9delL858R,

)_类参考基因组(进行比对;使用SGRCh37amblaster

、位点。分别使用VarScan2.3、Msv_V2.6.lEx-yp

/、omeCNV_V2进行SNVIndelSV及CNV的分析。)、、_癌症体细胞突变数据库(EASCosmic83)Clinvar

20170905和SAOdbSNP150对基因突变位点进行注释。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0进行统计学分析。计数资料以例数和率表示,组间比较采用χ2检验。

、千人基因组根据dbSNP数据库(Avsn150)p()、外显子聚合数据库(10002015aullExac03_gg_a

所有比较均为双侧检验,P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果2.1 Panel设计及数据质量评估 本Panel设计检

、剩余依次是T45.00%、41.43%,790M(22.86%)

、、、G719X(3.57%)S768I(2.14%)L861Q(2.14%)c.2235_2249delGGAATTAAGAGAAGC

(、、23.81%)c.2236_2250del(20.63%)c.2235_

(,。在6其他(20ins1.43%)17.14%)3例19del突变标本发现1占比最高的前5位依次是:5种亚型,(、_22249del12.70%)c.2239248TTAAGAGAA

、G>C(9.52%)c.2240_2257delTAAGAGAAG

,其余少见亚型占2CAACATCTC(9.52%)3.81%,同样表现出明显的主亚型聚集现象。见表1。

FGFR1、FGFR2、AKT1、PTEN、SMO、KIT、PDG-FRA、DDR2、RB1、TSC1、MEK1、BRCA、TET2、DN-短MT3A、GNA11共28种肿瘤驱动基因的点突变、片段缺失突变和短片段插入突变等基因突变类型,其

测EGFR、KRAS、HRAS、NRAS、PIK3CA、ALK、

ROS1、BRAF、HER2、RET、TP53、MET、MAP2K1、

、、EGFR、FGFR1FGFR2MET、KIT5个基因额外检测基因拷贝数突变。

度为1比对率>9高通量测序区域去重后平00%,9%;

中ALK、ROS1、RET3个基因额外检测基因重排;

每例标本产生的数据量约为3G,测序区域覆盖

100%测序标本的测序质量值为Q20≥90%,Q30≥

均测序深度大于20最低测序深度1200X,00X。

图1 NSCLC患者外周血28种基因突变谱

表1 EGFR19号外显子缺失突变亚型分布

核苷酸突变

_2c.2235249delGGAATTAAGAGAAGC

氨基酸突变

_A.E746750delp

_7.74650delp

_7.74550delp

频数(n)15138622111

_2c.2236250del_2c.2235249del

_2c.2239248TTAAGAGAAG>C

_2c.2240257delTAAGAGAAGCAACATCTC_2c.2240257del_2c.2237251del

_A.L747750delinsPp

_P.L747753delinsSp

_7.74753delp

_7.74651delp

_7.748delp

_2c.2237255AATTAAGAGAAGCAACATC>T

_2c.2236244del

_S.E746752delinsVp

_P.E746753delinsVSp

_T.E746751delinsIp

_2c.2237257AATTAAGAGAAGCAACATCTC>TCT

_2c.2235252GGAATTAAGAGAAGCAAC>AAT

·11·

,,,国际检验医学杂志2020年5月第41卷第10期 IntJLabMedMa020Vol.41No.10y2

续表1 EGFR19号外显子缺失突变亚型分布

核苷酸突变

_2c.2237253AATTAAGAGAAGCAACA>TTGCT

氨基酸突变

_T.E746751delinsVAp

_T.L747751delp

_.T751I759delinsNp

频数(n)1111

_2c.2238252delATTAAGAGAAGAAC

_2c.2252276CATCTCC-GAAAGC-CAACAAG-GAAAT>A

_2c.2212213insTTAAAATTC-CCGTCGCTA

.V738delinsVKIP-VAIp

2.3 NSCLC患者28种基因突变的关系 本研究结果表明,EGFR突变亚型存在明显的互斥突变与伴随突变现象。19del缺失突变、L858R点突变和20ins3

个亚型常表现为互斥突变。在63例19del突变病例

,可能是E8.26%、5.79%)GFR基因突变抑制了其他基

。因发生突变。见图3

的检出率(分别为27.27%、12.40%、13.22%、10.74%、

中,仅有亚型突变2例分别携带;58例L858RG突变病例中719X和L8,6也仅有1Q,

其余均为单变则多表现在罕见突变亚型上768I共突变;2例20ins病例同样为单突变1例携带。伴随突,如他突变位点;发现有2例携带S768I突变5例,1例携带G7312例9X突T7变90病M突变

全部都伴随其例中,

9del与LM突变总是伴随L861Q突变。

T790主要是858R2个亚型,且EG两F种R敏感突变,

伴随突变形式与患者的靶向治疗密切相关。32例T790M突变标本中,象8例患者经靶向治疗并出现一代,其伴随突变是19del;14例患者未EGF经R-靶T向KI耐药现

治疗,

其伴随突变是L858R。获得性T790,可能是因为NSCLTC79患者在靶0M突变的患者发生基因突变的概率大于原发性M突变的患者统计分析结果向治疗过程中,肿瘤细胞会在靶向药物的打击下进一步发生克隆演进,导致更多基因发生突变,形成旁路激活效应,最终导致靶向药物耐药。见图2。

注:A表示T790M获得性突变;B表示T790M原发性突变。

图2 T790M突变状态下的多基因突变分布

.4 阳性标本基因突变分析本中,检测出存在其他基因突 变14类0例型的EG占FR突变标

的占56例无47.2E7G%F,R提突变标本中示,

检出其他基因突变类型36.43%;

NSCLC患者的不同基因间同样

存在强烈的基因突变互斥现象(χ2

的概率显著低于GF无R=4.33,P=0.038

具体分析发现,E突变标本发生其他类型基因突变

)。EGFR突变的标本,如突变患者中的检出率分别为LK、RET、PTEN、DDR2、MET等基因突变在KRAS、、5.E88GF%R.92%、0.00%、3.92%,明显小于无9.80%E、1G3F.R73突变患者中%、

注:A表示EGFR突变标本中多基因突变分布;。

B表示无EGFR突变标本中多基因突变分布图3 EGFR突变及未突变状态下的多基因突变分布

2.5 基因突变与临床病理特征的关系患者组织类型、组织分期 考察常见驱

动基因突变与、性别、年龄、吸(烟史的计40学.96意%义),(P显著高于鳞状细胞癌关系。腺癌标本E<0.05);女性患者(G1E9FG.R突变4F2R%突),变差异有统检出率(检出率

(5(P1.<077%.0)5显著高于男性);无吸烟史(2的6.患27者%)E,G差异有统计学意义FR突变检出率有统计学意46.73%),明显高于有吸烟史的患者义(期)患者GFRP<0.05的E突变检出率((36);.5晚3%期)患(23.86%)

,差异,高者于(不早低期于(低3B于期)

3B6无统计学意义515.29%),差异有统计学意义(P<0.05岁与≥岁的患者比较,(P=0.97EGFR突变检出率)差;<异

群同样为无吸烟史的女性晚期腺癌患者)。KRAS基因突变的特征人

,但因为统计

人群的规模有限,差异无统计学意义(P>0.05续扩大样本量。见表),需继表2 主要基因突变与临床病理特征2。

(n)

项目n高通量测序检出突变

P1

E突变

GFRP2

K突变

RASP3

组织类型 0.55

0.01

0.74

腺癌 293

20<鳞状细胞癌103

607

12性别 0.382002<0.01181男 260.04

女

151

169

773

318

S1122A3,,,国际检验医学杂志2020年5月第41卷第10期 IntJLabMedMa020Vol.41No.10y2

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续表2 主要基因突变与临床病理特征(n)

项目年龄 <65岁 ≥65岁分期 低于3B吸烟史21

9

231165

151116

n高通量测序检出突变

P1

EGFR突变

P2

0.97

KRAS突变

P3

0.80

、G719X、S768IL861Q等亚型则常常有共突变现象,

表现出显著的伴随突变效应。本研究进一步丰富了

]7

程亚楠等[关于EGFR19del与L858R呈现出明显的互斥现象的理论,而所有T790M突变都与上述2

0.30

81593

22172

个突变位点伴随出现。

0.010.011.00

不低于3B375258

0.41

137<0.01

37病情有发展前的2.2个月即可在血浆中检测到T790M突变。本研究表明,T790M伴随L858R突变常常是原发性突变,T790M与19del共突变则常是获T790M是第一代EGFR-TKI药物的耐药突

[8]9]

,变[但Z在影像学检查显示HENG等研究表明,

0.06

有 14无

19979

1123973

21

注:P1表示高通量测序检出突变统计值;P2表示EGFR突变统计值;P3表示KRAS突变统计值。

讨 随着全球生物医药技术的飞速发展 论

,

以肺癌为代表的恶性肿瘤的诊治已进入了以生物信息大数据为

基础的精准医疗时代[

4

]本的核酸序列进行大规模的检测。高通量,测快速得到患者个体序技术可以对标化的全景式基因信息谱,为恶性肿瘤的精准化诊治提供支撑,并以其检测通量大、信息全面、灵敏度高的优

势逐步从实验室研究阶段迈入临床应用阶段[

5

]高通量测序临床应用方面,以美国纪念斯隆凯特琳癌。在症研究中心的Medicin公司的FMoSunKd-IatMioPnAOCneT和美国CDx最为F引ou人nd关ati注on

。

018年,

中国国家药品监督管理局先后批准燃石医学、诺禾致源、世和基因及艾德生物的,有效地规范了肿瘤诊断领域的临4款肿瘤高通量测序检测试剂盒床选择。本研究对美国国立综合癌症网络推荐的个基因及20个NSCLC常见的驱动基因进行高通量8

测序,研究了患者中这些基因突变的特征。

根据变图谱,发现396例EGFNRSC的LC患者的测序结果绘制基因突

突变检出率为亚人群中NSCLC人群35.35%,与东出率一致[6

癌患者中的检出率为。从组织类型看30%,~E4G0F%的R基因突变在肺腺

EGFR突变检

]的检出率为40.肺鳞状细胞癌患者中细胞癌19.42%,高于目前研究报道关96%;于肺鳞状术相对于传统检测方法的灵敏度优势

EGFR突变的检出率,也反映出高通量测序技[6]

无论是NSCLC患者的多基因之间,还是。E同时发现,

集现象,主要表现G是FR亚型之间,均有明显的突变聚基因突变检出率最高的前82.58%,EG10个基因占高通量测序检出突变总数的FR基因的19del与个亚型占据L858R突变

基因的19del缺失突变EGFR突变的、L858R86点突变和.43%。同时,EGFR

型上大多为单突变,很少有与其他基因亚型发生共突20ins3个亚变的现象,表现出明显的互斥突变效应。T790M、

得性突变。获得性的概率大于原发性T790M突变的患者发生基因突变

N物的打击SCLC患者靶向治T疗79过0M突变的患者,

可能是因为程中,肿瘤细胞会在靶向药下进一步克隆演进,导致更多基因发生突变,最终形成旁路激活。突变的频率显著低于无EGFR突变标本发生多基因A率分别为LK、RET等基因突变在EG如EFGR突变标本,FR突变患者中的检KRAS出、

F因为R突变患者中的9.80%、1EGFR基因突变抑制了其他基因发生突变237..2773%%、、152.8.480%%,、明13显.2小2%于,

无可能是EG-。本研究中的5ALK在NSCLC中的突变检出率为

人群.56%究证实了第一代AL,

与K张突变检出率相绪超等[10

]报道的一致。3%~7%的中国肺癌[11]

研ALK抑制剂克唑替尼在SOLOMOAN等

LK阳性

晚期药机制NS研CL究C一线治疗中的作用。在对克唑替尼的耐中发究中第二代,现,ALK酪氨酸激酶结构域获得性

突变约占20%ALK扩增占8%[12]。ASCEND-4研

化疗组的CLC的无进展生存期长达ALK抑制剂色瑞替尼一线治疗8.1个月。无论有无A1L6K.6个月,ALK阳

性NS显著优于基因激酶区域的

2次突变现象,

患者都能从色瑞替尼治疗中获益[13]

目前第三代。,靶向药物已处于临床试验阶段ALK抑制剂劳拉替尼已在欧洲获批上市。

要见于BR黑AF在恶性肿瘤中的突变检出率约为色素瘤(750%)、甲状腺乳头状癌(380%%,

主[14~

]

本研0%)究,而在中等[15]报道的中国人群BRNSACFLC中的突变检出率为突变检出率为2.783%%~,与5张%海燕。变类型4中.4,%的突变检出率基本一致。

1B5RA号外显子的密码子F基因突约90%的BRAF突变是第

60非0E突变。突变型肺癌患者V600E突K变RO6型N00处的缬氨酸被谷氨酸替代,

即V等[16

]认为在无针对性的治疗时,肺癌患者的预后优于,提示V600E良的影响因素。VBRAF和MEK靶点抑制剂达拉非尼J6O0S0HE可能是I等

认NS为CL联C预后不

[17

]合使用、曲美替尼对携带V600E的间质NSC-L上皮细胞转化在C具有良好治疗效果。

近年来,,其中患者治疗的新靶点已经得到越MET基因第NSCLC中的临床应用是研究的热点NSCLC14号外显子跳跃突变可作为322·1166·

,,,国际检验医学杂志2020年5月第41卷第10期 IntJLabMedMa020Vol.41No.10y2

18]

。ME来越广泛的证实[T基因第14号外显子跳跃

例中国N发现MESCLC患者的基因信息,T基因第

14号外显子跳跃突变仅占腺癌患者的0.9%。MET基因的靶向药物多为腺苷三磷酸的选择性竞争抑制

突变总发生率为3%~6%,多发于肺肉瘤样癌(22%)

[[]19-20]21

。但L和肺腺癌(分析了93%~4%)IU等68

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剂,通过抑制MET的活性进而阻止下游相关激酶的

磷酸化,从而实现对肿瘤细胞增殖、转移的。

[]22YAP等研究了21例MET基因第14号外显子突变的晚期N经克唑替尼靶向治疗,部分缓SCLC患者,

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解率为4疾病控制率为5显示了良好的临床4%,0%,疗效。

结本研究 论

采用高通量测序技术对NSCLC患者种靶向治疗相关驱动基因的突变信息进行全景检测28,证实EGFR基因亚型间的分布规律及EGFR基因对其他基因突变的抑制作用,为临床医生制订患者的精准诊疗方案提供了有力的保障。从N更SC高L层C面上看,高通量测序技术的临床应用可以加快对未知病因或病因复杂的家族性肿瘤的研究与评估,也有利于发现新的致病基因,使肿瘤的预防更精准、有效。参考文献

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