２０１６年第４期 食品工程 ５９ １２月出版 ＦＯＯＤ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ 高效液相色谱法测定固体饮料中 一氨基丁酸含量 Ｈ ＰＬＣ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｙ－ａｍｉｎｏ ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｂｅｖｅｒａｇｅｓ 吴 蓉 周 玮何慧园 （江苏省产品质量监督检验研究院，江苏南京２１００００） ＷＵ Ｒｏｎｇ ＺＨＯＵ Ｗｅｉ ＨＥ Ｈｕｉｙｕａｎ （Ｊｉａｎｇｓｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｑｕａｌｉｔｙ ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００００，Ｃｈｉｎａ） 摘要建立了一种快速准确地测定固体饮料中＾ｙ一氨基丁酸含量的高效液相色谱分析方法：采用丹磺 酰氯（Ｄａｎｓｙｌ—Ｃ１）为柱前衍生化试剂，色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ—Ｃｌ８，流动相为２５ ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸钠 （ｐＨ＝６．０）和乙腈的混合溶液（体积比为６８：３２），流速为１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３０℃，等度洗脱，紫外检 测波长２１６ ｎｍ。结果表明，该方法的线性范围为０．００２ ５ ｍｇ／ｍＬ一０．１ ｍｇ／ｍＬ，Ｒ。＝０．９９９ ５，线性关系良好， 检出限２．５１４ ｎｇ，平行试验６次，＾ｙ一氨基丁酸质量浓度的相对标准偏差（ＲＳＤ）为０．８９％，３个不同浓 度的加标回收率在９６．００％～１０２．３９％之间，回收率相对标准偏差（ＲＳＤ）在０．８０％ ２．８７％之间。与传统 的试验方法相比，该方法具有基线稳定，灵敏度高，线性范围广，回收率高及重现性好等特点。 关键词 固体饮料；＾ｙ一氨基丁酸；高效液相色谱；丹磺酰氯 Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａ ｆａｓｔ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ＾ｙ－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ（ＧＡＢＡ）ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｌｉｄ ｂｅｖｅｒａｇｅｓ，ｂｙ ｐｒｅｃｏｌｕｍｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄａｎｓｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ（Ｄａｎｓｙｌ－Ｃ１）．Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｏｎ ａ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃｌｓ ａｔ ３０ ｏＣ ｕｓｉｎｇ ２５ ｍｍｏｌ／Ｌ ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ：ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（ｐＨ＝６．０１ ＝６８：３２ ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ａｔ ａ ｌｆｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ ｍＬ／ｍｉｎ，ｉｓｏｃｒａｔｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ，ｉｎｓｐｅｃｔｅｄ ｂｙ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ａｔ ２ １ ６ ｎｍ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ －ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ（ＧＡＢＡ）ｈａｓ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ａｔ ０．００２ ５ ｍｇ／ｍＬ一０．１ ｍｇ／ｍＬ，ｔｈｅ ｐｅａｋ ａｒｅａ ｗｉｔｈ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｔ ０．９９９ ５，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｗａｓ ２．５ １４ ｎｇ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ （ＲＳＤ）ｏｆ ｔｈｅ ｍａｓｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｘ ｔｉｍｅｓ ｗａｓ ０．８９％ｆｏｒ —ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ（ＧＡＢＡ）．Ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａ— ｔｉｏｎｓ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９６．００％一１０２．３９％．ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ（ＲＳＤ）ｗａｓ ０．８０％一２．８７％．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌａ ｍｅｔｈｏｄｓ，ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｉｓｏｃｒａｔｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ，ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ａｎｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ ｒｅｇｅｎｔ，ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｓ ａ ｓｔａｂｌｅ ｂａｓｅｌｉｎｅ，ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｗｉｄｅｒ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ，ｈｉｇｈｅｒ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ｓｏｌｉｄ ｂｅｖｅｒａｇｅｓ； －ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ；ＨＰＬＣ；ｄａｎｓｙｌ—Ｃｌ 中图分类号：ＴＳ２７８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—６０４４（２０１６）０４—００５９—０５ ＤＯＩ：１０．３９６９６．ｉｓｓｎ．１６７３—６０４４．２０１６．０４．０１６ 一氨基丁酸（＾ｙ—ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ，ＧＡＢＡ）， 微生物中均有存在。ＧＡＢＡ对哺乳动物的中枢神经 又名氨酪酸或哌啶酸，是一种非蛋白质组成的天然 系统具有抑制作用，能参与多种代谢活动，具有重 氨基酸，在自然界中的分布极为广泛，在动植物及 要的生理功能。ＧＡＢＡ在人体内作为神经传导的主 吴蓉，女，１９９０年出生，２０１４年毕业于南京农业大学环境 要介质，具有促进血管扩张降血压、促进睡眠增强 工程专业，硕士，助理工程师。 记忆力、镇静神经抗焦虑、预防及治疗癫痫病、加 收稿日期：２０１６—１１－１６ 强脑代谢预防老年痴呆症等作用。在上世纪８０年 食品工程 ２０１６年第４期 １２月出版 代，日本利用植物富集法首次研发了ＧＡＢＡ茶功能 性食品。随后，富含ＧＡＢＡ的发芽糙米实现了商业 化生产。目前，ＧＡＢＡ已被广泛地应用于饮料、果 １．３方法 １．３．１标准溶液的制备 准确称取０．１ ｇ（精确至０．０００ １ ｇ）ＧＡＢＡ，用 酱、糕点、饼干、调味品等食品中，开发出各种适 超纯水溶解并定容至１０ ｍＬ，经超声波溶解后，振 合不同人群及年龄段的产品，具有极其广阔的发展 荡混匀，配制成质量浓度为１０ ｍｇ／ｍＬ的标准溶液。 前景。 用超纯水按上述步骤将１０ ｍｇ／ｍＬ的标准溶液逐级 目前国内外关于ＧＡＢＡ的测定方法主要有比色 稀释成０．０２５ ｍｇ／ｍＬ、０．０５ ｍｇ／ｍＬ、０．２５ ｍｇ／ｍＬ、 法、氨基酸分析仪法、薄层扫描法、放射性受体 ０．５ ｍｇ／ｍＬ、１ ｍｇ／ｍＬ的标准溶液，备用。 法、高效液相色谱法等。由于ＧＡＢＡ对电化学、紫 外、可见光及荧光的响应强度低，直接测定非常困 难，需要将其衍生化处理后再测定，因此，柱前衍 生一高效液相色谱法已成为测定ＧＡＢＡ的主要方 法。近年来，常用的ＧＡＢＡ衍生化方法主要有法丹 磺酰氯（ＤＮＳ）法、２，４一二硝基氟苯（ＦＤＮＢ）法、 ６一氨基喹琳基一Ｎ一羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯 （ＡＱＣ）法、邻苯二甲醛（ＯＡＰ）法。由于ＦＤＮＢ毒 性太强、灵敏度低，ＡＱＣ价格昂贵，ＯＡＰ反应不稳 定且数据重现性差，因此采用ＤＮＳ作为ＧＡＢＡ测 定的衍生化试剂。与传统的ＤＮＳ法相比，本试验优 化了ＤＮＧ的使用浓度，节约了成本，提高了回收 率。本文旨在以ＤＮＳ为衍生化试剂，建立一种能够 快速、准确地测定固体饮料中ＧＡＢＡ含量的高效液 相色谱分析方法。 １材料与方法 １．１材料与试剂 固体饮料，南京市生产厂家。 硼酸，分析纯，南京化学试剂一厂；丹磺酰 氯，纯度Ｉ＞９８％，梯希爱（上海）化成工业发展有 限公司；冰乙酸，优级纯，南京化学试剂有限公 司；氢氧化钠，分析纯，国药集团化学试剂有限公 司；乙酸钠，分析纯，苏彤化学试剂有限公司；乙 腈，色谱纯，德国默克股份两合公司；甲醇，色谱 纯，德国默克股份两合公司；水，超纯水；＾ｙ一氨 基丁酸，纯度＞１９９％，ＳＩＧＭＡ公司。 １．２仪器与设备 ２６９５高效液相色谱仪，美国Ｗａｔｅｒｓ公司； ２９９６二极管阵列检测器，美国Ｗａｔｅｒｓ公司；ＸＳ ２０５ＤＵ电子分析天平，美国梅特勒一托利多仪器公 司；ＸＷ一８０Ａ混合涡旋仪，上海青浦泸西仪器厂； ＳＢ２５—１２ＤＴＤＮ超声波清洗机，宁波新芝生物科技 股份有限公司。 １－３．２样品溶液的制备 准确称取０．０５ ｇ一０．５０ ｇ粉碎试样（精确至 ０．０００ １ ｇ），用纯水溶解并定容至１００ ｍＬ，经超声 波溶解后，振荡混匀，用孔径０．２２ 滤膜过滤， 收集滤液，作为衍生化样品溶液，备用。 １．３．３硼酸缓冲溶液的制备 准确称取２．４７ ｇ硼酸（精确至０．０００ １ ｇ），加 纯水８０ ｍＬ超声溶解，用氢氧化钠溶液将ｐＨ调至 ｌＯ．２，并用水定容至１００ ｍＬ，配制成０．４ ｍｏｌ／Ｌ的硼 酸缓冲溶液。 １．３．４ ＤＮＳ衍生液的制备 准确称取１５ ｍｇＤＮＳ，用乙腈溶解并定容至１０ｍＬ， 经超声波溶解后，振荡混匀，配制成１．５ ｍｇ／ｍＬ的 ＤＮＳ溶液。避光保存，现配现用。 １．３．５柱前衍生化反应 准确吸取１．３．２中的样品溶液５０肛Ｌ，加入１５０／ｘＬ ０．４ ｍｏＦＬ硼酸缓冲溶液和３００／．ｔＬ １．５ ｍｇ／ｍＬ的ＤＮＳ 衍生液，涡旋混匀，静置反应２ｍｉｎ后，过孔径０．２２ ／ｘｍ滤膜，进样。标准溶液同步衍生化，步骤同上， 标准溶液衍生后的质量浓度分别为０．００２ ５ ｍｇ／ｍＬ、 ０．００５ ｍｇ／ｍＬ、０．０２５ ｍｇ／ｍＬ、０．０５ ｍｇ／ｍＬ、Ｏ．１ ｍｇ／ｍＬ。 １．３．６高效液相色谱分析条件 色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ—Ｃｌ８（４．６／ｚｍ× １５０ ｍｍ，５／ｘｍ）；流动相：流动相Ａ为２５ ｍｍｏＶＬ 的乙酸钠溶液，用２％的醋酸调ｐＨ值至６．０±０．２； 流动相Ｂ为乙腈；等度洗脱，其中Ａ：Ｂ＝６８：３２； 流速１ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温３０℃；进样量１０／ｚＬ；检测波 长２１６ ｎｍ。 １．４数据分析 ＨＰＬＣ色谱图采用Ｗａｔｅｒｓ Ｅｍｐｏｗｅｒ工作站采集， 使用Ｅｍｐｏｗｅｒ ２ Ｓｏｔｆｗａｒｅ软件对试验数据进行统计 分析，Ｏｒｉｇｉｎ ８．０进行绘图制作。 ２结果与分析 ２０１６年第４期 ｌ２月出版 吴蓉等：高效液相色谱法测定固体饮料中＾ｙ一氨基丁酸含量 ，６１ ２．１ 流动相的选择及优化 依据相关文献报道，ＧＡＢＡ的测定可以采用乙 酸钠一乙腈或磷酸缓冲溶液一甲醇为流动相，但 其方法均采用梯度洗脱程序，不仅基线不稳而且 洗脱时间长。因此，本试验在现有的基础上进行 改进，采用等度洗脱，以２５ ｍｍｏｌ／Ｌ的乙酸钠溶液 （ｐＨ＝６．０）一乙腈为流动相，该方法准确度高，且 基线噪音小，能达到有效地分离效果。试验结果表 明，当乙酸钠溶液与乙腈的体积比调至６８：３２，可 以在１５ ｍｉｎ内有效地分离ＧＡＢＡ，ＧＡＢＡ标准溶液 色谱图如图１所示，保留时间为６．４ ａｒｉｎ，分离效果 良好。 ２．０ １．５ 黑 兽 ０．５ ０．０ ０ ２ ４ ６ ８ １０ 时间，ｍｉｎ 图１ ＧＡＢＡ标准品色谱图 ２．２最大吸收波长的确定 为了提高方法的灵敏度，选择合适的检测波长 至关重要。本试验采用０．１ ｍｇ，ｍＬ的ＧＡＢＡ标准溶 液，按１．３．５进行衍生化反应，与没有添加ＧＡＢＡ 标准溶液的空白液做对比，结果见图２。经光谱分 析后，ＧＡＢＡ有３个最大吸收波长。同一浓度不同 波长下的ＧＡＢＡ标准品色谱图如图３所示，由响应 强度分析可得，取ＧＡＢＡ衍生物的最大吸收波长 ２１６ ａｍ为最适检测波长。 ２．３ ＧＡＢＡ的定性分析 在１．３．６的色谱条件下，采用１．３．５的方法，对 没有添加ＧＡＢＡ标准溶液的空白液、样品溶液及标 准溶液分别进行衍生化反应，色谱图见图４。由图 ４可知，ＧＡＢＡ的保留时间为６．４ ｍｉｎ，基线平稳， 分离效果好，杂质峰对目标物的测定无干扰。 波长／ｎｍ 图２ ＧＡＢＡ衍生物的紫外光谱图 ２Ｏ １５ ０ 蚕１疆 ．０ 唇Ｏ５ ００ ０ ２ ４ ６ ８ ｌＯ 时间／ｍｉｎ （ａ）２１６ ａｍ波长下ＧＡＢＡ标准品色谱图 时间／ｍｉｎ （ｂ）２４７ ａｍ波长下ＧＡＢＡ标准品色谱图 ６２ 食品工程 ２０１６年第４期 ０Ｉ２０ ０．１５ 餐 佃 ０．０５ ０ ２ ４ ６ ８ １０ 时间／皿ｉｎ （ｃ）３３２ ｎｍ波长下ＧＡＢＡ标准品色谱图 图３不同波长下ＧＡＢＡ标准品色谱图 １２月出版 ２．５ ２．０ １・５ ｛赵 嘿 撂１．０ ０ｌ５ ０．０ ０ ２ ４ ６ ８ １０ 时间／珥ｉｎ 图４空白衍生液（Ａ）、标准品（Ｂ）和样品（Ｃ）的色谱图 ２．４标准溶液曲线的绘制 将质量浓度分别为０．０２５ ｍｇ／ｍＬ、０．０５ ｍｇ，／ｍＬ、 ０．２５ ｍｇ／ｍＬ、０．５ ｍｇ／ｍＬ、ｌ ｍｇ／ｍＬ的ＧＡＢＡ标准溶 液按１．３．５进行衍生化反应，在１．３．６的色谱条件下 测定，以峰面积为纵坐标ｌ，，衍生后标准溶液质量 浓度为横坐标Ｘ（ｍｇ／ｍＬ）绘制标准曲线，所得线 性回归方程为Ｙ＝６．７４１ １×１０６Ｘ一７ ９７０．３，回归系 数Ｒ ＝０．９９９ ５。结果表明，ＧＡＢＡ的质量浓度在 ０．００２ ５ ｍｇ／ｍＬ～０．１ ｍｇ／ｍＬ之间时，利用本试验方 法测定的结果呈现良好的线性关系，以３倍信噪比 （５，Ⅳ＝３）计算检出限为２．５１４ ｎｇ，标准曲线见图５。 质量浓度／ｍｇ・ｍＬ－ 图５标准曲线线性方程 ２．５精密度试验 对同一种固体饮料进行平行试验共６次，计算 样品中ＧＡＢＡ的平均值、标准偏差及相对标准偏差 ２０１６年＝第４期 吴蓉等：高效液相色谱法测定固体饮料中 一氨基丁酸含量 ，６３ ｌ２月出版 （ＲＳＤ），试验结果见表１。由表１可知，ＧＡＢＡ衍 生物峰面积的ＲＳＤ为０．８９％，ＧＡＢＡ质量浓度的 ＲＳＤ为０．８９％。 表１精密度试验结果 序号 峰面积 ＧＡＢＡ质量浓度 ｍｇ／ｍＬ １ ３ ３０２ ２５０ ０．０５０ ２ ３ ３８２ ２Ｏ０ Ｏ．０５１ ３ ３ ３０８ ５６０ ０．Ｏ５Ｏ ４ ３ ３０８ ９１０ ０．０５０ ５ ３ ３２１ ０５０ ０．０５０ ６ ３ ３３０ ５００ ０．Ｏ５１ 平均值 ３ ３２５ ５８０ ０．０５０ 标准偏差 ２ ９５４ ０．０ｏ０４５ ＲｓＤ｛％ ０．８９ ０＿８９ ２．６回收率试验 分别称取同一质量浓度的固体饮料样品３份， 按照样品溶液中ＧＡＢＡ质量浓度的８０％、１００％、 １２０％进行加标试验，按照１．３．６的色谱条件及１．３．５ 的试验方法，测定样品中ＧＡＢＡ的质量浓度，计算 回收率、平均回收率及相对标准偏差（ＲＳＤ），结果 如表２所示。由表２可知，本试验方法的回收率在 ９６．００％一１０２．３９％之间，相对标准偏差（ＲＳＤ）在 ０．８０％ ２．８７％之间。 表２回收率试验结果 样品中ＧＡＢＡ 加标质 测得总质 回收率 平均 质量浓度 量浓度 量浓度 回收率 ５Ｄ ％ ％ ｍｇ／ｍＬ ｍｇｍＬ ｍｇ／ｍＬ ％ ４．３７ １Ｏ１．３１ １．９３ ４．２４ ９６．００ ９８．１１ ２．８７ ４．２９ ９７．０１ ４－８０ ９９．２１ ２－４１ ２．４１ ４．８４ １Ｏ０＿８０ １ｏ０．８Ｏ １．５８ ４Ｉ８８ １０２．３９ ５．３７ ９８．９３ ２．９９ ５－３９ ９９．７１ ９８．９２ ０．８Ｏ ５．３６ ９８．１３ ３结论 ＧＡＢＡ在自然界中分布广泛，但在不同物质中 的含量差别较大。本试验采用柱前衍生一高效液相 色谱法测定固体饮料中ＧＡＢＡ的含量，在传统的 ＤＮＳ法基础上，采用等度洗脱，实现样品与衍生化 试剂的快速分离；选择最优检测波长，提高灵敏 度；优化ＤＮＳ的浓度，提高回收率。ＯＡＰ作为一 种广谱的衍生化试剂，近年来被广泛采用，但其稳 定性较差，因此，本方法采用ＤＮＳ作衍生化试剂， 不仅能达到ＯＡＰ的效果，而且能弥补其存在的不 足。同时与ＦＤＮＢ法及ＡＱＣ法相比较，该方法成 本低、衍生化过程简单、检测线性范围广、精密度 高且重现性好。采用本方法测定固体饮料中的 ＧＡＢＡ，回收率范围在９６．００％ １０２．３９％之间，为 后续食品中ＧＡＢＡ的测定提供了有力的平台，也为 ＧＡＢＡ的测定奠定了应用基础。 参考文献 ［１］杨胜远，陆兆新，吕风霞，等． 一氨基丁酸的生理功 能和研究开发进展［Ｊ］．食品科学，２００５，２６（９）： ５４６－５５１． ［２］程威威，周婷，吴跃，等．高效液相色谱法测定发芽 糙米中 一氨基丁酸含量［Ｊ］．食品科学，２０１４，３５ （１２）：９８—１０１． ［３］ＰＡＴＩＬ Ｓ Ｂ，ＫＨＡＮ Ｍ Ｋ．Ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ ｂｒｏｗｎ ｒｉｃｅ ａｓ ａ ｖａｌｕｅ ａｄｄｅｄ ｒｉｃｅ ｐｒｏｄｕｃｔ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｍｙｓｏｒｅ，２０１１，４８（６）： ６６１—６６７． ［４］ＤＥＦＥＵＤＩＳ Ｆ Ｖ． 一Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓ— ｃｕｌａｒ 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