生Chin a F ood A ', 坌塑 : ::!二==:: 全自动氨基酸分析仪鉴别不同种类酱油中 氨基酸的分析研究 冯志强 ,周芳梅 ,黄永连 ,廖权丰 ,孙雯雯 ’ (1.广东省食品质量监督检验站,广州广州摘510308;2.广东省食品工业研究所, 510308) 510308;3.广东省食品工业公共实验室,广州要:采用全自动氨基酸分析仪对酱油中氨基酸的组成进行分析,结果表明酿造酱油和配制酱油中氨 基酸的组成存在一定差异;不计谷氨酸含量时,酿造酱油和配制酱油中的天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨 酸的总量有明显的差异,酿造酱油中天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸的总量约占总氨基酸的30%,配制 酱油中天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸的总量约占总氨基酸的50%;酿造酱油不含羟脯氨酸,而配制酱 油可能含羟脯氨酸。经研究表明通过对酱油中氨基酸组成成分分析可以作为区分酿造酱油和配制酱油鉴别体 系的指标之一。 关键词:全自动氨基酸分析仪;氨基酸;酿造酱油;配制酱油 中图分类号:TS207.3 文献标识码:A 文章编号:1006—2513(2013)05—0198—08 Automatic amino acid analyzer in the determination of amino acids in different soy sauce FENG Zhi.qiang ,ZHOU Fang-mei ,WANG Yong-lian。 , LIAO Quan.feng l-.Sun Wen-wen。' (1.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station,Guangzhou 5 10308; 2.Guangdong Food Industry Institute,Guangzhou 5 10308; 3.Guangdong Provincial Food Industry Public Laboratory,Guangzhou 5 1 0308) Abstract:Automatic amino acid analyzer is used in the analysis of amino acid in soy sauce.The resuhs show that the amino acid composition from fermented soy sauce and blended soy sauce are different;If glutamic acid is not counted, then serine,proline,glycine content show signiicantlfy difference in fermented soy sauce and blended soy sauce.In brewing soy sauce,total aspartic acid,serine,proline,glycine are about 30%of total amino acids,while in blended soy sauce,they are about 50%of the total amino acids.Brewing soy sauce does not have hydroxyl proline,while blen— ded one have.Research shows that the amino acid composition analysis can be used as one of the indexes to distinguish between fermented soy sauce and blended soy sauce. Key words:automatic amino acid analyzer;amino acids;fermented soy sauce;blended soy sauce. 酱油俗称豉油,主要由大豆、淀粉、小麦、 食盐经过制油、发酵等程序酿制而成的。酱油的 收稿日期:2013—07—10 通讯作者 成分比较复杂,除食盐的成分外,还有多种氨基 酸、糖类、有机酸、色素及香料等成分。以咸味 基金项目:广东省科技计划项目(2010AO10500009)。 作者简介:冯志强(1967一),男,大学本科,高级工程师,研究方向为食品质量安全研究。 为主,亦有鲜昧、香味等。它能增加和改善菜肴 的味道,还能增添或改变菜肴的色泽。我国人民 在数千年前就已经掌握酿制工艺了 J。 酱油以富含蛋白质的豆类和富含淀粉的谷 类及其副产品为主要原料,在微生物酶的催化 作用下分解并经浸滤提取的调味汁液。酱油按 生产工艺分为酿造酱油和配制酱油 J。而酿造 酱油以大豆和(或)脱脂大豆、小麦和(或)麸皮 为原料,经微生物发酵制成的具有特殊色、香、 味的液体调味品 ;配制酱油以酿造酱油为主 体,与酸水解植物蛋白调味液、食品添加剂等 配制而成的液体调味品 J。由于采用发酵工艺 产生的酿造酱油更受消费者欢迎,但其生产成 本更高,因此在行业中存在许多以非酿造酱油 冒充酿造酱油的现象,主要表现为以配制酱油 或过量添加酸水解植物蛋白液的酱油冒充酿造 酱油 。 现在没有相关的标准方法可以进行酿造酱油 与配制酱油的鉴定,虽然在国内外已有研究酿造 酱油与配制酱油化学成分的鉴别方法 J,但由于 各种酿造工艺的区别以及不法厂商仿真手段Et益 高明,故已难以采用现有的指标体系对其鉴别。 本研究采用全自动氨基酸分析仪对酿造酱油、配 制酱油、植物蛋白水解液进行氨基酸成分分析, 并对各类酱油中的氨基酸成分进行比较,确定关 键的氨基酸组分的量比关系,结合特征氨基酸, 为该类产品的质量保证、酿造酱油和配制酱油的 鉴别提供科学依据之一。同时,也能有力地打击 市场上以次充好的不良现象。 1材料与方法 1.1材料与仪器 氨基酸标准品(2.5umol/mL):美国Sigma 公司;缓冲液B1、B2、B3、B4、B5(色谱纯): 日本日立公司。 日立I ̄900全自动氨基酸分析仪;色谱柱: 日立钠离子交接树脂4.6mm×60mm。 1.2实验方法 1.2.1样品处理 称试样2.00mL酱油样品,加1.00mL15%的 磺基水杨酸沉淀蛋白,用水定容至25.00mL容量 瓶中,摇匀,取部分置于离心管中,10000r/min, 离心10min,再取1mL稀释至25.00mL容量瓶, 加水定容摇均,取一定量压滤进样。 1.2.2氨基酸标准曲线的绘制 用标准样品配制一系列不同浓度的标准液, 压滤上机测试,计算、绘制标准曲线。 1.2.3色谱检测条件 色谱柱:日立钠离子交接树脂4.6mm× 60mm;流速:0.40mL/min(pump1),0.35mL/ min(pump2)检测波长:570nm和440nm;柱 温:57 ̄C;进样体积:201xL;流动相按梯度表进 行洗脱(见表1),分析时间35min。 表1梯度洗脱程序 Tab.1 Gradient elution program 时间 B1 B2 B3 B4 B5 0 O O O 1 0 l 0 1 0 l ∞ ∞ O O O O O O O O O 0 O ∞ ∞ O O O O 0 O ∞ O O O O ∞ ∞ O 0 O 0 O O O 0 O O O ∞ ∞ 0 O O 0 0 O O O O 0 O ∞ ∞ 0 2结果与讨论 2.1不同酱油中氨基酸的含量情况 本次实验对酿造酱油、配制酱油、植物蛋白 水解液、酱油1、酱油2、酱油3中19种氨基酸 的含量进行测定和分析,标样色谱图见图1,具 体结果见表2。 9 蝈 0 O ∞ ∞ 0 O O O 0 0 O 生Chin a F ood A l}ffve :塑 篓 :! 50 40 40 30 30 ≥ 圈 2O 20 名 0 O 0.0 2.5 5.0 7.5 10 0 12.0 l5.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 3O.0 图1氨基酸标样的色谱图 Fig.1 Chromatogram of standard sample of amino acids 表2不同酱油中氨基酸的含量 Tab.2 The content of amino acid in soy sauce 2.2分析酿造酱油、配制酱油、植物蛋白水解 次基本吻合。但酿造酱油与配制酱油、植物蛋 液中各氨基酸含量水平 白水解液的氨基酸组分有明显的差距。酿造酱 酱油的质量和级别不同,氨基酸含量也不 油经发酵,各氨基酸的含量相对分布均匀,而 同,故从各氨基酸组分占总氨基酸含量来分析。 配制酱油的氨基酸含量主要集中在谷氨酸、天 发现不同的酱油中氨基酸含量存在差异,具体 冬氨酸、丙氨酸、亮氨酸等中。各组分的水平, 情况见表3、表4。根据表3、表4,进行酿造酱 是可以初步区分酿造酱油与配制酱油、植物蛋 油、配制酱油、植物蛋白水解液中氨基酸含量 白水解液,并且谷氨酸作为特征氨基酸,可以 水平的分析,各氨基酸组分放在一起比较,配 初步判断产品是否添加了鲜味剂。具体情况见 制酱油与植物蛋白水解液的各氨基酸成分的层 图2、图3。 表3不同酱油中氨基酸的含量所占比例(计谷氨酸含量) Tab.3 The contents of amillO acids in the proportion of diferent soy sauce(including glutamlc acid) 表4不同酱油中氨基酸的含量所占比例(不计谷氨酸含量) Tab.4 The contents of amino acids in the proportion of diferent soy sauce(removing glutamic acid) 图2酿造酱油与配制酱油、植物蛋白水解液中氨基酸含量占氨基酸总置的比值(包括谷氨酸含量) Fig.2 Amino acid content of fermented soy sauce and blended soy sauce,vegetable protein hydrolysis liquid ratio of amino acids.(including glutamic acid) 图3酿造酱油与配制酱油、植物蛋白水解液中氨基酸含量占氨基酸总量的比值《不包括谷氨酸) Fig.3 Amino acid content of fermented soy sauce and blended soy sauce,vegetable protein hydrolysis liquid ratio of amino acids.(removing glutamic acid) 2.2.1 酿造酱油的各氨基酸组分含量水平 酱油的氨基酸态氨含量及鲜味。不计谷氨酸,从 表4分析酿造酱油的氨基酸组分水平,酿造酱油 中的各种氨基酸分布较为均匀。具体情况见表5。 从表3分析酿造酱油的氨基酸组分含量水平, 同时由于现在很多酱油添加谷氨酸钠,从而提高 生匿China F ood A fff1, :坌堑 :::: : . 表5 酿造酱油的各氨基酸组分水平 Tab.5 The amino acid composition of fermented soy sauce brewing level 2.2.2 配制酱油的各氨基酸组分含量水平 从表3、表4分析配制酱油的氨基酸组分含 量水平,具体情况见表6。 表6配制酱油的各氨基酸含量水平 Tab.6 The amino acid composition of fbrmented blended soy sauce brewing level 2.2.3植物蛋白水解液的各氨基酸组分含量水平 从表3、表4分析植物蛋白水解液的氨基酸 组分水平,具体情况见表7。 表7植物蛋白水解液的各氨基酸含量水平 Tab.7 The amino acid composition of HVP brewing level 2.3酿造酱油、配制酱油、植物蛋白水解液中 部分氨基酸之和的情况分析 酸的86.92%,其他氨基酸有较多没有检出,是 调配出来的假酱油。酱油3的谷氨酸含量占总氨 基酸的26.81%,天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、 由于较多商家添加谷氨酸钠,我们不计谷氨 酸含量来分析酿造酱油、配制酱油、植物蛋白水 解液的情况。植物蛋白水解液中天冬氨酸、丝氨 酸、脯氨酸、甘氨酸含量相当,它们占总氨基酸 甘氨酸的含量占总氨基酸的比例之和为47.94%, 并且检出了羟脯氨酸,因此酱油3不是酿造酱油。 比例之和为55.52%,比例较大;配制酱油中天 冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸含量相当,它 们占总氨基酸比例之和为47.85%,比例较大; 3 结论 对实验结果分析发现,采用全自动氨基酸分 而酿造酱油中天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨 酸差距较大,脯氨酸、甘氨酸含量较低,天冬氨 酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸占总氨基酸比例之 和仅有27.42%。具体数据见表4。 天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸的含量 水平及他们的总和占氨基酸总量的比例也是区分 酿造酱油与配制酱油的重要指标之一。 2.4酿造酱油、配制酱油、植物蛋白水解液中 羟脯氨酸的情况 酿造酱油以大豆和(或)脱脂大豆、小卖和 (或)麸皮为原料,经微生物发酵制成,一般不 含羟脯氨酸;植物蛋白水解液中可以检出少量的 羟脯氨酸,而配制酱油是由以酿造酱油为主体, 与酸水解植物蛋白调味液、食品添加剂等配制而 成,可能会含羟脯氨酸。如果添加了胶原蛋白水 解液,有含量较高的羟脯氨酸 J。 分析酱油中羟脯氨酸的含量,也是区分酿造 酱油与配制酱油的重要指标之一。 2.4三种特殊的酱油分析 酿造酱油中的谷氨酸占总氨基酸的比例在 25%左右,配制酱油的谷氨酸占总氨基酸的比例 15%左右。如果酱油中谷氨酸占总氨基酸的比例 超过30%,都是添加了谷氨酸钠。酱油1中谷氨 酸占总氨基酸的73.98%,酱油2中谷氨酸占总 氨基酸的86.92%,很明显酱油1、酱油2是添加 了谷氨酸钠。谷氨酸作为特征氨基酸,可以初步 判断产品是否添加了鲜味剂…。 在酱油1谷氨酸含量占总氨基酸的74.04%, 其他氨基酸有检出,从各氨基酸成分的水平看, 与酿造酱油相似,并且不计谷氨酸时,天冬氨 酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸的含量占总氨基酸 的比例之和为28.31%,酱油1有可能是酿造酱 油的基础一h再添加了谷氨酸钠,从而提高了酿造 酱油的级别。是现在较多品牌喜欢采用的一种节 省成本的方式 J。酱油2的谷氨酸含量占总氨基 析仪对酱油中氨基酸的组成进行分析,酿造酱油 和配制酱油中氨基酸的组成存在一定差异;不计 谷氨酸时,酿造酱油和配制酱油中的天冬氨酸、 丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸的总量有明显的差异, 酿造酱油中天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸 的总量占总氨基酸的约30%,配制酱油中天冬氨 酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸的总量占总氨基酸 的约50%;酿造酱油不含羟脯氨酸,而配制酱油 可能含羟脯氨酸。经研究表明通过对酱油中氨基 酸组成成分分析可以作为区分酿造酱油和配制酱 油鉴别体系的指标之一。 该研究仅能分辨出不是酿造酱油的产品,不 能完全确定是酿造酱油的产品,存在一定的缺 陷。还需要结合酱油中含氯化合物、香味成分指 纹图谱等的分析,形成一个联合特征指标标准的 鉴别体系,从而建立区分酿造酱油中是否添加了 酸水解植物蛋白调味液的方法。 参考文献: [1]葛冬梅,等.AeeQ—Tag法测定酱油中游离氨基酸组成 [J].中国调味品,2009(34):103—106. [2]丁秀英,等.GB 2717—2003,酱油卫生标准[s].北京: 中国标准出版社,2003. [3],等.GB 18186—2000,酿造酱油[s].北京:中国 标准出版社,2000. [4]黄文彪,等.SB/T 10336—2012,配制酱油[s].北京:中 国标准出版社,2013. [5]彭涛,等.中国酱油的现状及发展前景[J].中国调味品, 2007(9):26—29. [6]王生.配制酱油与酿造酱油的鉴别[J].中国卫生检验杂 志,2008(4):749. [7]宗雯雯,等.几种酱油中氨基酸组分分析与比较[J].食 品与机械,2008(7):105—107. [8]胡华,等.高效液相色谱法检测酱油中羟脯氨酸的含量 [J].中国调味品,2010(9):106—109. [9]Wu L M,et a1.Food Com pos Ana,2009,22(3):242. [10]夏苏捷,等.柱前衍生化HPLC法测定酱油中(半)胱氨 酸的含量[J].2008(7):66—69.