Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１ ４，１ ５（１ Ｏ）：１ ８２６—１ ８２９ Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ ｃ ２０１４，Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ＨＡＡＳ．Ａｌ ｌｒｉｇｈｔｓ ｒｅｓｅｒｖｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ Ｏｎｅ—・ｓｔｅｐ Ｒｅｖｅｒｓｅ ＴｒａｎＳＣｒｉ ｐｔｉｏｎ Ｌｏｏｐ－ｍｅｄ ｉａｔｅｄ Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ Ａｍ ｐｌ ｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｒａｐｉｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｖｉ ｎｅ Ｖｉ ｒａｌ Ｄｉａｒｒｈｅａ Ｖｉ ｒｕｓ Ｗａｎｚｈｅ ＹＵＡＮ’，２，３ Ｔｅｎｇ ＷＡＮＧ’ ３， Ｊｉａｎｃｈａｎｇ ＷＡＮＧ ，Ｌｉｍｉｎ ＬＩ’，乏３ Ｘｉｕｙｕａｎ ＺＨＡＮＧ’，乏３ Ｊｉｇｕｏ ＳＵＮ１， １．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１ ００１，Ｃｈｉｎａ； ２。Ｈｅｂｅｉ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｔｏｇｙ，Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１ ００１，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｎｏｒｆｈ Ｃｈｉｎａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｅｐｉｄｅｍｉｃ Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１ ００１，Ｃｈｉｎａ ４．Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｅｂｅｉ Ｅｎｔｒｙ・ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ ０５００５１，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ 『Ｏｈｉｅｃｔｉｖｅ１ Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｏｏｐ—ｍｅｄｉ－ ａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＴ—ＬＡＭＰ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＢＶＤＶ．ｆＭｅｔｈｏｄ】Ｓｉｎｃｅ ｇｐ４８ ｇｅｎｅ ｏｆ ＢＶＤＶ ｉｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｒｅｇｉｏｎｓ，ａ ｓｅｔ ｏｆ ｆｏｕｒ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ ｓｉｘ ｔａｒｇｅｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｔ ｔｈｅ ｇｐ４８ ｇｅｎｅ ｒｅｇｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ＲＴ－ ＬＡＭＰ ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｙ ｅｖａｌｕａｔ— 牛病毒性腹泻病毒一步ＲＴ— ＬＡＭＰ快速检测方法的建立 袁万哲１，２，３，王腾 一，王建昌４李丽敏０ 一，张 秀媛１．２．３，孙继国 （１．河北农业大学动物 陕学院，河北保定０７１００１；２．河北省兽医生物 技术ｆ 程技术研究中心．河北保定０７１００ｌ；３． ｉｎｇ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ． ｆＲｅｓｕｌｔ１ Ｔｈｅ ＲＴ・ＬＡＭＰ ａａｓａｙ ｗａｓ ｓｕｃ－ ｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ａｔ ５６ ｏＣ ｗｉｔｈｉｎ ４０ ｍｉｎ ｕｎｄｅｒ ｉｓｏｔｈｅｒｍａＩ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅ－ ｓｕｉｔｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｓ Ｉａｄｄｅｒ－ｌｉｋｅ ｂａｎｄｓ ｕｓｉｎｇ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．Ｔｈｅ ＲＴ．ＬＡＭＰ ａｓｓａｙ ｉｓ ｈｉｇｈｌｙ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ａｂｌｅ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ３．７４ｘｌ ００ ｃｏｐｉｅｓ／ｐｌ ｏｆ ＢＶＤＶ 农、Ｉ 部动物疫病病原生物学华北ｌ 观测实验 站 河』匕保定Ｏ７１００１；４．河北省ｊ＿｛＿ｊ入境检验检 疫硒技术中心，河北石家庄０５００００） 摘要１日的１建 一种快速、敏感、特异的 检测牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＩ）Ｖ）反转录环介 导等温扩增（ＲＴ—ＬＡＭＰ）方法，为诊断与监测 ＢＶＤＶ提供准确可靠］：具．．ｆ方法］根据 ＲＮＡ，ａｓ ｎｏ ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｖｉｒｕｓｅｓ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｏｖｅｒａｌｌ， ｔｈｅ ｎｅｗｌｙ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ＲＴ—ＬＡＭＰ ａｓｓａｙ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｏｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｆｉｅｌｄ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｏｆ ＢＶＤＶ。 Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ （ＢＶＤＶ）：Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａＩ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＴ—ＬＡＭＰ）：Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ （ ｎＢ‘ｄ『１ｋ公布的ＢＶＤＶ序列．在其保守序列区 ｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ ｇｅｎｕｓ Ｐｅｓｆｉｖｉｒｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆａｍｉｌｙ Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ．ｉｓ ａ ｓｉｎｇｌｅ—ｓｔｒａｎｄｅｄ ｐｏｓｉ— ｔｉｖｅ—ｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ｖｉｒｕｓ ｏｆ ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ １ ２．５ ｋｂ［ ．ＢＶＤＶ ｈａｓ ａ ｈｉｇｈ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（Ｅ ＬＩＳＡ），ａｎｄ ｒｅ— 域没汁ｔ ｒ一套Ｉ，ＡＭＰ引物，优化Ｊ 反应时间与 ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ＰＣＲ）［５－６］．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ａｌＩ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｈａｖｅ ｓｏｍｅ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ—ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ （ＢＶＤＶ），ａ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｖｅｒｓｅ ｔｒ反应温度，建 ｒ榆测ＢＶＤＶ的ＲＴ—Ｉ ＡＭＰ方 法 、ｌ结果Ｉ该方法能在５６％等温条件下４Ｏ分 钟完成扩增，扩增结果Ｊｌｊ通过凝胶电泳梯形带 判定 浚疗法具有良好的特异性和敏感性，最 ｄｉｓａｄＶａｎｔａｇｅｓ， ｓｕｃｈ ａｓ ｒｅｑｕｉｒｉｎｇ ｈｉｇｈ—ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ｏｒ ｂｅｉｎｇ ｔｉｍｅ－ｃｏｎｓｕｍｉｎｇ．Ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ，ａ ｒａｐｉｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ， 低能榆测到３．？４ｘｌ０。ｃｏｐｉｅｓ／Ｉ．ｄ的病毒ＲＮＡ， ｉｆ＝ｉ ， 他痫毒无交义反应。Ｉ结论１该方法能 川于牛病毒性腹泻病毒的诊断与监测 关键词 牛病毒性腹泻病毒：ＲＴ—ＬＡＭＰ：检测 ｒａｔｅ ａｎｄ ｌｏｗ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，ｌｅａｄｉｎｇ ｔｏ ｓｉｇ。 ｎｉｆｉｃａｎｔ ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｉｏｓｓｅｓ［２１．Ｔｈｅ ｄｅｔｒｉ— ｍｅｎｔａＩ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＢＶＤＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ— Ｉｏｏｐ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａＩ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｌｕｄｅ ｒｅｄｕｃｅｄ ｍｉｌｋ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｒｅ－ ｄｕｃｅｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ， （ＬＡＭＰ），ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ【 ．Ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ。ｏｎｌｙ ａ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ ｉｓ ｎｅｅｄｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ Ｉａｒｇｅ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ６０ ｍｉｎ ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ．Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ．ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｏｃｃｕｒ— ｒｅｎｃｅ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ．ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ａｍｏｎｇ ｙｏｕｎｇ ｓｔｏｃｋ［３￣．Ｃａｌｖｅｓ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｓｈｅｄｄｉｎｇ ｓｉｎｃｅ ｔｈｅｙ ｕｓｕａｌｌｙ ｄｏ ｎｏｔ ｅｘｈｉｂｉｔ ａｎｙ ａｐｐａｒｅｎｔ ＬＡＭＰ ａｎｄ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｉｏｏｐ— ａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆＲＴ－ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｌｙ ａｒｅ ａ ｍａｊｏｒ ｍｅｄｉＬＡＭ Ｐ１ ｍｅｔｈｏｄｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｐｒｏｖｅｎ ｔｏ ｂｅ ｒａｐｉｄ，ｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｉｎｅｘｐｅｎｓｉｖｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ＤＮＡ ａｎｄ ＲＮＡ ｖｉｒｕｓｅｓ【。 ． ＲＴ．ＬＡＭＰ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｖａｒｉｏｕｓ ｖｉｒｕｓｅｓ ｆｒＯｍ ａｎｉｍａｌｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｓ ． Ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＢＶＤＶ ｉｎｃｌｕｄｅ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ． ｉｍ— ｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｅｌｅｃｔｒｏｎ 作者简介 袁万哲（１９７８一），男，陕西挟风人， 博士，副教授，从事预防兽医学的教学与科研工 作．Ｅ ａｉ１：ｙｕａｗｗａｎｚｈｅ＠ｌ２６．ｃｏｒｎ 通讯作者， ａｎ．ｏｒｉｇｉｎ ｉｎｆｌｕｚｅｎｚａ Ａ［９】－ｂｏｖｉｎｅ ｒｏ一 博士．教授．博士生导师 从事预防兽医学的教 ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（ＥＭ），ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ ｉｍ‘ ａｖｉ学与科研工作，Ｅ ｎｍｉｌ：ｖａｃｃｉｎｅ２０００＠ｌ２６．（ｘ）ｎｌ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｖａｃｃｉｎｅ２０００＠１ ２６．ｃｏｍ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：Ａｕｇｕｓｔ １０，２０１４ Ａｃｃｅｐｔｅｄ：Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２８，２０１４ 收稿日期修回日期２Ｏ１４—０８一ｌ０ ２０１４－０９—２８ ２Ｏ１４ １８２７ ｔａｖｉｒｕｓ［１２】．ｃｌａｓｓｉｃａＩ ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ［８］， ａｎｄ ｐｏｒｃｉｎｅ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｒｅｓｐｉｒａ— ｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｖｉｒｕｓ［ ． １ｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ａ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｆｅａｓｉｂｌｅ ｏｎｅ—ｓｔｅｐ ＲＴ－ＬＡＭＰ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅ－ ＬＡＭＰ，ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｂｙ Ｈｅｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ＲＮＡｓ ｍｉｘｉｎｇ １０×ＢｓｔＤＮＡ Ｂｕｆｆｅｒ．２５ ｍｍＯＩ／Ｌ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｓ ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ ｉｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ ＭｇＣＩ２，２．５ ｍｍＯＩ／Ｌ ｄＮＴＰｓ，１ ０ ｐｍｏｌ／Ｌ “Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ“．ＲＴ．ＰＣＲ ｐｒｉｍｅｒｓ ｆＰ１：５’－ＡＴＡ ＣＣＧ ＡＡＴ ＧＧＡ ＡＡＧ ＡＴＡ Ｃ－３’：Ｐ２：５’－ＴＡＡＴＡＧ ＡＡＣ ｅａｃｈ ｐｒｉｍｅｒ，２００ Ｕ／ｐＩ ＡＭＶ ｒｅｖｅｒｓｅ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ ＢＶＤＶ．ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ，８ Ｕ／ｕｌ Ｂｓｔ ＤＮＡ ｐｏｌｙ－ ｍｅｒａｓｅ ａｎｄ ２ ｕＩ ｏｆ ｔｏｔａｆ ＲＮＡ ｉｎ ａ ２５ ｕＩ ｔｏｔａｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ．Ｔｈｅ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ａｔ ５８ ｏＣ ｆｏｒ ５０ ｍｉｎ ｔｏ ｔｅｒｍｉｎａｔｅ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｏｐ— ｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＢＶＤＶ ＲＮＡ．Ｓｉｎｃｅ ｇｐ４８ ｇｅｎｅ ｏｆ ＢＶＤＶ ｉｓ ａ－ ｍｏｎｇ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｃｏｎｓｅｗｅｄ ｒｅｇｉｏｎｓ，ａ ＧＣＴ ＧＡＣ ＧＡＡ－３’）．Ｂｒｉｅｆｌｙ，ＲＴ－ＰＣＲ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ １ ｕｌ Ｏｆ ＲＮＡ ａ ２０ ｕｌ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ ｂｙ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒ’ｓ ｐｒｏｔｏｃｏ１ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｙｃｌｉｎｇ ｔｉｍｅｓ ａｎｄ ｔｅｍｐｅｒａ— ｓｅｔ ｏｆ ｆｏｕｒ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ ｓｉｘ ｔａｒｇｅｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｔ ｔｈｅ ｍｉｎ．ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｈｅａｔｉｎｇ ａｔ ８５℃ｆｏｒ １ ０ ｔｅｍｐｌａｔｅ ａｎｄ １ ０ ｐｍｏＩ ｏｆ ｅａｃｈ ｐｒｉｍｅｒ ｉｎ ｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＲＴ．ＬＡＭＰ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｙ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉｆ— ｇｐ４８ ｇｅｎｅ ｒｅｇｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ＲＴ－ＬＡＭＰ ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｈｉｇｈｌｙ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ａｂｌｅ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ３．７４ ｘ １ ００ ｃｏｐｉｅｓ／ｐｌ ０ｆ ＢＶＤＶ ＲＮＡ．ａｓ ｎｏ ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｏｎ ｅｓ：９４ ｏＣ ｆｏｒ ３ ｍｉｎ ａｎｄ ３０ ｃｙｃｌｅｓ ｏｆ ｆｅｒｅｎｔ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ（５４，５５， ｔｕｒｏＣｆｏｒ３０ ｓ，５６ ｏＣｆｏｒ３０ ｓ、ａｎｄ ７２℃ ５６，５７，ａｎｄ ５８ ｏＣ）ａｎｄ ｔｉｍｅｓ（１０，２Ｏ， ９４ ｗａｓ ｏｂｓｅｗｅｄ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｖｉｒｕｓｅｓ．Ｔｈｉｓ ｎｅｗｌｙ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ＲＴ－ＬＡＭ Ｐ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ａ ｖｅｒｙ ｖａｌｕａｂｌｅ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＢＶＤＶ． ４０ ｓ．ＲＴ－ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ａｎａ・ ３０，４０，ａｎｄ ５０ ｍｉｎ）．Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｆｏｒｗｅｒｅ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｉｎ ｅａｃｈ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｔｏ ｃｈｅｃｋ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ＲＴ—ＬＡＭＰ ２％ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｏｐｔｉ－ ｌｙｚｅｄ ｂｙ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ａｕｔｏ－ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｅｄ ｕｓｉｎｇ ｍａｔｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏ－ ｍａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ． Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｖｉｒｕｓ ｓａｍｐｌｅｓ Ｔｈｅ ＢＶＤＶ ＢＤ－－２ ａｎｄ ＢＤ－－４ ｓｔｒａｉｎ ｇｅｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）．Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ａｌｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ＢＶＤＶ— ｔｉｍｉｚｅｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ． ｆｉｃ ＲＴ－－ＬＡＭＰ ａｓｓａｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｏｐ－－ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＲＴ－ ｓｐｅｃｉＬＡＭＰ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒ０ｍ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃａｌｖｅｓ ｉｎ Ｈｅｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｉｎ ２０１ １．Ｓｔｒａｉｎ ＢＤ一２ ａｎｄ ＢＤ一４ ｗｅｒｅ ｐｒｏｐａｇａｔｅｄ ｉｎ Ｍａｄｉｎ－ ＲＴ－ＬＡＭＰ ａｓｓａｙ．ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｒｅａｃ— ｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｎ ａ ｐａｎｅｌ ｏｆ ＢＶＤＶ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｑ ＢＤ．２ ａｎｄ ＢＤ一４．Ｉｎ Ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ａ ｓｅｔ ｏｆ ＲＴ－ＬＡＭＰ ｐｒｉｍｅｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｗｅｄ ｒｅｇｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｄａｒｂｙ ｂｏｖｉｎｅ ｋｉｄｎｅｙ（Ｍ ＤＢＫ）ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｇｐ４８ ｇｅｎｅ ｏｆ ＢＶＤＶ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｕｓ－ ｔｉｏｎ，ｂｏｖｉｎｅ ｒｏｔａｖｉｒｕｓ（ＢＲＶ），ｅｎ・ ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｄｄｉｏｒｎｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ （ＥＭＣＶ）， １ Ｏ％ｆｅｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ（Ｓｉｊｉｑｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ， ｃｅｐｈａｌａｓｓｉｃａＩ ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ（ＣＳＦＶ）， ｆｒｅｅ ｏｆ ＢＶＤＶ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ｃｌａｎｄ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ（ＪＥＶ） ＢＶＤＶ）． Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａＩ ＲＮＡ ｉｎｇ Ｐｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ Ｖ４ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｔａｂｌｅ １ １．Ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｗｈｅｔｈｅｒ ｔｈｅ ＲＴ— ＬＡＭＰ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＢＶＤＶ．ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒ０ｍ ｃｅｌＩ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｓｕｐｅｒ－ ｗｅｒｅ ｉｎｃｌｕｄｅｄ．Ｔｈｒｅｅ ｍｉｃｒｏｌｉｔｅｒｓ ｏｆ ｒｅ— Ｔｈｅ ｖｉｒａＩ ＲＮＡ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｅＩｅｃｔｒＯＤｈＯｒｅｓｅｄ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ｌ ｗａｓ ａｄｄｅｄ ｉｎｔｏ ２５ ｕｌ Ｏｆ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｔｕｂｅ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｕｎｄｅｒ ＵＶ ｌｉｇｈｔ．Ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＲＴ．ＬＡＭ Ｐ ｆｏｒ ＢＶＤＶ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＲＴ．ＬＡＭＰ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔ— ｎａｔａｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ＢＶＤＶ ａｎｄ ａｓｓａｙｅｄ ｕｓｉｎｇ ａ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｉｎｉｔｉａＩ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ．Ｔｈｅ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａＩ ＲＮＡ ｏｆ ＢＶＤＶ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ａ Ｉａｄｄｅｒ－ｌｉｋｅ ｂａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ２％ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅ１．Ｗｈｅｒｅａｓ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｎｇ ２％ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌｓ，ｏｒ １ ＵＩ Ｏｆ ｔｈｅ ＱＩＡａｍｐ＠ＶｉｒａＩ ＲＮＡ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ， ｕｓｉＶａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ’ｓ ｐｒｏｔｏｃｏ１．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ＲＮＡ ｗａｓ ｅｌｕｔｅｄ ｉｎ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｓｔｏｒｅｄ ａｔ一８０ ｏＣ ｕｎｔｉｌ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ＲＴ— ＬＡＭＰ Ｏｒ ＲＴ－ＰＣＲ． Ｐｒｉｍｅｒ ｄｅｓｉｇｎ Ｔｈｅ ｇｐ４８ ｇｅｎｅ ｏｆ ＢＶＤＶ．ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｃｏｎｓｅｗｅｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｒａｎ－ ｄｏｍｌｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ＢＶＤＶ ｉｓｏｌａｔｅｓ，ｗａｓ ｃｏｎｔｒｏ１ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｈｅ ＲＮＡ ｔｅｍｐｌａｔｅ ｄｉｄ ｅｄ ｕｓｉｎｇ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＢＶＤＶ ＲＮＡ ａｓ ｔｅｍｐｌａｔｅ．Ｔｈｅ ＲＮＡ ｗａｓ ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＮａｎｏＤｒｏｐ １ ０００ ｎｏｔ ｇｅｎｅｒ￣ｅ ｓｕｃｈ ａ ｂａｎｄ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ＲＴ．ＬＡＭＰ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａ１． Ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａＩ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ （Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＵＳＡ）ａｎｄ ｗａｓ ｄｉ— Ｉｕｔｅｄ ｓｅｒｉａｌｌｙ １ ０－ｆｏｌｄ ｆｒＯｍ ３．７４ ｘｌ ０ ｃｈｏｓｅｎ ｆｏｒ ｐｒｉｍｅｒ ｄｅｓｉｇｎ．Ｐｒｉｍｅｒ Ｅｘ－ ｔｈｅ ｏｎｅ－ｓｔｅｐ ＲＴ－ＬＡＭＰ．ｔｈｅ Ｉａｄｄｅｒ－ｌｉｋｅ ｐｌｏｒｅｄ Ｖ４ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｓｉｇｎ ａｓ ａｄｅｑｕａｔｅ ａｓ ｅｘｐｅｃｔ－ ｃｏｐｉｅｓｉｐＩ ｔｏ ３．７４ｘｌ ０一’ｃｏｐｉｅｓ／ｐｌ ａｓ ｔｅｍ・ ｂａｎｄ ｗａｓ ｎＯｔｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ，ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｅｄ ｕｓｉｎｇ ２％ａｇａｒｏｓｅ ｇｅ１． ＬＡＭＰ ａｍｐＩｉｆｉｃａｔｉＯｎ，ａ ｓｅ ｒｉｅｓ Ｏｆ ｅｘｐｅ ｒｉ－ ｍｐｒＯｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃｊｅｎｃｙ Ｏｆ ＲＴ－ ａｔｅ ｆｏｒ ＲＴ．ＬＡＭＰ ａｓｓａｙ。Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｅｄ．ＴＯ ｉｔｈｅ ＲＴ－ＬＡＭＰ ｐｒｉｍｅｒｓ（ｈｔｔｐ：／／ｐｄｍｅｒｅｘ－ ｐｌｐｌｏｒｅｒ．ｊｐ／ｅ／）．Ａｌｌ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｙｎｔｈｅ— ｓｉｚｅｄ ｂｙ ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）． Ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ａｒｅ ｓｈｏｗｎ ｊｎ Ｔａｂｌｅ １． Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＲＴ－ＬＡＭＰ ｐａｒａｍｅ－ ｔｅｒＳ ｍｅｎｔｓ ｔＯ Ｏｐｌｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ＲＴ－ＬＡＭ Ｐ ｐａ－ ｒａｍｅｔｅｒＳ ｗｅｒｅ ｃＯｎｄｕＣｔｅｄ．Ｔｈｅ ＯＤｔｉ— ＣｌｉｎｉｃａＩ ｓａｍｐｌｅｓ Ｆｏｒｔｙ ｆｅｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔ－ ｍｉｚｅｄ ＲＴ－ＬＡＭＰ Ｄａｒａｍｅｌｅｒｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆＯｌｌＯｗｓ：ｊｎｃｕｂａｔｉＯｎ ｌｅｍＤｅｒａｔｕｒｅ ａｔ ５６ ℃（Ｆｉｇ．１ Ａ）ａｎｄ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｔ；ｍｅ ０ｆ ４Ｏ ｎ （Ｆｉｇ．１ Ｂ）．Ｗｉｔｈ ｔｈｅｓｅ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ， Ｏｍ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄａｉｙ ｆａｒｍｓ ｉｒｎ ｍｉＦｏｒ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｌ ｔｅｓｔ ｏｆ ｏｎｅ－－ｓｔｅｐ ＲＴ－－ ｃａｍｅ ｆｒｅｄ ｆｒＯｍ ｃａｌｖｅｓ ｗｉｔｈ ｄｉａｒｒｈｅａ．ｗｈｉｃｈ Ｔａｂｌｅ １ ＲＴ．ＬＡＭＰ ｐｒｉｍｅｒｓ ｄｅｓｉｑｎｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＢＶＤＶ １８２８ ２０１４ ４ ５ ｌ ２…Ｊ———● ｑ（Ｉ【ｌ——－． ７【ｌ【ｌ—． （）ｆ】—— ３ＯｆＪ—＋ ２００ Ｌｊ［）０— ９００ ７００ ５００ ｎ ７００— Ｍ，２ ０００ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ；ｉｎ Ｆｉｇ．Ａ，ｌａｎｅ １—５，ＲＴ—ＬＡＭＰ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｔ ５４—５８℃． ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｉｎ Ｆｉｇ Ｂ，ｌａｎｅ １—５，ＲＴ－ＬＡＭＰ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｆｏｒ １ ０，２０，３０，４０，ａｎｄ ５０ ｍｉｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；（Ａ）Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（Ｂ）Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ． Ｆｉｇ．１ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｆｏｒ ＢＶＤＶ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｌａｎｅ １．ｔｈｅ ＲＴ—ＬＡＭＰ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａｆ ＲＮＡ ｆｒ０ｍ ＢＶＤＶ；Ｉａｎｅ ２ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｔｈｅ Ｉａｄｄｅｒ—ｌｉｋｅ ｂａｎｄｓ ｆｒＯｍ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｆｒＯｍ ＢＶＤＶ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｃｌ ｕｓｉｏｎ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｕｓｅｄ ｉｎ ｄｅ－ ｔｅｃｔｉｎｇ ｖｉｒａＩ ＲＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｆｒＯｍ ａｎｉ－ ｍａｌｓ ｄｕｅ ｔｏ ｉｔｓ ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｓｅｎ— ｂｏｖｉｎｅ ｒｏｔａｖｉｒｕｓ［ ．ｃｌａｓｓｉｃａＩ ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ［８１，ａｎｄ ｐｏｒｃｉｎｅ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｖｉｒｕｓ【’ ．Ａ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｂａｓｅｄ ｏｎ ５’ｕｎｔｒａｎＳＩａｔｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｉｔｈｏｕｔ ＲＮＡ ｔｅｍｐｌａｔｅ ｆｏｒ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｒｅａｃｔｉｏｎ；Ｍ。２ ０００ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ． ａｄｅｑｕａｔｅｌｙ ｂｙ ＲＴ—ＬＡＭＰ（Ｆｉｇ．２）． Ｔｈｅ ＲＴ－ＬＡＭ Ｐ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｄｅ． ｔｅｃｔｅｄ ＢＶＤＶ，ＢＲＶ， ＥＭＣＶ，ＣＳＦＶ， ａｎｄ Ｊ ＥＶ．Ｎｏ ｃｒｏｓｓ．ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｖｉｒｕｓｅｓ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｗａｓ ｆｕ ｒｔｈｅｒ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅＩｅＣｔｒＯＯｈＯｒｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒ ｃｈａｎｇｅ ａｆｔｅｒ ａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｄｙｅ．Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｆｉｇ．２ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ＢＶＤＶ ｕｓｉｎｇ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｓｉｔＭｔｙ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｉｎｆｌｕｚｅｎｚａ Ａ ｆＨ７Ｎ９）ｍ］． ｔｈｅ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ａｒｅ ｃｈｏｓｅｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｐｔｉ— ｍｉｚｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｏｎｌｙ ａ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｄｊｕｓｔａｂｌｅ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ． Ｔｈｉｒｄｌｙ，ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ＲＴ—ＬＡＭＰ ａｒｅ ｎｅｅｄ ｆｏｒ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅＩ ｅＩｅｃｔｒＯＤｈＯｒｅｓｉｓ． ＮｅｖｅｒｔｈｅＩｅｓｓ．ｄｕｅ ｔｏ ＲＴ．ＬＡＭＰ ｈｉｇｈ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ｔｈｅ ｐｒｏｂｌｅｍ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｃｒｏｓｓ．ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｎｅｅｄｓ ｔｏ ｂｅ ａｄｄｒｅｓｓｅｄ［ ． Ｉｎ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ．ＲＴ—ＬＡＭＰ ａｓｓａｙ ｉｓ ａ ｒａｐｉｄ．ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｔｈａｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｖａｌｕａｂｌｅ ｔｏｏｌｉｎ Ｏｆ ＲＴ－ＬＡＭＰ ｗａｓ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｔｅｎ—ｆｏｌｄ ｓｅｒｉａＩ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ＢＶＤＶ ＲＮＡ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｉｉｍｌ｛ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｒｅｇｉｏｎ（５’ＵＴＲ）ｏｆ ＢＶＤＶ ｗａｓ ａｌｓｏ ｄｅ— ｖｉｓｉｂｌｅ ｔｏ ｔｈｅ ｎａｋｅｄ ｅｙｅ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｈｅ ｖｅｌｏｐｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＢＶＤＶ ＲＮＡ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ａｔ ６３℃ ｗｉｔｈｉｎ ６０ ｍｉｎ ｕｎｄｅｒ ｉｓｏｔｈｅｒｍａＩ ｃｏｎｄｉ— ｔｉｏｎｓｔ ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ．ａ ｈｉｇｈｌｙ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｐ４８ ３．７４ｘ１ ００ ｃｏｐｉｅｓ＆Ｉ（Ｆｉｇ．３）． Ｆｏｕｒ ｏｆ ４０ ｆｅｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ．ＡＩＩ ＲＴ－ ＰＣＲ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ ａｒｅ ａｌｓｏ ＲＴ— ＬＡＭＰ ｐｏｓｉｔｉｖｅ．Ａｌ ｌＯｆ ＲＴ—ＰＣＲ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｔｒｕｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｓ ｅｖｉ— ｄｅｎｃｅｄ ｂｙ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ。 ｇｅｎｅ ｏｆ ＢＶＤＶ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＢＶＤＶ Ｍｏｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉ－ ｃａｔｉｏｎ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｆｉｎｉｓｈｅｄ ｗｉｔｈｉｎ ４０ ｍｉｎ．Ｔｈｕｓ．ｔｈｅ ＲＴ－ＬＡＭＰ ａｓ— ｓａｙ ｉｓ ｆａｓｔｅｒ ｔｈａｎ ＲＴ—ＰＣＲ．Ｓｅｃｏｎｄｌｙ． ｂｏｔｈ ｃｌｉｎｉｃａＩ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｆｉｅｌｄ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｏｆ ＢＶＤＶ． ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｎｏ ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｐｌｉｆｉ— ｃａｔｉｏｎ ｉｎ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｏｃｃｕｒｒｅｄ． ｔｈｅ ＲＴ—ＬＡＭ Ｐ ｉｓ ｅａｓｙ ｔｏ ｐｅｒｆｏｒｍ ｏｎｃｅ Ａｃｋｎｏｗｌｅｄｇｅｍｅｎｔｓ ｗｅ ｔｈａｎｋ Ｄｒ Ｑｉｕｆｅｎｇ Ｌｊ ａｎｄ Ｙａｎｘｉａ Ｇａｏ ｆＣｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ＡｎｉｍａＩ Ｓｃｌ＿ ｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｙ，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉ－ ｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ１ ｆｏｒ ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｆｅｃａＩ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒＯｍ ｃａｌｖｅｓ ｗｉｔｈ ｄｉａｒｒｈｅａ． １ ２００ ９００ ７００ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ［１】ＲＩＤＰＡＴＨ ＪＦ．ＢＶＤＶ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｔｙｐｅｓ：ｐｒａｃｔｉｃａＩ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｉａｇ。 ５００ ３００ ｔ００ ｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏＩ『Ｊ１．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，２００３， ３１：１２７－１３１． ［２】ＨＯＵＥ Ｈ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ．Ｖｅｔ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ ｆＪ］． Ｆｏｏｄ Ａｎｉｍ．Ｐｒａｃｔ．１ ９９５．１ １：５２１－５４７． Ｌａｎｅ １—１５．１０－ｆｏｌｄ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＢＶＤＶ ＲＮＡ ｆｒ０ｍ ３．７４ｘｌ０ 。ｔｏ ３．７４ｘｌ０～ｃｏｐｉｅｓ／ｐｌ ｗａｓ ｉｎ— ｃｌｕｄｅｄ ｉｎ ｅａｃｈ ２５ ｐｌ ｔｏｔａｌ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ＲＴ—ＬＡＭＰ ｒｅａｃｔｉｏｎ；Ｍ，２０００ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ｆｉｇ．３ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＲＴ－ＬＡＭＰ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＢＶＤＶ ｂｙ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃ— ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ 『３１ ＨＯＵＥ Ｈ．Ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ＢＶＤＶ ｉｎ・ ｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｄａｉｒｉｅｓ『Ｊ１．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，２００３， ３１：１３７－１４３． ２Ｏ１４ 【４】ＧＡＲＤ ＪＡ，ＧｌＶＥＮＳ ＭＤ，ＭＡＲＬＥＹ ＭＳ， ＩＢ］ＣＨＯＷＤＲＹ ＶＫ，ＬＵＯ Ｙ，ＷｌＤＥＮ Ｆ。ｅｔ ｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａＩ ｅｔ ａＬ Ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ（ＢＶＤＶ） ａＬ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ Ｊｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｒａｐｉｄｌｙ ｄｅｔｅｃｔ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎ ｖｉｖｏ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａＩ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｃｏｍ． ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ２ａ ａｎｄ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ—ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｐｒｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｌａｔｅｒａｌ ｆｌｏｗ ｄｉｐｓｔｉｃｋ ｆｏｒ ２ｂ ｆＪ】．Ｖｉｒｏ１．Ｊ．，２０１２，９：３１８． ｂｏｖｉｎｅ ｅｍｂｒｙｏｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａｒｔｉｆｉｃｉａＩ ｅｘｐｏ— ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｉｍｐｌｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃａｌ 【１２】×ｌＥ Ｚ，ＦＡＮ Ｑ，Ｉ：ＩＵ Ｊ，ｅｔ ａＬ Ｒｅｖｅｒｓｅ ｓｕｒｅ 【Ｊ】．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎ０Ｉｏｇｙ，２００９，７１： ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ １．Ｊ ＶｉｒｏＩ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａＩ １２３８－１２４４． Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１４，１９７：１４－１８． ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ［５］ＨＩＬＢＥ Ｍ，ＡＲＱＵＩＮＴ Ａ，ＳＣＨＡＬＬＥＲ Ｐ。 ［９】ＧＥ Ｙ，ＷＵ Ｂ，Ｑｌ Ｘ，ｅｆ ａＬ Ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｏｆ Ｂｏｖｉｎｅ Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ 『Ｊ１．ＢＭＣ Ｖｅｔ． ｅｆ ａＬ ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａＩ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅＩ ａｖｉａｎ—ｏｒｉｇｉｎ Ｒｅｓ．。２０１２．８：１３３． ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｂｏｖｉｎｅ Ｖｉｒａｌ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ （Ｈ７Ｎ９）ｖｉｒｕｓ ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ 【１ ３］ＺＨＡＮＧ Ｌ，ＬｌＵ ＹＢ，ＣＨＥＮ Ｌ，ｅｆ ａ Ｄｉａｒｒｈｅａ Ｖｉｒｕｓ（ＢＶＤＶ）ｏｎ ｓｋｉｎ ｂｉｏｐｓｉｅｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｉｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ Ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆＪ１．Ｓｃｈｗｅｉｚ Ａｒｃｈ Ｔｉｅｒｈｅｉｌｋｄ，２００７．１ ４９： ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ａ Ｉａｔｅｒａｌ－ ＰＲＲＳＶ ｂｙ ａ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ ３３７—３４４． ｆｌｏｗ ｄｅｖｉｃｅ ｆＪ１．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１ ３，８（８）： Ｉｏｏｐ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａＩ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆ６１ ＭＡＲＳ ＭＨ，Ｃ ＶＡＮ ＭＡＡＮＥＮ．Ｄｉａｇｎｏｓ— ｅ６９９４１． ａｓｓａｙ『Ｊ１．ＶｉｒｏＩ Ｓｉｎ，２０１１，２６：２５２— ｔｉｃ ａｓｓａｙｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ＢＶＤＶ ｃｏｎｔｒｏＩ ｉｎ ［１０１ ＬＩＡＮＧ Ｄ，ＣＨＥＮ Ｌ，ＡＮＳＡＲＩ ＩＨ，ｅｆ ａ ２５９． Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ【Ｊ１．Ｐｒｅｖ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．， Ａ ｒｅｐｌｉｃｏｎ ｔｒａｎｓ‘ｐａｃｋａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｒｅ‘ 『１４］ＦＡＮ Ｑ。ＸＩＥ Ｚ，ＸＩＥ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ａ ｒｅｖｅｒｓｅ ２００５．７２：４３—４８． ｖｅａｌｓ ｔｈｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｎｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｏｏｐ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ［７】Ｎｏｔｏｍｉ Ｔ，Ｏｋａｙａｍａ Ｈ，Ｍａｓｕｂｕｃｈｉ Ｈ，ｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｂｏｖｉｎｅ ｖｉ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃ－ ａｌ，Ｌｏｏｐ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｔｉｉｆｃａ－ ｒａｔ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ（ＢＶＤＶ１ ｖｉｒｉｏｎ【Ｊ１．Ｖ｜． ｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ【Ｊ１．Ｊ． ｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２０００， ｒｏｌｏｇｙ，２００９，３８７：３３１－３４０． Ｖｉｒｏ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１ ２．１ ８６：４３－４８． ２８：Ｅ６３． 『１１１ ＱＩＵ Ｘ，ＬＩ Ｔ，ＺＨＡＮＧ Ｇ，ｅｆａＬ Ｄｅｖｅｌｏｐ－ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｅｄｉｔｏｒ：Ｑｉｎｇｑｉｎｇ ＹＩＮ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｐｒｏｏｆｒｅａｄｅｒ：Ｘｉａｏｙａｎ ＷＵ （Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ｆｒｏｍ ｐａｇｅ １ ８１ ５） （２）：２２－２３． ［９】ＬＩＵ Ｊ（刘俊）．Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｙｎａｍｉｃ ｏｆ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ［５１ ＺＨＯＵ ＧＸ（周桂霞），ＬＩ Ｊ（李剑），ＬＩ ＹＱ（李 ｓｌｉｄｅｒ－ｃｒａｎｋ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ（曲柄滑块机构 玉清），ｅｔ ａＬＳｉｍｕｌａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐａｓ— 动力学研究）［Ｊ］．ＪＯｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ ［１】ＷＡＮＧ ＪＬ（王金丽），ＪＩＡＯ Ｊ（焦静）， ｔｕｒｅ ｐｒｅｓｓｂａｌｅｒ ｋｅｙ ｐａｒｔｓ（牧草压捆机关 Ｄｉａｎｊｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（上海电机学院报）， ＺＨＡＮＧ Ｊ（张劲），ｅｔ ａＬ Ｓｕｇａｒｃａｎｅ 键部件的仿真分析）［Ｊ】．Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｈｅｉ— ２００５。９（４）：２４－２８． ｌｅａｖｅｓ ｄｒｙ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ（甘蔗 Ｉｏｎｇｊｉａｎｇ Ｂａｙｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（黑 【１Ｏ】ＬＩ ＸＹ（李旭英），ＹＡＮＧ ＭＳ（杨明韶）， 叶干法厌氧发酵工艺研究）［Ｊ］．Ｔｒａｎｓａｃ— 龙江八一龙垦大学学报），２０１１，２３（３）： ＴＯＮＧ ＳＭ（童淑敏）．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ａｇｒｉ— １６－１８． ｃｈａｒｇｅ ｄｉｅ ｏｎ ｃｏ唧ｒｅｓ ｓｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒａＩ Ｍａｃｈｉｎｅｒｙ（农业机械学报）， ［６】ＷＡＮＧ ＦＤ（王峰德），ＣＨＥＮ Ｚ（陈志）， ｂａｌｅｒ（喂人量（初始密度）对压捆机压缩 ２０１１，４２（３）：１０９－１１４． ＷＡＮＧ ＪＹ（王俊友），ｅｔ ａＬ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ 过程的影响）ｆＪ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎ－ ｆ２】ＬＩ ＤＢ（李殿波）．Ｔｈｅ ｐａｒａｍｅｔｅｒ ｏｐｔｉｍｉｚａ— ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｆ ４ＹＦ一１ ３００ Ｉａｒｇｅ ｒｅｃｔａｎ－ ｇｏｌｉａ ｌｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｉ＇ｉｃｕｌｔｕｒｅ＆Ａｎｉｍａｌ ｔｉｏｎ ａｎｄ ｖｉｒｔｕａＩ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ａｎｄ ｔｅｓｔ ｏｆ ｇｕｌａｒ ｂａｌｅｒ（４ＹＦ－１ ３００大方捆打捆机设 Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ（内蒙古农牧学院学报）， ｈａｙ ｂａｌｅｒ ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ（干 计与试验）ｆＪ１．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｉ． １９９７。１８（１）：６６－６９． 草压捆机压缩机构的参数优化及虚拟仿 ｎｅｓｅ ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ ｆ１ １１ ＭＡＯ ＷＷ（毛文武）．Ａ ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ ｒｅ— 真和测试）【Ｄ］．Ｈａｎｇｚｈｏｕ：Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｓｃｉ－ （农业机械学报），２００９，４０（１ １）：３６—４１． ｆＯｒｍ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｍａｃｈｉｎｅ ｍｅａ－ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（杭州：浙江理工大学）， ［７】ＹＡＮＧ ＭＳ（杨明韶），ＬＩ ＸＹ（李旭英）． ｓｕｒｉｎｇ ａｎｄ ｄｒａｗｉｎｇ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｒｅｅ ｄｉ－ ２０１２． Ａｎａ！ｙｓｉｓ ｏｆ ｇｒａｓｓ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｏｐｅｎ－ｔｙｐｅ ｍｅｎｓｉｏｎ ｄｉｇｉｔａＩ ｍｏｄｅＩ ｆ基于Ｓｏｌｉｄ－ 【３】ＳＨＥＮ ＸＬ（申晓龙），ＺＨＵ ＤＬ（朱岱力）． ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ（草类物料开式压缩过程的 Ｗｏｒｋｓ三维建模的机械测绘课程设计 Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｃｈａｎｇｅ Ｉａｗ ｏｆ ｓｔｒａｗ ｃｏｍｐｒｅｓ－ 分析研究）［Ｊ】．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ 改革与实践）【Ｊ】．Ｍａｃｈｉｎｅｒｙ（机械）， ｓｉｏｎ ｉｎ ｂｕｎｄｌｉｎｇ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｍａｃｈｉｎｅ ｆ稻 Ｍｅｃｈａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（农机化研究）， ２００７，３４（６）：２６－２９． 草打捆机秸秆的压缩规律变化研究）【Ｊ］． ２００５（３）：８１—８３，８６． 【１２】ＣＨＥＮ Ｆ（陈锋）．Ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｎｇ ｍｅｃｈａ・ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ＆Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｃｈｉｎｅｒｙ ｆ８１ ＬＡＮ ＷＹ（兰旺英）．Ｐｒｏｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｉｓｍ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｒｅｃｔａｎｇｕｌａｒ ｂａｌｅｒ ＆ＥｌｅｃｔｒｉｃａＩ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（机电产品开发与 ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｍｊｎｉｍｕｍ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｃｏｍｐｒｅｓ‘ 创新），２０１ １，２４（６）：６５—６７． ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ａｎｇｌｅ ｏｆ ｓｌｉｄｅｒ—ｃｒａｎｋ ｓｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ（大方捆打捆机压缩机构 ｆ４】ＣＡＯ ＭＬ（曹明璐）．Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ（关于判别曲柄滑块机构最 设计及压缩试验研究）［Ｄ】．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｃｈｉ－ ｏｆ ｃｏｒｎ ｓｔｒａｗ ｂａｌｉｎｇ ａｎｄ ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ 小传动角的两个命题及证明）【Ｊ】．Ｊｏｕｒｎａｌ ｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｍｅｃｈａ－ ｐｒｏｃｅｓｓ（玉米秸秆大方捆压缩过程的分 ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ｒａｄｉｏ＆Ｔｅｌｅｖｉｓｉｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｎｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（；ｌ￣，京：中国农业机械 析与研究）『Ｊ１．Ｍｅｃｈａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｉｎ Ｒｕｒａｌ＆ （安徽广播电视大学学报），１ ９９２（２）：８７— 化科学研究院），２００７． ＰａｓｔｏｒａＩ Ａｒｅａｓ（农村牧区机械化），２００８ ８８．９３． Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｅｄｉｔｏｒ：Ｘｉａｏｘｕｅ ＷＡＮＧ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｐｒｏｏｆｒｅａｄｅｒ：Ｘｉａｏｙａｎ ＷＵ
