实验五、叶绿素含量的测定

深 圳 大 学 实 验 报 告

课程名称： 植物学生理实验

实验项目名称： 五、叶绿素含量的测定

学院： 生命科学

专业： 生物科学

指导教师： 邹永东

报告人: 张嘉慧 学号： 2010300077 班级： 3

实验时间： 2012年4月12日

实验报告提交时间： 2011年4月19日

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一、实验目的： 1、熟悉使用分光光度计。 2、学会如何测定叶绿素的含量。 二、实验原理： 叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度)，再根据叶绿素在该波的不同,测定各特定峰值波长下的光密度,再根据色素分子在长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。 根据比尔定律,利用叶绿素a和b吸收光谱该波长下的消光系数,计算出浓度. 叶绿素a的80%丙酮提取液的最大吸收峰为663nm,叶绿素b的吸收峰为5nm.这样,叶绿素a和b在两种波长下浓度与光密度的关系可用下式表示： D663= 82.04 Ca + 9.27 Cb D5= 16.75 Ca + 45.60 Cb （单位:毫克/升） 解得: CA = 12.7 D663 - 2.69 D5 CB = 22.9 D5 - 4.68 D663 CT = CA + CB = 20.2 D5 + 8.02 D663 CK = 4.7D440 –0.27 C a+b 式中: CA、 CB分别为叶绿素a和b的浓度, CT 为叶绿素总浓度，CK为类胡萝卜素浓度. 式中单位:毫克/升 精彩文档

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三、 实验设备与材料： 天平、研钵、烧杯、量筒、滤纸、表面皿、剪刀、90-95%乙醇、漏斗、滴管 新鲜菠菜叶、层析液配方：石油醚:乙醚：4：1（V/V) 四、 实验步骤 ： 1、叶绿体色素的提取及叶绿体色素的含量测定： 取菠菜（或其他植物）叶子2g，剪碎，放在研钵中，加石英砂和碳酸钙少许，80％丙酮约2-3ml，研磨成匀浆，再加80％丙酮定容至25ml，用漏斗过滤，即为色素提取液。 叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓ 称1g叶用丙酮研磨 ↓ 匀浆过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液） ↓ 滤液用80%丙酮定容至25mL ↓ 适当稀释后测A5、A663、A652 、 A440 2、叶绿体色素的分离： （1）点样。取前端剪成三角形的滤纸条，用毛细管取叶绿素提取液。点样后晾干，再重复操作数次。 精彩文档

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（2）分离。在烧杯中加入推动剂，然后将滤纸插入试管中，使尖端浸入溶剂内（点样原点要高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁）。 （3）当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，观察色带的分布。 五、实验现象： 测得：D440=1.85 D5=0.301 D663=0.688 六、分析与讨论： CA=12.7D663-2.69D5=12.7*0.688-2.69*0.301=8.7376-0.80969=7.92791 CB=22.9D5-4.67D663=22.9*0.301-4.68*0.688=6.29-3.21984=3.67306 CT=CA+CB=20.2D5+8.02D663=20.2*0.301+8.02*0.688=6.0802+5.51776=11.59796 CK = 4.7D440 –0.27 C a+b=4.7*1.85-0.27*11.59796=8.695-3.131=5.5 CT+Ck=11.59796+5.5=17.162 色素在叶片中的含量(%)=色素浓度 ( mg /l ) ×提取液总体积 (L) ×稀释倍数 重量(g) × 1000 =17.162*0.025*3/(2*1000)=0.0% 七、实验结论： 1、叶绿素a的浓度为7.928 mg/l。 2、叶绿素b的浓度为3.673 mg/l。 3、叶绿素总量为11.598 mg/l。 精彩文档

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4、类胡萝卜素的浓度为5.5 mg/l。 5、色素在叶片中的含量为0.0%。 6、色素带上蓝绿色为叶绿素a，黄绿色为叶绿素b，黄色为叶黄素，橙黄色为胡萝卜素。 八、思考题： 1、为什么植物在不同生长环境下其 Chl含量有差异？ Chla /Chlb有何适应意义？ 答：不同的生境下营养元素是有差异的，会影响叶绿素的含量。Chl含量受自然环境的影响，Gs、Ci、Ls上升或轻微变化，Chla、Chlb含量均明显下降，表明叶绿素含量下降是其净光合速率下降的原因之一，同时可能不存在气孔。让植物更适应环境而生长，例如适应干旱沙漠生活条件。 精彩文档

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