转化医学电子杂志（Ｅ—Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ）２０１４，１（６ １５５ ・综述・ 文章编号：２０９５－６８９４（２０１４）０６．１５５－０４ ＰＬＧＡ纳米颗粒作为基因递送载体的研究进展 张瀚尹 ，粱高峰 。，韦芳 ，闰彬 （ 河南科技大学医学技术与工程学院，河南洛阳４７１００３； 东南大学医学院，江苏南京２１０００９） Ａｄｖａｎｃｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｃａｒｒｉｅｒｓ ＺＨＡＮＧ Ｈａｎ—Ｙｉｎ ．ＨＡＮＧ Ｇａｏ—Ｆｅｎｇ‘ ，ＷＥＩ Ｆａｎｇ‘，ＹＡＮ Ｂｉｎ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｈｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉ— ｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｕｏｙａｎｇ ４７１００３，Ｃｈｉｎａ； Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｓａｆｅ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｔ ｔｏｐｉｃ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ ｏｆ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ｒｅ— ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ ｗｅｒｅ ｒｅｖｉｅｗｅｄ．Ｗｅ ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ．Ｄｉｓ— ｃｕｓｓｉｏｎ ｉｎ・ｄｅｐｔｈ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ｂｉｏ－ ｍｅｄｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｗａｓ ａｌｓｏ ｇｉｖｅｎ ｉｎ ｔｈｅ ａｒｔｉｃｌｅ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｐｒｏｂ— ｌｅｍｓ ｅｘｉｓｔｉｎｇ ｉｎ ＰＬＧＡ ｎｍａｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ａ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｗｅｒｅ ｐｏｉｎｔｅｄ ｏｕｔ ｗｈｉｌｅ ｉｔｓ ｐｒｏｓｐｅｃｔ ｗａｓ ａｌｓｏ ｐｒｏｐｏｓｅｄ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ；ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ；ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ 【摘要】寻找安全、高效的基因递送载体一直是基因治疗领 域的研究热点之一．本文对近年来ＰＬＧＡ作为递送载体及相 关问题进行了综述．首先简述了ＰＬＧＡ纳米颗粒的性质及制 备方法，然后对其作为递送载体的研究概况进行了探讨，最后 指出了目前ＰＬＧＡ作为递送材料存在的问题，并对其前景进 行了展望． 【关键词】基因递送；ＰＬＧＡ纳米颗粒；基因 【中图分类号】Ｑ７８２ 【文献标识码】Ａ Ｏ 引言 目前，基因疗法已经逐渐成为临床治疗中的一种 重要手段，作为基因治疗的一个关键环节，基因的递 送近年来备受关注．其方式有病毒载体法和非病毒 载体法两大类．病毒载体法转染率高，使用范围广， 但制备较复杂，有一定的毒性，可能产生免疫反应和 排斥反应¨－２］．由于这些缺点，了其在生物医学 收稿日期：２０１４－０９—１８；接受日期：２０１４－０９－３０ 基金项目：国家自然科学基金（Ｕ１４０４８２４）；河南科技大学博士启动基 金（０９００１６３５）；河南科技大学青年科学基金（２０１３ＱＮ４４）；河南科技 大学ＳＲＴＰ项目（２０１２２１４） 作者简介：张瀚尹．在读硕士．Ｅ・ｍａｉｌ：ｄｒｆｌ０００＠１６３．ｃｏｒｎ 通讯作者：梁高峰．博士，副教授．Ｅ—ｍａｒｌ：ｌｇｆｅｎ ９０４４８＠１６３．ｃｏｒｎ 中的应用．非病毒载体法转染率虽然不及病毒载体， 但是其安全性高、毒性低、不易产生免疫反应和排斥 反应，相对而言具有更大的优势．基因递送技术目前 已成为生物医学研究中一项重要且常用的技术，运 用该技术可以进行外源基因的高效表达、蛋白结构与 功能的研究以及生产目的蛋白；基因表达机制的 研究，实现细胞的表型改变或转化；基因治疗与转基 因动物的研究；ＲＮＡ干扰以及核酸类药物的研究等． 理想的基因递送载体应满足以下几个方面的要 求＿３］：①保护基因不被破坏和降解；②容易和靶细胞 结合；③容易穿过细胞膜；④容易与基因解离；⑤载体 本身容易被降解；⑥载体和降解后的产物对机体无毒 副作用． ＰＬＧＡ因其无毒、可降解、易于制备和功能化等 方面的良好性能，成为一种较好的基因递送材 料 －６］，ＰＬＧＡ即聚乳酸－羟基乙酸共聚物（ｐｏｌｙ（１ａｃ— ｔｉｃ—ＣＯ—ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ），ＰＬＧＡ），是由乳酸和羟基乙酸聚 合成，它水解后的产物为乳酸和羟基乙酸，是一种生 物相容性好、易生物降解且广泛用于生物医药和生物 工程的高分子材料 Ｊ．人体正常代谢时也会产生 这两种物质，因此ＰＬＧＡ本身是无毒的，不会对机体 造成毒副作用．根据实际应用和研究表明，小分子量 的ＰＬＧＡ更适合作为基因递送载体，本文主要介绍 ＰＬＧＡ纳米颗粒作为基因递送载体的研究进展． １ ＰＬＧＡ纳米颗粒的制备方法 ＰＬＧＡ纳米颗粒的制备方法有很多种，包括乳化 溶剂挥发法 Ｊ、复乳化溶剂扩散法＿１ 、喷雾干燥 法¨川、复乳化溶剂挥发法¨纠等．复乳化溶剂挥发法 是最常用于制备基因片段包裹ＰＬＧＡ的方法．而这 些方法的选择取决于所需要的颗粒直径和包裹率． 以聚合物为原料制备微球最常用的方法是先制备成 Ｏ／Ｗ、Ｗ／Ｏ、Ｗ／Ｏ／Ｗ、Ｏ／Ｗ／Ｏ等型乳液后，再根据具 体的用途选择适当方法使液滴固化成微球．制备方 法的选择对颗粒直径有很大的影响．此外，制备过程 中，有机相与水相的比例、ＰＬＧＡ的性质、表面活化剂 的选择、ｐＨ值、搅拌的方式等均会对纳米颗粒的粒径 １５６ 产生影响［ Ｉ１引． １．１乳化溶剂挥发法称取一定量的ＰＬＧＡ固体， 溶解于丙酮溶液中，将所得ＰＬＧＡ溶液用针头以一定 的流速滴加到１％吐温一８０乳化剂水溶液中，同时以 一定速度搅拌并超声．完成并形成乳液后，于磁力搅 拌器上搅拌，当有机溶剂完全挥发后得到纳米粒混悬 液．将所得纳米粒混悬液于３ ０００ ｒ／ｍｉｎ低速离心， 先除去大颗粒沉淀，再在１０ ０００ ｒ／ｒａｉｎ高速下冷冻离 心１ ｈ，用蒸馏水洗涤沉淀．将沉淀物超声分散于５Ｏ ｍＬ蒸馏水中，真空冷冻干燥２４ ｈ即可得到ＰＬＧＡ纳 米颗粒． １．２ 复乳化溶剂扩散法①称取３０ ｍｇ的ＰＬＧＡ固 体溶于２ ｍＬ二氯甲烷中，置于冰上；②量取２％的 ＰＶＡ水溶液３０ ｍＬ，置于冰上；③将溶液①冰浴超声 ３０ ｓ，形成初级乳化液，随后将初乳倒入到溶液②中 以同样的条件超声２ ｍｉｎ，得到复乳；④将复乳在通风 橱中，１ ０００ ｒ／ｍｉｎ置于恒温磁力搅拌器上搅拌３ ｈ， 充分挥发二氯甲烷；１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ，５ ｍｉｎ，离心洗涤纳 米颗粒３次；将洗涤好的纳米颗粒放人冻存管中真空 冻干，保存于一２０ｃＩ＝备用． １．３喷雾干燥法将ＰＬＧＡ先制备成乳液后，用输 送泵把乳液从直径约０．５ ｍｍ的喷嘴送出，在压缩空 气流速为２０ Ｌ／ｍｉｎ，喷料速度５００ ｍＬ／ｈ的流动条件 下雾化，压缩空气将ＰＬＧＡ雾化成极小的液滴，液滴 与热空气被共同吹人一个腔体中，并利用吹人的 １２０￣Ｃ空气瞬时加热，使液滴瞬间除去大部分水分，液 滴中的溶剂挥发，并通过废气管排出，干燥的ＰＬＧＡ 纳米颗粒于收集瓶中收集． １．４复乳化溶剂挥发法将一定量需制备的样品溶 于５％ＰＥＧ水溶液中，将一定量ＰＬＧＡ溶于二氯甲烷 ／丙酮（体积比３：１）混合溶液中，再将样品的ＰＥＧ水 溶液加入ＰＬＧＡ溶液中超声ｌ ｍｉｎ，形成Ｗ／Ｏ型乳 液，将该乳液加入一定浓度的ＰＶＡ水溶液中，冰浴并 以一半功率超声１０ ｍｉｎ，形成复乳液．将该复乳液置 于常温下磁力搅拌３ ｈ，然后在４℃，２０ ０００ ｒ／ｍｉｎ低 温高速离心２０ ｍｉｎ收集纳米粒，使用蒸馏水洗涤纳 米粒三次，冷冻干燥４８ ｈ，可得到ＰＬＧＡ纳米颗粒． ２作为递送载体的研究 ２．１递送小分子药物 目前的药物治疗中，药物的 分子大小会影响到体内各种酶对其的降解作用，也会 使其不能很好地参与到血液循环之中，因而不能发挥 应有的疗效．但如果采用一种靶向给药系统，这就会 使药物定向地到达靶组织，从而更好地发挥药效．许 多研究表明，对于顺铂、紫杉醇、５一氟尿嘧啶、姜黄素 转化医学电子杂志（Ｅ—Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ）２０１４，１（６） 等小分子治疗药物，ＰＬＧＡ纳米颗粒可以有效地包 裹，并使其发挥更好的作用．Ｄａｎｈｉｅｒ等¨ 以偶联了 具有肿瘤靶向性的ＲＧＤ分子（一类含有精氨酸一甘氨 酸 天冬氨酸序列的短肽）的ＰＬＧＡ纳米微球作为紫 杉醇（ＰＴＸ）的递送载体，研究了它对小鼠肿瘤的生长 抑制作用．结果表明，注射了ＲＧＤ—ＰＬＧＡ－ＰＴＸ的实 验组经过１８天肿瘤直径达１８ ｍｍ，注射ＰＬＧＡ—ＰＴＸ 组用了１２ ｄ，而仅注射磷酸缓冲液的对照组只用了７ ｄ肿瘤直径即达１８ ｍｍ．这些实验说明ＲＧＤ—ＰＬＧＡ— ＰＴＸ在抑制肿瘤生长上具有显著的效应．此外，我国 学者李井泉等¨ 在用ＰＬＧＡ－５一Ｆｕ的进一步研究发 现，随着给药剂量的增加，纳米颗粒的抑制作用逐渐 加强，呈剂量效应．这些研究均为ＰＬＧＡ纳米颗粒此 后更广泛地用于生物医学领域递送小分子药物奠定 了理论依据． ２．２递送ｓｉＲＮＡ 目前某些基因异常相关的疾病， 尤其是恶性肿瘤的基因治疗日益成为临床上研究的 热点．而在这一领域中，ＲＮＡ干扰以其高效的序列特 异性基因沉默技术而得到了广泛关注 ．作为潜在 的治疗药物，其在抗病毒、抗肿瘤和神经系统疾病 防治等方面具有巨大潜力¨ Ｊ．但是，同很多生物 大分子药物一样，低毒高效的递送方式是ｓｉＲＮＡ药 物进入临床研究的关键环节，因此该技术的应用重点 就转化到了如何开发一种高效的递送载体上．Ｐａｒｋ 等＿２ 通过ＰＬＧＡ纳米颗粒包裹的ＣＯＸ－２ ｓｉＲＮＡ和地 塞米松实现了风湿性关节的有效治疗，结果表明，ＰＬ— ＧＡ纳米粒子可帮助ｓｉＲＮＡ有效逃避溶酶体的降解 作用，并且ＰＬＧＡ无免疫原性，不会引起机体的免疫 排斥反应．Ｚｈｏｕ等＿２¨采用偶联特异性肽链的ＰＬＧＡ 包裹的ｓｉＲＮＡ在动物体内实现了靶向肺部的高效 ｓｉＲＮＡ的递送，有效的延长了ｓｉＲＮＡ在体内的循环时 间，提高了治疗的效果．实验结果证实，经过特异性 抗体或受体修饰的ＰＬＧＡ／ｓｉＲＮＡ体系具有更好的治 疗效果，而且用药量更少，有望成为一种高效的肿瘤 治疗药物． ２．３递送ｐＤＮＡ 非病毒载体基因疫苗是指使用 非病毒递送载体将治疗基因表达载体——质粒基因 （ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ，ｐＤＮＡ）递送入细胞内，从而使质粒调 控基因表达，进而使表达产物发挥治疗作用．Ｌｉａｎｇ 等 采用复乳化挥发法制备了携带ｍｉＲＮＡ表达载 体的ＰＬＧＡ纳米颗粒，该纳米粒子具有较高的基因转 染效率、较低的细胞毒性，在ＨｅＰＧ２细胞中获得了较 高的ｍｉＲＮＡ的表达，有效的抑制了ＨｅｐＧ２细胞周期 的进程．在当前药剂学的研究课题中，将裸ＤＮＡ直 接注入病变组织，而不依赖于其他物质的参与，这一 转化医学电子杂志（Ｅ—Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ）２０１４，１（６ 方法固然简便，无毒无害，但由于裸ＤＮＡ直接暴露于 血清之中，易受到各种酶的作用，因此转染效率低，作 用不稳定．这样，寻找一种高效的基因载体就显得极 为重要．ＰＬＧＡ纳米颗粒可运载不同大小的基因片 段，可以抵抗核酸酶的降解作用，从而延缓基因降解， 并且还能以内吞、融合、脂交换等多种作用方式进入 细胞，这就使得ＰＬＧＡ纳米颗粒在ｐＤＮＡ的导人中具 有极大的应用空间，同时，ＰＬＧＡ纳米颗粒载体还克 服了病毒载体的安全性问题，这一点至关重要． ２．４体内应用研究ＰＬＧＡ纳米颗粒作为一种非病 毒载体，相较病毒载体更有优势，因其安全、可持续性 释放及良好的生物相容性、可降解性、稳定性等生物 学特性，被认为是一种更有前景的基因递送载体．目 前在临床医学研究方面已有广泛应用，包括疫苗、组 织修复、抗肿瘤等，特别在肿瘤治疗中展现出巨大潜 力．对于抗肿瘤研究，孙国臣 合成ＢＣＮＵ—ＰＬＧＡ纳 米颗粒，用于观察其对大鼠脑ｃ６质瘤的治疗作用， 结果发现该药物表现出显著的抗肿瘤增值、侵袭和抗 血管生成作用．刘杰等 用体外培养的肝癌细胞系 ＨｅｐＧ２的细胞分别与采用特殊工艺方法制备的阿霉 素ＰＬＧＡ纳米颗粒（ＡＤＭ－ＰＬＧＡ－ＮＰ）及ＡＤＭ原药共 同培养一段时间，以研究ＡＤＭ原药和载药纳米颗粒 （ＡＤＭ—ＰＬＧＡ—ＮＰ）在治疗肝癌上的差异．结果显 ＡＤＭ．ＰＬＧＡ—ＮＰ在细胞内具有更强的ＡＤＭ药物分子 荧光强度，且稳定性好，易于被ＨｅｐＧ２细胞吞噬摄 取，从而使ＡＤＭ能从纳米颗粒中缓慢释放出来，已 达到长期给药的目的，从而更有效地抑制肝癌细胞的 生长． 另外，在很多动物实验研究中，发现ＰＬＧＡ在神 经再生、血管修复、治疗压力性尿失禁、骨愈合、局部 麻醉、防辐射等方面也有显著作用．田洪居等 通 过向小鼠坐骨神经旁注射罗哌卡因ＰＬＧＡ纳米颗粒 （ＲＯＰ—ＰＬＧＡ－ＭＳ），以研究该纳米颗粒的局麻效果． 结果显示小鼠在罗哌卡因ＰＬＧＡ微球坐骨神经旁植 入后３ ｈ，给药侧肢体开始出现明显的感觉阻滞效果， 较对照侧对热伤害刺激的反应明显迟钝，１Ｏ一１８ ｈ 达到药效高峰，３０ ｈ起药效开始减退；４８ ｈ后药效接 近？肖退，神经阻滞时间约３０ ｈ．结果发现ＲＯＰ—ＰＬＧＡ— ＭＳ纳米颗粒能有效延长罗哌卡因时效，且血药浓度 低，毒性小．这对临床局麻药物研究方面产生了深远 影响．孙伟光等 制成氨磷汀纳米颗粒用于防辐 射，该纳米颗粒能对各个组织器官实行有效的防护， 大大降低了辐射造成的损伤．氨磷汀纳米颗粒制剂 解决了一直以来氨磷汀类药物口服无效的问题，在防 辐射方面具有较好发展前景．孙阳等 自制ｓ ＰＬ一 １５７ ＧＡ，通过兔子实验，研究其对兔肝癌的成像效果，结 果表明该纳米颗粒能有效增强兔肝脏肿瘤与正常组 织间的信号强度对比，对肝癌的早期诊断和治疗具有 重要临床意义．此外，在组织工程方面，Ｋｉｍ等 将 ＳＯＸ９基因通过ＰＬＧＡ纳米粒子递送至人骨髓间充质 干细胞内，有效的增强了ＳＯＸ９基因的表达，显著提 高了间充质干细胞在体内形成软骨的能力，开辟了干 细胞应用于临床治疗的新途径． ３问题与展望 病毒感染法虽然具有很高的转染效率，但存在潜 在、未知的危险性，使其应用受到诸多．因此， 在基因递送载体和方法的研究中，人们越来越重视 非病毒载体和方法的开发与优化．大量的实验研究 证实：作为良好的基因递送载体，ＰＬＧＡ纳米颗粒为 基因治疗开创了一条全新的途径，特别是作为药物载 体与靶向技术的联合运用，在今后必将成为医药界学 者研究的热点．现在国外已有ＰＬＧＡ纳米颗粒上市， 国内也正在进行这类生物载体的相关研究，但是还存 在着一些瓶颈，例如递送的效率、靶向性、安全性等． 这些问题都需要生物医学研究者和临床医师们不断 进行深入的研究，并予以解决． 此外，不仅仅是作为递送载体，在组织工程方面， ＰＬＧＡ还可以用于细胞的生长支架，为细胞的增殖提 供三维空间和新陈代谢的微环境，并可以决定新生组 织的大小、器官的大小和形状．而ＰＬＧＡ的无免疫原 性、组织相容性好和无毒可降解的特性，在体外能够 支持细胞的生长、引导体内组织生长、帮助生物活性 分子转导以及其组成和结构可以通过剪裁来适应特 殊的需要，从而可以提高细胞的生长效率． 当然，基于ＰＬＧＡ的众多特殊性质，还可以用于 皮肤移植，伤口缝合，体内植入等方面，而更多的应用 领域还有待于进一步拓展和研究．相信随着科学技 术的不断发展，经过不断改性和特异性表面修饰的 ＰＬＧＡ纳米颗粒将会越来越完善，并在科学研究和临 床治疗中发挥更大的作用． 【参考文献】 ［１］Ｗａｎｇ ＪＨ，Ｆａｕｓｔ ＳＭ，Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ ＪＥ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｎｅｘｔ ｓｔｅｐ ｉｎ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ ［Ｊ］．Ｊ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ，２０１０，５０（５）：７９３—８０２． ［２］Ｓａｒｏｊａ ＣＨ，Ｌａｋｓｈｍｉ ＰＫ，Ｂｈａｓｋａｒａｎ Ｓ．Ｒｅｃｅｎｔ ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｖａｃｃｉｎｅ ｄｅ— ｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．１ｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｉｎｖｅｓｔ，２０１１，１（２）：６４ —７４． ［３］Ｘｉｅ ＦＹ，Ｗｏｏｄ／ｅ ＭＣ，Ｌｕ ＰＹ．Ｈａｒｎｅｓｓｉｎｇ ｉｎ ｖｉｖｏ ｓｉＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｆｏｒ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏ— ｄａｙ，２００６，１１（１－２）：６７—７３． １５８ 转化医学电子杂志（Ｅ—Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ）２０１４，１（６ ［１６］李井泉，李８１—８４． ［４］Ｐａｎｙａｍ Ｊ，Ｌａｂｈａｓｅｔｗａｒ Ｖ．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｄｒｕｇ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｃｅＵｓ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ［Ｊ］．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２００２，５５ （２００３）：３２９—３４７． 荣，徐迎新，等．ＰＬＧＡ－５一氟尿嘧啶缓释微球治疗 结直肠癌裸鼠的探讨［Ｊ］．中国实验动物学报，２００９，１７（２）： ［１７］ＥｌｂａｓｈｉｒＳＭ，Ｈａｒｂｏｒｔｈ Ｊ，ＬｅｎｄｅｃｋｅｌＷ，ｅｔ ａ１．Ｄｕｐｌｅｘｅｓ ｏｆ２１．ｎｕｃｌｅ。 ｏｔｉｄｅ ＲＮＡｓ ｍｅｄｉａｔｅ ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｃｕｈｕｒｅｄ ｍａｍｍａｌＪａｎ ｃｅｌｌｓ ｃ５］Ｐｅｒｅｚ Ｃ，Ｓａｒｃｈｅｚ Ａ，Ｐｕｔｎａｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｐａｔｙ（１ａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）一ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙ１ ｅｒｉｅ ｇｌｙｃｏ１）ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ｎｅｗ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ［Ｊ］．Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ，２００１，７５（１－２）：２１１—２２４． ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００１，４１１（６８３６）：４９４—４９８． ［１８］Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ Ｃ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｔｙ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｆｒｅｉｒｎｇ ＲＮＡｓ（ｓｉＲＮＡ）ａｓ ｒｅ． ｃｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒａｇｅｔｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ—ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｕｒｔ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇ， ２００７，８（３）：４６９—４８２． ［６］Ｍａ Ｙ，Ｚｈｅｎｇ Ｙ，Ｌｉｕ ＫＸ，ｅｔ ａ１．Ｎａｎｏｐａｒｔｉｅｌｅｓ ｏｆ ｐｏｌｙ（１ａｃｔｉｄｅ－ｃｏ— ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）一ｄ－ａ—ｔｏｃｏｐｈｅｙｒｌ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｌｇｙｃｏｌ １０００ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｒａｎｄｏｍ ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｒａｅｎｔ［Ｊ］．Ｎａｎｏｓｃ Ｒｅｓ Ｌｅｔｔ，２０１０，５（７）： １１６１—１１６９． ［１９］Ｄｅ Ｐａｕｌａ Ｄ，Ｂｅｎｔｌｅｙ ＭＶＬＢ，Ｍａｈａｔｏ ＲＩ．Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｓｉＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ｔｒｇｅｔａｉｎｇ［Ｊ］．Ｒｎａ．ａ Ｐｕｂ Ｒｎａ Ｓｏｃ，２００７，１３（４）：４３１～４５６． ［２０３Ｐａｒｋ ＪＳ，Ｙａｎｇ ＨＮ，Ｊｅｏｎ ＳＹ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ａｎｔｉ．ＣＯＸ２ ｓｉＲＮＡ ｃｏａｔｅｄ ｏｎｔｏ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｌｏａｄｉｎｇ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅｉｎｔｈｅｔｒｅａｔ－ ［７］Ｊａｉｎ ＲＡ．Ｔｈｅ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｏｆ ｖａｒｉｏｕｓ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｅｄ ｂｉｏｄｅ． ｇｒａｄａｂｌｅ ｐｏｌｙ（１ａｃｔｉｄｅ・ｃｏ—ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）（ＰＬＧＡ）ｄｅｖｉｃｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｔｅ． ｒｉａｌｓ，２００１，２１（２３）：２４７５—２４９０． ［８］Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＪＭ，Ｓｈｉｒｅ ＭＳ．Ｂｉｄｅｇｒａｄａｔｅｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＰＬＡ ｎｄ ＰＬＧＡ ｍｉａｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ［Ｊ］．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ，２０１２，６４：７２— ８２． ｍｅｎｔ ｏｆ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉｌａｓ，２０１２，３３（３３）： ８６００—８６１２． ［９］Ｑｕｉｎｔａｎａｒ－Ｇｕｅｒｒｅｍ Ｄ，Ａｌｌｒｍａｎｎ Ｅ，Ｄｏｅｌｋｅｒ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｎｄ ｃｈａｒａａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｎｏｃａｐｓｕｌｅｓ ｆｒｏｍ ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｂｙ ａ ［２１］Ｚｈｏｕ Ｊ，Ｐａｔｅｌ ＴＲ，Ｆｕ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｏｅｔａ—ｕｆｎｃｔｉｏｎａｌ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｅｌｅ８ ｆｏｒ ｔｒａｇｅｔｅｄ ｎｄａ ｅｉｃｆｉｅｎｔ ｓｉＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｔｕｍｏｒｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉ— ｌａｓ，２０１２，３３（２）：５８３—５９１． ｎｅｗ ｐｒｏｃｅｓｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｅｍｕｌｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ—ｄｉｆｕｓｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ，１９９８，１５（７）：１０５６～１０６２． ［２２ ＪＬｉｎｇ ＧＦ，Ｚｈｕ ＹＬ，Ｓｕｎ ａＢ，ｅｔ ａ１．ＰＬＧＡ—ｂａｓｅｄ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇ ｎａｎｏ— ［１０］Ｎｉｗａ Ｔ，Ｔａｋｅｕｅｈｉ Ｈ，Ｈｉｎｏ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂｉｏｄｅｒｇａｄａｂｌｅ ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ ｏｆ ｗａｔｅｒ—ｓｏｌｕｂｌｅ ａｎｄ ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ ｄｒｕｇｓ ｗｉｔｈ ｄ，１－１ａｅｔｉｄｅ ｇｌｙｅｏｌｉｄｅ ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｅｍｕｌｓｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｄｉｆ－ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｅｎｈａｎｃｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｍｉＲＮＡ ｉｎ ＨｅＰＧ２ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｎａｎｏｓｅ Ｒｅｓ Ｌｅｔｔ，２０１１，６：４４７． ［２３］孙国臣．缓释ＢＣＮＵ－ＰＬＧＡ微球对大鼠脑ｃ６胶质瘤治疗作用的 实验研究［Ｄ］．北京：中国人民军医进修学院，２００８． ［２４］刘杰，徐伟华，金成，等．载阿霉素ＰＬＧＡ纳米微球的制备 及性质研究［Ｊ］．现代生物医学进展，２０１０，１０（２４）：４６６１— ４６６３． ｆｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｒｅｌｅａｓｅ ｂｅｈａｖｉｏｒ［Ｊ］．Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅ． １ｅａｓｅ，１９９３，２５（１－２）：８９—９８． ［１ １］Ｍｏｋ Ｈ，Ｐａｒｋ ＴＧ．Ｗａｔｅｒ－ｆｒｅｅ ｍｉｅｍｅｎｅａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｈｉｔｎ ＰＬＧＡ ｎｆｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｂｙ ｓｐｒａｙ ｄｒｙｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ＰＥＧ・ｓｓｉａｓｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｏ１． ｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｌｌｎ， ２００８，７０（１）：１３７—１４４． ［２５］田洪居，陈仲清，刘永前，等．罗哌卡因ＰＬＧＡ微球在小鼠坐骨 神经旁的缓释作用［Ｊ］．中国疼痛医学杂志，２０１０，１６（５）：２９６ —［１２］Ｈａｒｐｅ ＡＶ，Ｐｅｔｅｒｓｅｎ Ｈ，Ｌｉ ＹＸ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｅｒ－ ｅｉａｌｌｙ ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ２９９． ［２６］孙伟光，卢婷利，于国辽宁大连，２００９． 洋，等．氨磷汀ＰＬＧＡ微球对辐射损伤小鼠 ［Ｊ］．Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ，２０００，６９（２）：３０９—３２２． ［１３］Ｍｕｋｅｒｊｅｅ Ａ，Ｓｈａｎｋａｒｄａｓ Ｊ，Ｐ．Ｒａｎｊａｎ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｎａｎｏｐａｒｔｉ． ｅｌｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅ— 防护作用的研究［ｃ］．中国空间科学学会第七次学术年会，中 ［２７］孙阳，郑元义，吴伟，等．载超顺磁性氧化铁高分子微球对 ｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，２２（４４）：４４５１０１． 兔肝癌ＭＲ成像效果的影响［Ｊ］．中国医学影像技术，２０１２。２８ （８）：１４４５—１４４８． ［１４］Ｈｅ Ｃ，Ｈｕ ＹＰ，Ｙｉｎ ＬＣ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎｄ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｈａｒｇｅ ｏｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉ— ［２８］Ｋｉｍ ＪＨ，Ｐａｒｋ ＪＳ，Ｙａｎｇ ＨＮ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｅｌｅｓ ｔｏ ｍｅｄｉａｔｅ ＳＯＸ９ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｃｎｃｈｙｍａｌ ｃｌｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２０１０，３１（１３）：３６５７—３６６６． ［１５］Ｄａｎｈｉｅｒ Ｆ，Ｖｍｍａｎ Ｂ，Ｌｅｅｏｕｔｕｒｉｅｒ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆｔｕｍｏｒ ｅｎ． ｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｂｙ ＲＧＤ－ｇｒａｆｔｅｄ ＰＬＧＡ－ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｌｏａｄｅｄ ｗｉｔｈ Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ ｓｔｅｍ ｅｅｌｓ（ｈＭＳＣｓ）ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ ｅｈｏｎｄｒｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉｌｓ，ａ ２０１１，３２（１）：２６８—２７８． ［Ｊ］．Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ，２００９，１４０（２）：１６６—１７３． （上接１５４页） ［１５］林潮炫，李海燕．肘关节恐怖三联征中冠状突骨折的内固定 ［Ｊ］．中国社区医师：医学专业，２０１２，１４（１０）：９９—１０１． ［１６］Ｊｏｓｅｆｓｓｏｎ ＰＯ，Ｇｅｎｔｚ ＣＦ，Ｊｏｈｎｅｌｌ Ｏ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｓｌｏｃａｔｉｏｎｓ ｏｆｔｈｅ ｅｌｂｏｗ ｎｄ ｉａｎｔｒａａｒｔｉｃｕｌａｒｆｒａｃｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｏｒｔｈｏｐ Ｒｅｌａｔ Ｒｅｓ，１９８９，２４６： １２６—１３０． Ｒｅｓ，２０１０，９６（２）：１４７—１５４． ［２１］季卫平，黄自强，沈永辉，等．双切口在肘关节“恐怖三联征”术 中应用治疗体会［Ｊ］．浙江创伤外科，２０１１，１６（４）：５３５—５３７． ［２２］姜义山，蒋１００６． 涛，徐建华，等．肘关节恐怖三联征尺侧副韧带的 修复重建临床体会［Ｊ］．医学理论与实践，２０１１，２４（９）：１００４— 【２３］林松，陈荣，何和与．肘关节恐怖三联征并发症处理［Ｊ］． ［１７］Ｍｏｒｒｅｙ ＢＦ，Ａｎ ＫＮ．Ｓｔｂｉａｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌｂｏｗ：ｏｓｓｅｏｕｓ ｃｏｎｓｔｒａｉｎｔｓ［Ｊ］． Ｊ ＳｈｏｕｌｄｅｒＥｌｂｏｗ Ｓｕｒｇ，２００５，１４（１）：１７４～１７８． ［１８］李高舜，林［１９］仲晓，黄志明．内外侧入路治疗肘关节恐怖三联征 中国矫形外科杂志，２０１０，１８（２）：１６３—１６５． ［２４］Ｖａｎ Ｒｉｅｔ ＲＰ，Ｍｏｒｒｅｙ ＢＦ，Ｏ’Ｄｒｉｓｃｏｌｌ ＳＷ．Ｕｓｅ ｏｆ ｏｓｔｅｏｅｈｏｎｄｒｌａ ｂｏｎｅ ｒｇａｆｔ ｉｎ ｃｏｅｒｎｏｉｄ ｆｒａｃｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｊ Ｓｈｏｕｌｄｅｒ Ｅｌｂｏｗ Ｓｕｒｇ，２００５．１４ （５）：５１９—５２３． ［Ｊ］．中国骨与关节损伤杂志，２０１２，２７（１）：６７—６８． 飙，罗从风，孙辉，等．肘关节“恐怖三联征”的手术治 疗一改良手术技术及初步结果报告［Ｊ］．中国骨与关节损伤杂 志，２０１０，２５（５）：４０１—４０４． 【２５］Ｐａｐａｎｄｒｅａ ＲＦ，Ｍｏｎｅｙ ＢＦ，Ｏ’Ｄｒｉｓｃｏｉｌ ＳＷ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒ－ ｓｉｓｔｅｎｔ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆｔｈｅ ｅｌｂｏｗ ａｆｔｅｒ ｅｏｒｏｎｏｉｄ ｆｒａｃｔｕｒｅ—ｄｉｓｌｃｔｏｉｏｎ［Ｊ］． Ｊ Ｓｈｏｕｌｄｅｒ Ｅｌｂｏｗ Ｓｕｒｇ，２００７，１６（１）：６８—７７． ［２０］Ｃｈｅｍａｍａ Ｂ，Ｂｏｎｎａｖｉａｌｌｅ Ｎ。Ｐｅｔｅｒ Ｏ，ｅｔ ａ１．Ｔｅｒｒｉｂｌｅ ｔｒｉａｄ ｉｎｊｕｒｙ ｏｆ ｈｔｅ ｅｌｂｏｗ：Ｈｏｗ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｏｕｔｃｏｍｅｓ？［Ｊ］．Ｏｒｔｈｏｐ Ｔｒａｕｍａｔｏｌ Ｓｕｒｇ
