血液常规检验
一、微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定与使用
【实验目的】：掌握微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定、构造与使用。
【实验试剂】：红细胞稀释液、75％乙醇、消毒药棉。
【实验器材】： 一次性采血针、计数板、盖玻片、微量吸管、2ml吸管、中号试管、显微镜、小玻璃棒。
【实验原理】：一次性采血针刺破毛细血管后，用微量吸管吸取一定量的血液，稀释一定的倍数，冲入计数池计数一定体积内的细胞的数量。 【实验方法】：一、微量吸管的使用：用抗凝血训练微量吸管的使用。
二、毛细血管采血（以红细胞计数为例）：
准备：取清洁干燥试管一支，加2ml红细胞稀释液。
采血部位选择、按摩→75％乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒→待酒精挥发干（否则血流不成滴）→自指尖腹内侧迅速刺针→擦去第一滴血→准确吸取10ul血液→用无菌干棉球压住伤口止血→用无菌干棉球擦去管尖外围余血后→将血液释放到稀释液底部→回吸上清液2-3次→轻轻混匀。
三、计数板构造与应用
1．计数板构造
外观构造：每块计数板由“H”型凹槽分上下两个计数室，在计数室两侧各有一条支柱，比计数室高出0.1mm，将一块平整光滑的血细胞计数专用盖玻片（24.0mm×20.0mm×0.6mm）覆盖其上时，盖玻片与计数室间形成0.1mm的缝隙。
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格子构造：计数池长、宽各3mm，平均分成9个大格，每个大方格的容积是0.1 mm3四角的四个大方格分别用单线划分成16个中方格，是白细胞计数区域；中央的大方格用双线条划分成25个中方格，每个中方格又用单线划分成16个小方格，其中四角和正中的5个中方格是红细胞计数区域。
2．计数板的使用：
用清洁干燥柔软的纱布擦拭计数板及盖玻片→用推盖法从计数板下缘向前平推盖玻片将其盖在计数室上→充分混匀细胞悬液→充池→静置→观察细胞分布情况（若严重不匀，应重新充池。） 【注意事项】：
1．采血部位应选择皮肤完整，不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。 2．针刺应迅速，深度适宜（约2－3mm）。待血液自行流出，擦去第一滴血。
3．微量吸管取血时应将微量吸管管尖侧着插入血滴中央。若血流不暢，可以左手自采血部位远端向指尖稍压力至血液流出为止。切忌用力挤压，造成组织液混入，影响结果准确性。
4．计数板在使用中勿让手指接触计数池及盖玻片表面，以访油腻污染，致使充液时起泡。
二、血涂片的制作,瑞氏染色
【实验目的】：掌握血片制作方法，瑞氏染色原理及方法。 【实验试剂】：瑞－吉氏复合染液 （Ⅰ液、Ⅱ液）
【实验器材】：显微镜、载玻片、推玻片、一次性针头、消毒棉球、洗耳球 【实验原理】：细胞的着色既有化学的亲和作用，又有物理的吸附作用，不同的细胞由于其所含化学成分不一样，化学性质各不相同，所以对染料的亲和力也不一样，因此将细胞染成不同的颜色。 【实验方法】：一、瑞一吉氏复合染液配制
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Ⅰ液：取瑞特染粉1g，吉姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸出上层染液，再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上层染液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色瓶中，每天早晚各振摇3′共5天，再存放一周，将染液过滤后即可使用。
Ⅱ液：磷酸盐缓冲液（PH6.5—6.8），取磷酸二氧钾（无水）6.64g，磷酸氟二钠（无水）2.56g，加少量蒸馏水溶解，调整PH后，加水至1000ml。
二、血片制作、瑞氏染色方法
准备：取清洁干燥载玻片，边缘光滑清洁推玻片各一张。
1、制备血涂片：取载玻片→取血1滴于载玻片右端（边缘留1.5cm空隙）→左手持载玻片，右手持推玻片→将推玻片放至血滴前沿逐渐后移至血滴沿推片散开后，推玻片与载玻片成30°～35°的夹角以平稳的速度将血液向前推进→干燥（手持载玻片末端迅速在空气中挥动干燥）。
2、染色：将干透的血涂片放在水平位置→加瑞吉氏复合染液Ⅰ液数滴，以染液覆盖整个血膜为度→静置染0.5～1min→滴加约2倍于Ⅰ液量的Ⅱ液→用洗耳球吹气混匀→染色5－10min→平持玻片用流线型水洗→干燥→镜检
【注意事项】：
1．严格皮肤消毒。
2.血滴大、血黏度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。 3.染料放置时间越长，美兰逐渐氧化为天青，染色效果越好。 4．染液淡，室温低，细胞多则染色时间长，反之减少染色时间。 5．水洗方法为平持血涂片流线型水缓缓冲洗干净，不要先倒掉染液。
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三、白细胞计数（WBC）
【实验目的】：掌握白细胞计数的原理、操作方法与结果报告。
【实验原理】：用白细胞稀释液将全血稀释一定的倍数并破坏红细胞，充入血细胞计数池，显微镜下计数一定体积的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量。
【实验试剂】：白细胞稀释液
【实验器材】： 显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒 【实验方法】：准备：取清洁干燥试管一支，加0.38ml白细胞稀释液。
采血部位按摩→75％乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒→待酒精挥发干（否则血流不成滴）→自指尖腹内侧迅速刺针→擦去第一滴血→准确吸取20ul血液→用无菌干棉球压住伤口止血→用无菌干棉球擦去管尖外围余血后→将血液轻轻释放到稀释液底部→回吸上清液2-3次→混匀→室温静置至液体变为棕褐色即红细胞破坏完全→清洁计数板、盖玻片→充池→静置2－3min待细胞下沉→低倍镜下计数四角大方格内的白细胞总数→计算→报告。
计算：WBC=四个大方格内的白细胞数（N）/4×10×20×106=N/20×109/L 【注意事项】：
1．采血部位应选择皮肤完整，不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。 2．针刺应迅速，深度适宜（约2－3mm）。待血液自行流出，擦去第一滴血。
3.稀释液要过滤使用，试管、计数板均须清洁，以免混入杂质被误认为白细胞。
4.加稀释液、血液量应精确，以保证稀释倍数。
5.计数池内细胞分布要均匀，每个大方格间白细胞数差异不得超过均值的±10％，否则要重新充液计数。
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6.严格掌握计数原则，以免人为扩大或缩小计数区域。
7.白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，反之白细胞过低时可计数8个大方格内白细胞数或加大取血量。
四、白细胞分类计数（DC）
【实验目的】：掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种白细胞的镜下形态。
【实验原理】：将血液制备成涂片，经瑞－吉氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。
【实验试剂】：瑞－吉氏复合染液
【实验器材】：显微镜、外周血标本片、香柏油、擦镜纸、清洁剂 【实验方法】：准备：血涂片制备及瑞－吉氏染色待干
低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的区域→转油镜按一定的规律移动视野，依次进行分类计够100个白细胞→算出各种白细胞的百分比→报告
【注意事项】：
1.涂片制备要厚薄适中、均匀、头体尾分明。 2.分类时要有程序地连续进行，避免主观选择视野。
3.分类中如见幼红细胞，不计入100个白细胞内，以分类100个白细胞过程中见到幼红细胞多少个来报告，并应注明其所属阶段，
4.分类中应注意观察成熟红细胞、血小板的形态染色及其分布情况，注意有无寄生虫（如疟原虫）及其他异常所见。
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五、白细胞计数（WBC）及分类计数(DC)
【实验目的】：掌握白细胞计数及分类计数原理、方法与结果报告 【实验原理】：
白细胞计数原理：用白细胞稀释液将全血稀释一定的倍数并破坏红细胞，充入血细胞计数池，显微镜下计数一定体积的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量。
白细胞分类计数原理：将血液制备成涂片，经瑞－吉氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。
【实验试剂】：白细胞稀释液、瑞－吉氏复合染液
【实验器材】：显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒、载玻片、推玻片、香柏油、擦镜纸、清洁剂
【实验方法】：准备：1.取清洁干燥试管一支，加0.38ml白细胞稀释液。
2.取清洁干燥载玻片，边缘光滑清洁推玻片各一张。
采血部位按摩→75％乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒→待酒精挥发干（否则血流不成滴）→自指尖腹内侧迅速刺针→擦去第一滴血→准确吸取20ul血液→用无菌干棉球擦去管尖外围余血后→将血液轻轻释放到稀释液底部→回吸上清液2-3次→混匀→另取血一滴于载玻片的右端→立即推制血膜→用无菌干棉球压住伤口止血→清洁计数板、盖玻片→充池（静置2－3min待细胞下沉）→低倍镜下计数四角大方格内的白细胞总数→将干透的血膜进行瑞－吉氏染色→油镜下分类计数→计算→报告。
六、红细胞计数（RBC）、Hb测定
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【实验目的】：掌握红细胞计数，Hb测定原理、操作方法，规范的报告结果
【实验原理】：
红细胞计数原理：用等滲稀释液将血液稀释一滴倍数，充入计数池，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经换算求得内升血液中的红细胞数。
Hb测定（HiCN法）原理：血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，后者再与氰离子结合形成稳定地氰化搞铁血红蛋白（HiCN），HiCN在规定波长（540nm）和液层厚度（1cm）的条件下具有一定的毫摩尔消光系数。可用标准的高精度分光光度计进行直接定量测定，或用HiCN标准液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。
【实验试剂】：红细胞稀释液（甲醛枸木缘酸盐稀释液）， HiCN转化液 【实验器材】：改良Neubauer计数板、显微镜、分光光度计、玻璃试管、微量吸管、玻璃棒、 【实验方法】：
RBC：取清洁干燥试管一支→加红细胞稀释液1.99ml→加未梢血10ul于稀释液底部→吸取上清液嗽洗3—4次→颠倒混匀→清洁计数板，盖玻片→充液→静置2′—3′→计数（中央大格中四角及正中5个方各细胞数）→计算
RBC=5个中方格细胞数×5×10×200×106=5个中方格细胞数×1012/L。 Hb测定:
1.直接定量测定法：取中号试管一支→加HiCN转化液5ml→加未梢血20ul→混匀静置5′→721比色，波长540nm，以转化液为空白对照管→测其吸光度“A”→计算（“A”×367.7）→报告
2.标准曲线法：
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将血红蛋白标准液稀释成不同的三种浓度（150g/L、100g/L、50g/L）分别测其吸光度“A”，以“A”为纵坐标，血红蛋白标准液参考值（g/L）为横坐标，绘制标准曲线。通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度。 【注意事项】：
1.取血应顺利、准确，采血部位不得有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症，不得过渡挤压，红细胞数量明显增高者可适当加大稀释倍数。
2. HiCN转化液应置棕色瓶于4℃冰箱中，不能储存于白色瓶、塑料瓶及强光下，否则会使CN丢失，结果偏低。
3．HiCN转化液中有氧化钾剧毒，防止污染。测定后的比色液不能与酸性溶液混合，否则可产生剧毒的氢氰酸气体。
4.所用分光光度计的波长、吸光度需要校正，带宽应小于1nm，比色杯光径1.000cm时，测定温度为20℃～25℃。
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七、血液常规检验
【实验目的】：掌握血常规的连续操作规程并规范的报告结果。 【实验原理】：见实验二、三、四、六
【实验试剂】：红细胞稀释液、白细胞稀释液、瑞－吉氏复合染液、HiCN转化液
【实验器材】：改良Neubauer计数板、分光光度计、玻璃试管、微量吸管、显微镜、玻棒。 【实验方法】：
取大、中、小号试管各一支→分别加HiCN转化液5ml、红细胞稀释液2ml、白细胞稀释液0.38ml→手指消毒针刺→分别取未梢血10ul于红细胞稀释液中、20ul于白细胞稀释液中、20ul于HiCN转化液中→并及时混匀→取清洁干燥玻片粘取1滴血液于玻片一端→推制血片→待干→721比色→瑞氏染色→白细胞及红细胞计数→DC→计算→报告（血常规结果报告）
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正常值：
成人 儿童 新生儿 1.WBC:（4－10）×109/L （5－12）×109/L （15－20）×109/L 成年男性 成年女性 儿童 2.RBC:（4－5.5）×1012/L (3.5-5) ×1012/L (6-7) ×1012/L 3.HB: 120-165g/L 110-150 g/L 170-200 g/L 4.DC: N: 杆状1－5％ 分叶50－70％ L：20－40％ M：3－8％ E：0.5－5％ B：0－1％
【注意事项】：
1.取血应顺利、准确，采血部位不得有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症，不得过度挤压。
2．HiCN转化液中有氧化钾巨毒，防止污染。测定后的比色液不能与酸性溶液混合，否则可产生剧毒的氢氰酸气体。
3．细胞计数混合不易过分震摇。
4. 瑞氏染色时加染液与缓冲液的比例为1：1或1：2。
5.采取标本的顺序：红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、血片制作
八、血小板计数（BPC或PLT）
【实验目的】：掌握血小板的计数原理、方法、镜下形态及结果报告。 【实验原理】：用稀释液将血液稀释一定倍数后混匀，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积的血小板数，经换算求得每升血液内的血小板数。 【实验试剂】：10g/L草酸铵液
【实验器材】：显微镜、：改良Neubauer计数板
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【实验方法】：准备：取清洁干燥的小试管一支，加10g/L草酸铵液0.38ml 准确取自然流出的外周血20ul→轻轻放入到上述稀释液底部→回吸上清液漱洗吸管2－3次→混匀→室温静置10 min→清洁计数板、盖玻片→混匀细胞悬液后充池→静置10 min－15min→于高倍镜下计数中央大方格内四角和中央5个中方格内血小板总数→计算→报告
计算：血小板数/L＝5个中方格内血小板总数×109/L
【注意事项】：
1. ．所用试剂、器材应10g/L草酸铵液稀释液中无尘埃、细菌等污染。 2.毛细血管采血时，针刺深度应达3mm。采血要快避免血液凝固. 若遇血小板成簇分布时，应重采标本计数.
3.细胞悬液充入计数池中静置时，应注意保持湿度，避免水分蒸发。 4.计数时光线不可太强，注意微有折光性的血小板与尘埃的鉴别。血小板为轻度折光性的园形、椭园形。
5．血小板计数应在1h内完成，否则结果可降低。
九、网织红细胞计数（RC）
【实验目的】：掌握网织红细胞计数原理、测定方法、镜下形态、结果报告。 【实验原理】：网织红细胞为晚幼红细胞脱核后，但尙未完全成熟的红细胞。其胞质中尙残存核糖体、核糖核酸等碱性物质，经活体染色后于胞质中可见蓝绿色网点状或点粒状结构。
【实验试剂】：10g/L黄焦油篮生理盐水溶液 【实验器材】：显微镜、试管、载玻片、推玻片
【实验方法】：准备：取清洁干燥小试管一支，加10g/L黄焦油篮生理盐水溶液2－3滴
取外周血2－3滴于上述试管中→立即混匀→37℃下染色15－20min→取试管里的混合血液一滴于载玻片一端→推制成薄血膜→待干燥→油镜下
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计数（于目镜筒中放一缩小视野的硬纸片）至少1000个红细胞中的网织红细胞数→计算→报告
计算：网织红细胞百分比＝计数的网织红细胞数/100
【注意事项】：
1.网织红细胞必须在活体染色下才能显示。
2.染色时血液与染料的比例约为1：1，贫血时适当增加血量，室温较低时适当延长染色时间或置37℃温箱.
3.涂片应厚薄适宜，以红细胞不重叠为度，涂片后应及时计数，否则网状结构消失。
4.计数区域一般选择血膜的体部，自体部向尾部迂回检查。
十、嗜酸性粒细胞计数
【实验目的】：掌握嗜酸性粒细胞直接计数的原理、操作方法、镜下形态及结果报告。
【实验原理】：用嗜酸性粒细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，破坏红细胞和其他大部分白细胞并使嗜酸性粒细胞着色，滴入血细胞计数池，显微镜下计数一定体积内的嗜酸性粒细胞，经换算得出每升血液中嗜酸性粒细胞数。 【实验试剂】：2％伊红－丙酮嗜酸性粒细胞稀释液
【实验器材】：显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒 【实验方法】：准备：取清洁干燥试管一支，加0.38ml嗜酸性粒细胞稀释液。
精确吸取外周血20ul→轻轻放入到上述稀释液底部→回吸上清液漱洗吸管2－3次→混匀→室温静置→清洁计数板、盖玻片→混匀细胞悬液后充池→静置3 min－5min→于低倍镜下计数两侧计数池中10大方格（每侧计数池的四角和中央大方格）内的嗜酸性粒细胞数→计算→报告 计算：嗜酸性粒细胞数/L＝10个大方格内嗜酸性粒细胞数×20×106/L
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【注意事项】：
1.计数应在30min内完成，因时间过长嗜酸性粒细胞可被溶解，结果偏低。
2.血液加入稀释液后应及时混匀，否则易致血液凝固和细胞聚集，但不易用力振摇以免嗜酸性粒细胞破碎。
3.震摇与残留的中性粒细胞区别，中性粒细胞一般不受色或受色极浅，且其颗粒较小。4.做嗜酸性粒细胞计数最好固定时间，以免受日间生理变化影响
十一、血细胞分析仪使用、LEC、血沉
【实验目的】：熟悉血细胞分析仪的检测原理及方法；掌握LEC的镜下形态、血沉检测方法及结果观察报告。 【实验原理】：见仪器说明书 【实验试剂】：溶血素、清洗液
【实验器材】：血细胞分析仪、显微镜、血沉架、血沉管 【实验方法】：
红细胞沉降率（ESR）:取抗凝血约2ml→灌制血沉管“0”刻度→垂直竖立在血沉架上→室温静置1小时→观察红细胞沉降毫米数→报告（红细胞沉降率：△△mm/h）
十二、凝血酶原时间测定（PT）
【实验目的】：目的掌握PT测定方法、原理及结果观察报告 【实验原理】：
在受检血浆中加入足量的凝血活酶和钙离子，测定血浆凝固所需的时间，即为血浆凝血酶原时间。本试验是外原性凝血系统常用的筛检试验。 【实验试剂】：1.血浆
2.组织凝血活酶 3.氯化钙溶液
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【实验器材】：恒温水浴箱、离心机、试管、微量加样器、秒表
【实验方法】：准备：将1.2.3.试剂分别置37℃水溶预热，小试管预热。
取已预热清洁干燥小试管→加血浆0.1ml，同时加组织凝血活酶液0.1ml、cacl20.1ml→混匀、开动秒表计时→在37℃水溶中不断轻轻摇动小试管8″→取出观察，来回倾斜试管，混合物不再流动时(出现胶冻状)立即停表，读取时间即为凝血酶原时间，作3次取均值报告。 【注意事项】：
1.采血应“一针见血”，抗凝剂与血液比例（1：9）应准确。取血后4h内完成测定。
2.试剂在用前先预温到测定温度，且不能超过30分钟。
3.标本测定前应先测定正常人混合血浆，其PT值在允许范围内才能测定样本。
4.必须在36.5—37.5℃温度下操作。
输血技术
一、ABO
血型鉴定（正、反定型）
【实验目的】：掌握血型鉴定（正定、反定）原理、测定方法及结果观察、分析、报告。
【实验原理】：根据红细胞表面A、B抗原与相应的抗体特异性结合，可使红细胞出现凝集反应这一原理，通过正、反定型来判断型别。正定型：用已知抗A、抗B型血清来测定红细胞上有无相应的A、B抗原；反定型：用已知A抗原和B抗原红细胞来测定血清中有无相应的抗A、抗B抗体。 【实验试剂】：标准抗A、抗B血清；5％A、B 型标准红细胞生理盐水悬液；生理盐水
【实验器材】：试管、离心机、记号笔、滴管、显微镜
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【实验方法】：准备：1、分离血清，并做好标记。
2、洗涤红细胞，制备5％红细胞悬液，做好标记。
一、正定（用已知标准血清鉴定血型）。
取试管2支→分别标明抗A、抗B字样→加5方红C晨液各1滴→离离心（1000转/min 1分钟）→观察结果。
二、反定（已知标准红细胞鉴定血型）
取标准红细胞A、B型各1-2滴→分别装在大小相等并表明A、B字样的两支试管中→分别加被检者血清1-2滴→混匀离心→观察结果
结果判断【注：（＋）示凝集 （－）示不凝集】 正定 抗A（B型） 抗B（A型） ＋ － － ＋ － ＋ － ＋ 被检者血型 Ａ Ｂ Ｏ ＡＢ 反定 B型标准红细胞 ＋ － ＋ ― A 型标准红细胞 － ＋ ＋ ― 【注意事项】：
1.格查对，切不可将姓名、标本、血型等搞错，要求正、反定型结果一致。
2.观察结果、登记、出报告均应仔细查对
3.滴管、试管应清洁干燥，各吸管不能混用，避免溶血及相互污染
二、交叉配血实验（同型、异型配血）
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【实验目的】：掌握盐水介质配血法的原理、操作方法及结果观察、分析、报告。
【实验原理】：天然抗体IgM因其分子链较长，在盐水介质中，可以克服红细胞表面电荷的排斥力，与含有相对应抗原的红细胞结合并出现肉眼可见的凝集。
【实验试剂】：生理盐水
【实验器材】：试管、滴管、离心机、记号笔 【实验方法】：准备：1、分离血清，并做好标记。
2、洗涤红细胞，制备2％红细胞悬液，做好标记
一、同型交叉
（1）取试管2支分别注明主侧、次侧：
主侧：受血得血清1滴+献血者2％红细胞悬液1滴。 次侧：受血者2％红细胞悬液1滴+献血者血清1滴。 （2）充分混匀→离心1分钟（1000转/min）→观察结果。
（3）结果观察：在白色背景下，先观察上清液呈正常血清状即无溶血现象，再轻摇试管，试管内血球呈现均匀混浊也无凝集。为叉配血试验相合，若有溶血或凝集均不可输。
二、异型交叉：“O”型作为献血者献给“A”或“B”或“AB”型，其结果是：主侧不凝，次侧凝。 【注意事项】：
1.严格查对，切不可将受血者、献血者姓名、标本、血型等搞错。 2.观察结果、登记、出报告均应仔细查对。
3.吸管、试管应清洁干燥，各吸管不能混用，避免溶血及相互污染。 4.交叉配血时主侧、次侧一定要分清。
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尿液检验
一、尿液理学及化学检验
（尿液外观、SG、PRO、GLU、KET、URO）
【实验目的】：掌握尿液的一般理学检验及常用化学检验原理、操作方法及结果观察、报告。 【实验原理】：
1.PRO原理：①磺基水杨酸发：在酸性条件下，磺基水杨酸的磺酸根阴离子与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐沉淀。②加热醋酸法：加热煮沸使蛋白质变性凝固，加乙酸使尿pH接近等电点（pH5左右）而加速蛋白质沉淀。
2.GLU（班氏法）原理：葡萄糖在碱性溶液中加热后，由环状结构变为带醛基的链状结构而具有还原性，可将硫酸铜还原为黄或红色的氧化亚铜（Cu2O）而沉淀。
3.KET（朗格氏环状法）原理：尿中的酮体（丙酮和已酰乙酸）与亚硝基铁氰化钠和硫酸铵作用，可生成异硝基、异硝基胺，后者与（CN）53－生成紫红色复合物。
4.URO原理：在酸性溶液中，尿胆原与对二氨基本甲醛反应，生成樱红色化合物。
【实验试剂】：5％冰乙酸液、200g/L磺基水杨酸液、班氏试剂、亚硝基铁氰化钠、氨水、Ehrlich试剂
【实验器材】：试管、PH试纸、滴管、酒精灯、试管夹、尿比重计 【实验方法】：
1、尿色，透明度：正常人黄色透明，若遇混浊尿，采取加热加酸法鉴别；深黄色（黄胆病人）。
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2、尿PH值：正常尿液一般为弱酸必（PH6.5 ）。
3、尿比重(SG)：成人为1.015—1.025（多积尿），若受饮水、出汗影响比重波动于1.003—1.030之间（随机尿）。
尿比重测定方法：斜持比重筒（量筒），将尿液沿管壁缓慢倒入量筒中以将比重计浮起为度，避免激起泡沫，如有泡沫，可用滤纸吸去，将比重计轻轻放入并加以捻转，使其悬浮在尿液中，待比重计稍停稳后，读取液面的比重测度。
4、尿蛋白定性试验(PRO)（两种方法）
（1）加热醋酸法（参考方法）：取试管→加尿至试管2/3处→用试管夹夹持试管下1/3处→加热上1/3处的尿液（注意：不断转动试管均匀加热，防止尿液沸溅）→加冰醋酸2—3滴→再加热煮沸→观察结果→报告。
（2）200g/L磺基水杨酸法（首选方法）：取试管→加尿约1ml于试管内→加磺柳酸数滴→观察结果→报告。
5、尿糖定性试验(GLU)（班氏法）：取试管→加班氏试剂1ml于试管内→加热煮沸→试剂仍呈清亮蓝色→滴加尿液2—3滴→再次煮沸2min→冷却→观察结果→报告。
6、尿酮体检验(KET)（即格氏环状法）：取试管一支→加尿液约2ml→加冰乙酸数滴混匀→加亚硝基铁氰化钠（粉少许）→震荡混匀→沿管壁轻轻加入氨水作环状试验→报告。
7、尿胆原检验（URO）（欧氏法）：取试管→加新鲜尿1ml→加欧立区试剂0.1ml混匀→静置10分钟→在白色背景下，从管口向管底观察结果→报告。
【注意事项】：
1、认真观察尿色、量、测PH。
2、加热煮沸时，切忌管口对人，应不时振动试管，以防止溢出。
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3、尿胆原检验时尿液应新鲜，否则尿胆原在空气中氧化为尿胆素而致假阴性结果。
4、在测尿比重时应注意校正温度及尿量不足时的校正方法。
二、尿液沉渣镜检
【实验目的】：掌握尿沉渣标本制作方法及尿沉渣显微镜下检查的内容。 【实验原理】：用显微镜检查方法，依据尿液细胞、管型等有形成分的形态特征，识别并记录其在一定显微镜视野内的数目。 【实验器材】：玻片、离心机、试管、显微镜
【实验方法】：取中号试管一支→加混合均匀尿液约至试管2/3处→离心（5500转/分钟）5分钟→一次性倾去上清液留取尿沉渣液约0.2ml→混匀→在载玻片上涂成薄片→镜检→报告
报告方式：
“少许”少数视野可见（1—4个）
“+”占视野面积1/4或每个视野都有少量敬在（5—14个） “++”占视野面积的一半（15—29） “+++”占视野面积的3/4（30—50） “++++”满视野（50个以上）
注：低倍镜下计数20个视野所见管型数，高倍镜下计数至少10个视野各类细胞数。 【注意事项】：
1．尿在离心前和涂片前必须混匀 2．弃去上清液应一次性倾去勿来回颠倒。 3．报告方式规范。
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三、1小时细胞排泄率测定
【实验目的】：掌握尿液1小时细胞排泄率检验原理、方法及结果观察、报告。
【实验原理】：在日常生活不受限制的情况下，准确留取3小时的全部尿液。取混匀后的部分尿液离心，留沉淀液，混匀充入细胞计数池，计数一定体积沉淀液中的红细胞、白细胞和管型，然后换算成1小时尿中相应的数量。 【实验器材】：量筒、细胞计数板、刻度离心管、离心机 【实验方法】：
1.准确测量尿量,并记录.
2.将尿液充分混匀→取10ml尿于刻度离心内→离心﹝1500r/min﹞5分钟→准确吸取上清液9ml→轻轻混匀管底沉淀→取1滴充入计数板两侧的计数池中→低倍镜下计数18个大方格里的管型数,高倍镜下计数10个大方格里的红细胞.白细胞﹝包括肾小管上皮细胞﹞→计算→报告
计算:N=C×10/D×1000×﹝V/(10×3)﹞
式中：N为1小时尿中细胞或管型数
D为计数的大格数
C为计数D个大格所见的细胞或管型数 V为3小时尿量毫升数
【注意事项】：
1.尿液标本留取时可不限制饮食，但勿过量饮水。 2．尿在离心前和充池前必须混匀
3．尿液应新鲜检查，PH应在6以下，若为碱性尿，则细胞和管型易溶解。
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四、尿液分析仪的使用、HCG检测
【实验目的】：掌握尿液分析仪的使用方法及 HCG检测原理、操作方法及结果观察、报告。
【实验原理】：HCG检测（胶乳凝集抑制试验）原理：将尿液与抗HCG 血清混合，待反应后加入被HCG致敏的胶乳悬液，若尿中含有HCG，则先于胶乳与血清结合，故胶乳仍呈均匀状，不出现凝集，反之，非孕妇尿液因不含HCG，抗血清中的抗体则胶乳抗原发生反应，出现凝集。 【实验试剂】：妊娠诊断血清、妊娠诊断抗原
【实验器材】：尿液分析仪、显微镜、玻片、试管、尿液试纸条 【实验方法】：
1、尿液分析仪结构、原理见教材；
尿液分析仪的使用：每2个实验台为一小组；由老师示教操作方法，注意事项，然后每组抽人操作，认真操作，熟练操作程序，为以后的临床工作打下坚实基础，并学会在使用仪器过程中爱护仪器，保养仪器。
2. HCG检测：取玻片一张→于玻片的一端加被检尿液另一端加生理盐水(阴性对照)各一滴→两端同时加HCG抗血清各一滴→混匀1分钟→再同时加胶乳抗原各一滴→充分混匀→放置5分钟后观察结果→报告
阳性:不凝集 阴性:凝集 【注意事项】：
1. 尿液、抗血清和胶乳抗原必须按规定顺序滴加，滴量大小应一致。 2. 不同批号的试剂不能互相搭配使用。
3. 室温低于20℃，反应缓慢，应适当加温或延长反应时间。 4. 标本浑浊有沉淀时，应离心取上清液测定。
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5.试剂在2℃～8℃冰箱保存，特别注意不能冰冻，否则胶乳上HCG抗原释放，不能再凝集。
五、尿常规（RT）检验
【实验目的】：掌握尿常规检验规程，熟悉使用尿液分析仪。 【实验原理】：见实验十三、十四
【实验试剂】：200g/L磺基本杨酸、5%冰乙酰
【实验器材】：尿液分析仪、显微镜、玻片、试管、PH试纸、离心机、酒精灯
【实验方法】：
一、理学检验
①尿色 ②尿量 ③透明度 ④PH 二、尿蛋白定性（两种方法任选一种）
1．法：取试管→加尿约1ml于试管内→加磺柳酸数滴→观察结果→报告。
2.5%冰乙酰法：取试管→加尿至试管2/3处→用试管夹夹持试管下1/3处→加热上1/3处的尿液（注意：不断转动试管均匀加热，防止尿液沸溅）→加冰醋酸2—3滴→再加热煮沸→观察结果→报告。
三、尿液沉渣镜检
取中号试管一支→加混合均匀尿液约至试管2/3处→离心（5500转/分钟）5分钟→一次性倾去上清液留取尿沉渣液约0.2ml→混匀→在载玻片上涂成薄片→镜检→报告
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细胞成分：用最低值～最高值/HPF(或平均值/HPF)报
报告方式 管型成分：用最低值～最高值/LPF(或平均值/LPF)报
告。
结晶成分：用高倍视野观察，占视野1/4为+，占视野
1/2为++，占视野3/4为+++，满视野为++++。
四、尿液分析仪使用
每2个实验台为一小组；由老师示教操作方法，注意事项，然后每组抽人操作，认真操作，熟练操作程序，为以后的临床工作打下坚实基础，并学会在使用仪器过程中爱护仪器，保养仪器。
排泄物及分泌物检验
一、粪常规（Rt）检验及粪隐血（OB）
【实验目的】：掌握粪便外观、显微镜检查的方法及粪便隐血试验的方法，熟悉镜检时粪便中各物质的形态和估计方式。
【实验原理】：粪隐血（OB）试验原理：血红蛋白中的亚铁血红素有类似过
氧化物酶的活性，能催化过氧化氢分解释放新生态氧，将受体邻联甲苯胺氧化成邻甲偶氮苯而显蓝色。
【实验试剂】：生理盐水、10g/L邻联甲苯胺冰乙酸溶液、3％过氧化氢 【实验器材】：显微镜、竹签、载玻片、滤纸 【实验方法】：
一、粪便外观检查
1．颜色 2.粘稠度 二、显微镜检验
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取玻片→加生理盐水1—2滴→用竹签自粪便多处取材（特别是脓、血、粘液等异常部分）→与盐水混合涂成薄片（以能透过字迹为度）→低倍镜观察有无虫卵、原虫→转高倍镜检验细胞情况并对其数量进行估计→报告
报告方式：细胞数报告10～20个视野的最低值至最高值或报告平均值。低倍镜直接报告见到XX虫卵及食物残渣的多或少。
三、粪便潜血试验（OB试验）
用竹签挑取少许粪便于滤纸片上，滴加邻联甲苯胺冰乙酸液2—3滴，再加H2O2（1mol/L）2—3滴，于标本上立即观察结果，报告。
（-）2′后仍不显色 （+）10S后由浅兰渐变深兰
结果观察 （++）初显浅兰褐色渐变成明显兰褐色
（+++）立即呈现兰褐色 （++++）立即呈现黑兰色
【注意事项】：
1.镜检时至少每张涂片观察10个视野。
2.因3％过氧化氢不稳定，长时间放置可使反应减弱，所以试验前应检查试剂是否有效，可将过氧化氢滴于未染色的血片上，如产生泡沫表示过氧化氢有效。
二、阴道分泌物检验
【实验目的】：掌握阴道清洁度的内容、判定标准及常见阴道菌的形态。 【实验器材】：阴道分泌物标本片、显微镜、擦镜纸、清洁液、镜油 【实验方法】：
一.阴道分泌物清洁度检查：先用低倍镜观察，再用高倍镜检查，根据上皮细胞、白细胞（或脓细胞）、杆菌、球菌的多少分度。(清洁度Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ)
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阴道清洁度的分级判断
清洁度 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 阴道杆菌 ++++ ++ - - 杂菌（球菌） - - ++ ++++ 上皮细胞 ++++ ++ - - 白细胞（或脓细胞） 0-5/HPF 5-15/HPF 15-30/HPF ﹥30/HPF 二.展片:阴道杆菌、霉菌、淋病双球菌、阴道线索细胞等。（要求绘出镜下形态）
【注意事项】：看展片时不可动粗调更不要移动视野,看不清只可动微调
体液检验
一、潘氏试验、李凡他试验、精子镜检
【实验目的】：掌握潘氏试验、李凡他试验的检测原理、操作方法及结果观
察、报告，熟悉镜下异常及正常的精子形态。 【实验原理】：
潘氏试验原理：脑积液中球蛋白与苯酚结合，形成不溶性蛋白盐而产生白色混浊或沉淀。
李凡他试验原理：浆膜上皮细胞在炎症反应的刺激下分泌粘蛋白量增加。粘蛋白是一种酸性糖蛋白，等电点为PH3～5，因此在稀乙酸中出现白色沉淀。
【实验试剂】：饱和苯酚溶液、冰乙酸 【实验器材】：试管、吸管、量筒、滴管 【实验方法】：
一、潘氏法或潘迪试验
取饱和石碳酸（苯酚）约2ml于试管中，用滴管加入标本1滴，置黑色背景处观察，如显白色混浊即为阳性，结果可根据白色浑浊程度分别判断为：
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（-）无变化 （±）白色浑浊不明显 （+）白色微浑 （++）白色浑浊 （+++）絮状沉淀 （++++）立即形成凝块
二、浆膜腔积液常规（浆液粘蛋白测定）Rivalta李凡他试验 取100ml量筒一个，加冰己酸2—3滴，再加水至100ml处，加浆液标本1滴于稀乙酸液中，呈白色云雾状↓快速下沉至管低者为粘蛋白阳性，如产生白色混浊不明显，并较快消失为阴性。
三、精子形态
显微镜下观察正常及异常精子形态。
【注意事项】：脑积液标本中入红细胞过多，应离心沉淀上清液检测。当室温在10℃以下，应将试剂保存在37℃恒温箱中，否则饱和度降低可致试验假阴性。
穿刺细胞及细针吸细胞检验
一、 正常上皮细胞、肿瘤细胞展片 （脱落细胞展片：正常上皮、肿瘤细胞）
【实验目的】：掌握脱落细胞中正常上皮、肿瘤细胞的镜下形态。 【实验器材】：显微镜、脱落细胞标本片
【实验方法】：看展片，绘出显微镜下所展示的细胞形态。
【注意事项】：看展片时不可动粗调更不要移动视野,看不清只可动微调。
二、巴比染色（Pap）
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【实验目的】：掌握脱落细胞基本染色方法——巴氏染色法的原理、染色方法及染色结果的评价。
【实验原理】：各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，经染色后可看到不同颜色，如细胞核的主要成分是脱氧核糖核酸（DNA）能与带正电荷的碱性染料（苏木素）染成紫蓝色，胞质中的主要成分为蛋白质，一般呈碱性，所以能与带负电荷的酸性染料伊红、橘黄等结合呈红色或橘红色。
【实验试剂】：赫氏苏木素染液、橘黄G染液、EA染液、稀碳酸锂溶液、0.5％盐酸乙醇溶液、各种不同浓度（50％、70％、80％、95％）的乙醇 【实验器材】：载玻片、镊子、显微镜、染色缸、滤纸 【实验方法】：
1、固定：将涂片置入固定液（95%乙醇49.5ml,乙醚49.5ml.冰乙酸1ml。中固定15—30min。
2、渐进入水：己固定的涂片依次置于80%、70%、50%乙醇溶液，最后置入蒸馏水中各1min。
3、染核：涂片浸入苏木素染液5-10min,取出后流水洗净。 4、分色：浸入0.5％盐酸乙醇中分色数秒，取出后流水冲洗干净，肉眼观察涂片为淡红色即可。
5、篮化：浸入稀碳酸锂溶液，篮化2min，涂片变成兰色，流水冲洗干净。
6、渐进脱水：将染核后的涂片依次浸入50%、70%、80%、95％乙醇溶液中个1-2 min。
7、染胞质：
（1）先浸入桔黄G6染液染色2min,然后置入95%乙醇液中洗涤2次。 （2）再浸入EA36染液中染色2-3min，然后置95%乙醇液中洗涤两次。 【注意事项】：
1、严格按照操作规程操作。 2、掌握好每步的染色时间。
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3、水洗方法用流线型水洗。
三、女性生殖道、浆膜腔脱落细胞检验
【实验目的】：掌握女性生殖道、浆膜腔脱落细胞中的正常及异常细胞特征。 【实验器材】：显微镜，女性生殖道和浆膜腔脱落细胞学标本片 【实验方法】：
一、阴道脱落细胞：镜下观察正常及异常阴道脱落细胞形态及诊断的五级分类标准。
基底层（内底层、外底层）、 磷状上皮 中层、
正常阴道脱落上皮细胞 表层（角化前、角化、完全角化）
纤毛柱状上皮 柱状上皮 粘液柱状上皮 储备细胞
二、浆膜腔：
正常间皮细胞 1、正常及炎症变性细胞 退化性的间皮细胞 异性间皮细胞 腺癌细胞 2、癌细胞 磷癌细胞 未分化癌细胞 阅片要求：
1、每台镜下至少阅片4-5张，（各种炎症及肿瘤）。
2、阅片中看生殖道细胞以上皮细胞及其变化为主，认真观察、识别细胞。
3、背景细胞也要注意观察。
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