医药论坛杂志２０１４年７月第３５卷第７期Ｊ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｏ１．３５ Ｎｏ．７ Ｊｕｌｙ ２０１４ ・４５・ ・论 著・ ＤＮＡ微阵列芯片法检测临床痰标本中结核分枝 杆菌耐多药突变基因的研究 郝宝林，邢进，李辉 河南省疾病预防控制中心４５００１６ 摘要：目的ＤＮＡ微阵列芯片法（博奥）检测临床痰标本中耐多药结核分枝杆菌相关基因突变，评价诊断耐多药 对涂阳肺结核患者的痰标本进行ＤＮＡ微阵列芯片法检测，与金标准传 结核病（ＭＤＲ—ＴＢ）的应用价值。方法统比例法药物敏感性试验比较，获得ＤＮＡ微阵列芯片法的检测灵敏度、特异度和一致率。结果 以传统药敏作 金标准，ＤＮＡ微阵列芯片法检测５５３例痰标本，利福平、异烟肼和ＭＤＲ检测的灵敏度、特异度和一致率分别为 ９２．７３％、９８．１９％和９７．６５，８１．８２％、９３．４３％和９２．ｏ４，８２．３５％、９７．３０％和９６．３８。结论多药检测技术具有较高的灵敏度和特异性，适用于肺结核病人的耐多药结核病人诊断。 关键词：芯片；分枝杆菌；耐多药 中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７２－３４２２（２０１４）０７－００４５－０３ ＤＮＡ微阵列芯片法耐 Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｂｉｏｃｈｉｐ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ、ｖｉｔｈ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｆｒｏｍ ｃｌｉｎｉｃ ｓｐｕｔｕｍ ｓａｍｐｌｅ ＨＡＯ ｂａｏ—ｌｉｎ，ＸＩＮＧ ｊｉｎ，ＬＩ Ｈｕｉ Ｈｅｎａｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００１６，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｍｕｈｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｍｙｃｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｕｓｉｎｇ ａ Ｂｉｏ・ ｃｈｉｐ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃ ｓｐｕｔｕｍ ｓａｍｐｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｗｉｔｈ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｅｓｔ ａｓ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ，ｓｐｕｔａ ｆｒｏｍ ｓｍｅａｒ—ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ａ Ｂｉｏｃｈｉｐ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ａｎｄ ａｃｃｏｒｄａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｆｏｒ ５５３ ｓｐｕｔａ ｓａｍｐｌｅｓ，ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ａｎｄ ａｃｃｏｒｄａｎｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｉｐ ｓｙｓｔｅｍ ｏｒｆ ＲＩＦ ａｎｄ ＩＮＨ ａｎｄ ｍｕｈｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔｎｃｅ（ＭＤＲ）ｗｅｒａｅ ９２．７３％，９８．１９％， ９７．６５ ａｎｄ ８１．８２％、９３．４３％，９２．０４ ａｎｄ ８２．３５％、９７．３０％，９６．３８，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ Ｂｉｏｃｈｉｐ ｓｙｓｔｅｍ ｓｈｏｗｓ ｂｅｔｔｅｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ，ｉｔ ｉｓ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｈｉｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｔｕｂｅｒｃｕ— ｌｏｓｉｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂｉｏｃｈｉｐ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ；Ｍｕｈｉｄｒｕｇ 随着分子检测技术的发展和对结核分枝杆菌 耐药性与基因突变相关性的研究，基于检测结核 分枝杆菌基因突变的耐药分子检测方法被发展起 份阳性级别高的痰标本，或１份阳性及１份质量好 的阴性痰标本，按照中国防痨协会《结核病诊断实 验室检验规程》４进行中和离心法消化。消化后的 痰液４℃于３，０００ ｇ离心２０ ｍｉｎ，倒掉上清液再加 入２ｍｌ ＰＢＳ（ＰＨ６．８）重新悬浮，接种０．１ ｍｌ消化液 来。本研究通过检测涂阳肺结核病人的临床痰标 本来评价该方法检测耐多药结核病的应用价值。 １资料与方法 于２管改良中性Ｌ—Ｊ培养基（Ｂａｓｃｏ）上，剩余消化 液于４℃（１ｄ）或一８０％长期保存备用，结核分枝杆 １．１标本收集按照《中国结核病防治规划痰 涂片镜检标准化操作及质量保证手册》３要求于收 集开封市结核病防治所就诊断的涂片阳性肺结核 病人３份痰标本，每份约５ｍｌ，选取３份标本中２ 菌的分离培养在开封市结核病防治所参比实验室 （开封市结核病实验室）进行。 １．２ 药敏试验对分离培养出的菌株进行结核分 枝杆菌菌种鉴定并进行利福平和异烟肼药敏试 ・４６・ 医药论坛杂志２０１４年７月第３５卷第７期Ｊ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖ０１．３５ Ｎ０．７ Ｊｕｌｙ ２０１４ 验，菌种鉴定使用对硝基苯甲酸（ＰＮＢ，５００１ｘｇ／ｍ１） 鉴别培养基生长试验，利福平（４０ｔｚｇ／ｍ１）和异烟肼 药敏试验（０．２１￣ｇ／ｍ１）为比例法，均按照中国防痨 均由Ｂａｓｃｏ公司提供，菌型鉴定和药敏试验在开封 市结核病实验室进行。 ＤＮＡ微阵列芯片法检测５５３例标本与传统药 敏试验比较，检测利福平的灵敏度为９２．７３％（５１／ ５５），特异度为９８．１９％（４８９／４９８），一致率为 协会《结核病诊断实验室检验规程》进行。培养基 ９７．６５％（５４０／５５３）；检测异烟肼的灵敏度８１．８２ （５４／６６），特异度为９３．４３％（４５５／４８７），一致率为 ９２．０４％（５０９／５５３）；检测ＭＤＲ—ＴＢ的灵敏度 １．３ ＤＮＡ微阵列芯片法每位肺结核病人选取１ 份阳性级别高的痰标本，按照结核分枝杆菌耐药 基因检测试剂盒（ＤＮＡ微阵列芯片法）操作步骤进 行进行结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药检测， 试验在开封市结核病实验室进行。 １．４质量控制 １．４．１ 分离培养和药敏熟练度测试河南省结核 病参比实验室对开封市结核病实验室开展结核分 枝杆菌分离培养和药敏试验质量控制；其分离培 养涂阳培阴率小于１０％，污染率小于５％，符合质 控要求，比例法药敏试验通过了国家的药敏熟练 度测试。 １．４．２ ＤＮＡ微阵列芯片法熟练度测试为保证 ＤＮＡ微阵列芯片法检测结果的可靠性，试验前对 实验室操作人员进行技术培训，并由国家参比实 验室发送２Ｏ例质控标本（结核分枝杆菌ＤＮＡ标 本）进行了熟练度测试，经测试开封结核病实验室 符合率为１００％。 ２ 结果 ２．１ 药敏试验检测结果共收集７１８例病人标本， 其中男性４３３例（６０．３％），女性２８５例（３９．７％），平 均年龄４３．５岁（１３～７８岁）；经分离培养，培养阳性 ６４６例（８９．９８％），培养阴性６９例，涂阴培阳率 ９．６１％，污染３例（０．４２％）。利福平阳性７２例 （１０．０３％），异烟肼阳性８５例（１１．８４％）。 ２．２ ＤＮＡ微阵列芯片法检测结果７１８例病人标 本中进行了ＤＮＡ微阵列芯片法检测，共检测出非 结核分枝杆菌复合群２８例（３．９％），其中药敏结 果无法判读的１１例（１．５３％），无分枝杆菌３１例 （４．３２％），有药敏结果的６４８例（９０．２５％）。其中 利福平阳性７７例（１０．７２％），异烟肼阳性ｌｌ４例 （１５．８８％）。 ２．３ ＤＮＡ微阵列芯片法检测效能 经对７１８例 纳入病人的传统药敏试验与ＤＮＡ微阵列芯片法结 果比较，剔除无效结果包括培养污染、培养阴性、 传统药敏失败、鉴定为非结核分枝杆菌和ＤＮＡ微 阵列芯片结果无法判读、判定非结核分枝杆菌、无 分枝杆菌等，共获得５５３例有效结果进行分析。 ８２．３５（２８／３４），特异度为９７．３０％（５０５／５１９），一致 率为９６．３８％（５３３／５５３）。 ３讨论 利福平药物作用机制为通过特异地与结核分 枝杆菌ＲＮＡ聚合酶Ｂ亚基（ｒｐｏＢ）结合，抑制ＲＮＡ 聚合酶的活力，干扰分枝杆菌ＲＮＡ的转录及合成， 阻碍蛋白质的合成而发挥抗菌作用。如编码ｒｐｏＢ 基因发生突变就会影响利福平与ＲＮＡ聚合酶Ｂ 亚基的结合，结核分枝杆菌产生对利福平耐药。 经研究ｒｐｏＢ基因的突变主要发生在５０７～５３３位 编码的８ｌ ｂｐ的区域内，被称为核心突变区，约有 ９５％的耐ＲＩＦ菌株基因突变发生在核心区，常见 的突变位点机制在５３１、５２６、５１６位 。ｒｐｏＢ基因 核心突变区也是利福平耐药分子检测的靶序列。 而结核杆菌耐异烟肼的机制比较复杂，利福平为 前体药物需要ＫａｔＧ编码的触酶一过氧化物酶（ Ｃａｔａｌａｓｅ—ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｅｎｚｙｍｅ）激活，活化的异烟肼 能通过抑制ｉｎｈＡ编码的烯酰一ＡＣＰ还原酶来阻 断分枝杆菌酸的合成。ＫａｔＧ和ｉｎｈＡ突变为结核 杆菌耐异烟肼的主要方式，４０％～９０％的耐异烟肼 菌株发生ＫａｔＧ基因突变，ＫａｔＧ３１５突变占７５％～ ９０％。ＫａｔＧ和ｉｎｈＡ基因编码序列是检测结核分 枝杆菌异烟肼耐药的靶序列＿６ 。在我国市场上能 同时检测利福平和异烟肼的商品化试剂有线性探 针膜杂交技术的ＧｅｎｏＴｙｐｅ＠ＭＴＢＤＲｐｌｕｓ ａｓｓａｙ（德 国，Ｈａｉｎｓ） 探针熔解曲线法的ＭｅｈＰｒｏ＠结核分 枝杆菌耐药突变检测试剂（中国，致善） －９］和 ＤＮＡ微阵列芯片技术晶芯＠（中国，博奥）。ＭＴＢ． ＤＲｐｌｕｓ、ＭｅｈＰｒｏ、ＤＮＡ微阵列芯片检测利福平的靶 序列均为ｒｐｏＢ基因８１ｂｐ的核心突变区，但ＭＴＢ— ＤＲｐｌｕｓ覆盖突变位点为ｒｐｏＢ（５１６、５２６、５３１）， ＭｅｌｔＰｒｏ覆盖为ｒｐｏＢ（５１１、５１６、５２３、５２６、５３１），ＤＮＡ 微阵列芯片覆盖为ｒｐｏＢ（５１１、５１６、５２６、５３１、５３３）。 ＭＴＢＤＲ检测异烟肼的突变靶位点为ＫａｔＧ３１５（Ｓ／ Ｔ１）、ｉｎｈＡ（一８Ｔ／Ｃ、一１５Ｃ／Ｔ）），ＭｅｈＰｒｏ检测异烟 肼的突变靶位点为ＫａｔＧ ３ １５（ＡＧＣ—ＡＣＧ、ＡＧＣ— ＡＣＣ）、ｉｎｈＡ（９４ ＴＣＧ－－￣ＧＣＧ、一ｌ５Ｃ Ｔ、一８Ｔ＿Ｃ、 ａｈｐＣ（一３２Ｇ—Ａ、一１０Ｃ—Ｔ、 （下转第４９页） 医药论坛杂志２０１４年７月第３５卷第７期Ｊ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｏ１．３５ Ｎｏ．７ Ｊｕｌｙ ２０１４ ・４９・ ＣＲＰ和ＷＢＣ也是炎症急性期反应产物，广 得性肺炎中的应用［Ｊ］．检验医学，２０１１，２６（３）：１４７・１４９． ［３］Ｘｉｎｇ ＹＢ，Ｄａｉ ＬＭ，Ｚｈａｏ ＺＨ，ｅｔ ａ１．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｐｒｏｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ａｎｄ ｃｏｍｍｏｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍａｒｋｅｒｓ ｅｏｍｂｉ— 泛应用于感染和炎性疾病的诊断，感染后升高， 不久后达到高峰，可作为早期诊断ＣＡＰ的指标 之一。研究发现ＣＲＰ和ＷＢＣ诊断重症肺炎的 ＲＯＣ曲线下面积低于用ＰＣＴ诊断的ＲＯＣ曲线 下面积。 ｎｉｎｇ ＳＯＦＡ ｓｃｏｒｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｐｓｉｓ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｓｔａｇｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，２００８，２０：２３－２８． ［４］Ｈｉｌｌａｓ Ｇ，Ｖａｓｓｉｌａｋｏｐｏｕｌｏｓ Ｔ，Ｐｌａｎｔｚａ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｃ—ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏ— ｔｅｉｎ ａｎｄ ｐｒｏｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ａｓ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓ ｏｆ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ ｓｅｐｔｉｃ ｓｈｏｃｋ 本研究的数据并不是很完善，因此没能排除 其他因素的干扰，如患儿的其他疾病或者其他指 标。此外，也没有进行不同时间点的采样，从而对 患儿的血清ＰＣＴ水平动态监测。对患儿的血清 ＰＣＴ水平动态监测可以对患儿的病情进行较好的 监测，从而可以帮助临床医师及时采取相关的措 ｉｎ ｖｅｎｔｉｌａｔｏｒ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ，２０１０，３５ （４）：８０５－８１１． ［５］ ｒＩ１ｌｌｅ Ｓｕｂｓｐｅｃｉｌａｔｙ Ｇｒｏｕｐ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ［Ｊ］． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＰｅｄｉａｔｉｒｃｓ，２００７，４５（２－３）． ［６］ 汪明明，崔速南，张景遥，等．血清降钙素原测定在感染性疾病 中的诊断意义［Ｊ］．中国抗感染化疗杂志，２００２，２（４）：２１５－２１７． ［７］ Ｒｅｉｎｈａｒｔ Ｋ，Ｍｅｉｓｎｅｒ Ｍ，Ｂｒｕｎｋｈｏｒｓｔ ＦＭ．Ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｓｅｐｓｉｓ ｄｉ— ａｇｎｏｓｉｓ：ｗｈａｔ ｉｓ ｕｓｅｆｕｌ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｃｌｉｎ，２００６，２２（３）：５０３－ ５１９． 施。血清ＰＣＴ动态监测的临床价值有待进一步的 研究。 参考文献 Ｍｏｕｌｉｎ Ｆ，Ｒａｙｍｏｎｄ Ｊ，Ｌｏｒｒｏｔ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｃａｌｃｉｏｔｏｎｉｎ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ［８］Ｄｉｎｇ ＨＢ，Ｌｉｎ Ｑｃ，Ｃｈｅｎｇ ＧＰ，ｅｔ １ａ．Ｔｈｅ ｇｕｉｄｉｎｇ ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｉｎ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｒ ｆａｃｕｔｅ ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｍ— ｎｉｃ ｏｂｓｔｕｃｔｒｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｊ Ｇｅｆｉａｔｒ，２０１２，３１： ３９６－３９８． ａｄｍｉｔｔｅｄ ｔｏ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｗｉｔｈ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ［Ｊ］． Ａｒｃｈ Ｄｉｓ Ｃｈｉｌｄ，２００１，８４（４）：３３２－３３６． 收稿日期：２０１４－０１－０３修回日期：２０１４－０３ １５责任编辑：祝振中 ［２］ 杜娟，黄金莲，应巧玲，等．痰液降钙素原检测在儿童社区获 （上接第４６页） 一１２ｃ—Ｔ）；而博奥芯片的检测异 烟肼利福平的靶位点为ＫａｔＧ３１５（ＡＧＣ－－－￣ＡＣＣ、ＡＧＣ －［２］ Ｇｅｖｅｎａ，Ｇｌｏｂａｌ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｒｅｐｏｒｔ ２０１２［Ｒ］．ＷＨＯ／ＨＴＭ／ＴＢ／ ２０１２．０６． ＊ＡＡＣ）、ｉｎｈＡ（一１５Ｃ—Ｔ） 。 ［３］ 赵雁林，姜广路．痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册 ［Ｍ］．北京：中国协和医学大学出版社，２００９． 由于各检测方法对结核杆菌利福平耐药普遍采 用了ｒｐｏＢ基因８１ｂｐ的核心突变区作为靶序列，且 该突变与利福平耐药有很高的相关性，所有分子检 测方法检测利福平耐药结核均显示了很高的灵敏度 和特异性。本研究的也显示很高的灵敏度和特异度 ［４］ 中国防痨协会基础专业委员会，结核病诊断实验室检验规程 ［Ｍ］．北京：中国教育文化出版社，２００６． ［５］ Ｍｕｓｓｅｒ ＪＭ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｌ ａａｇｅｎｔ ｅｓｉｒｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ：ｍｏｌｅｃ— ｕｌｒ ｇｅｎｅｔａｉｃ ｉｎｓｉｇｈｔｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ，１９９５，８（４）：４９６－ ５１４． ［６］ Ｋａｕｆｍａｎｎ，Ｓｔｅｆｎ ＨＥ．Ｅｒａｉｃ Ｒｕｂｉｎ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ： （９２．７３％、９８．１９％），同时还获得了较高的阳性预测 值（８５．００％），这有利于耐利福平结核病的诊断。对 于异烟肼的检测因各种检测方法使用的靶位的不 同，在检测异烟肼耐药结核病的灵敏度差异较大，本 实验ＤＮＡ微阵列芯片检测异烟肼耐药的灵敏度为 ８１．８２％，这与该方法检测的靶位点较少有一定的关 系。本研究中ＤＮＡ微阵列芯片检测异烟肼和ＭＤＲ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｂｉｃｈｅｍｉｓｏｔｙ［Ｍ］．Ｇｅｒｒｍａｎｙ：Ｗｉｌｅｙ— ＶＣＨ，２００８． ［７］李辉，马晓光，石洁，等．线性探针法ＭＴＢＤＲｐｌｕｓ用于涂阳肺结 核的耐多药检测研究［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２０１３，２３（２）： ３８０－３８４，３０６． ［８］马艳艳，李辉，赵东阳，等．荧光ＰＣＲ探针熔解曲线法检测结核 分枝杆菌耐利福平突变研究［Ｊ］．中国国境卫生检疫杂志， ２０１１，３４（６）：４５１４５４． ＴＢ均显示了高度特异性和阴性预测值，较低的阳 性预ｉ贝０值，但与传统药敏试验方法保持了很高的一 致性，这对于耐异烟肼和ＭＤＲ—ＴＢ的病人鉴别诊 —［９］ 马晓光，李辉，石洁．荧光ＰＣＲ探针熔解曲线法检测结核分枝 杆菌耐异烟肼突变［Ｊ］．现代预防医学杂志，２０１３，４０（２２）： ４２０１－４２０４，４２０７． ［１０］Ｇｕｏ Ｙ，Ｚｈｏｕ Ｙ，Ｗａｎｇ Ｃ．Ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉ— ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｎｄ ｓｐｕｔｕｍ ｕｓｉｎｇ ａ 断和确定有重要意义。 参考文献 ［１］ Ｇｅｖｅｎａ，Ｇｌｏｂａｌ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｒｅｐｏｒｔ ２００３［Ｒ］．ＷＨＯ／ＨＴＭ／ＴＢ／ ２Ｏ１３．１１． ｂｉｃｈｉｏｐ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｔｕｂｅｒｃ Ｌｕｎｇ Ｄｉｓ，２００９，１３（７）：９１４— ９２０． 收稿日期：２０１４－０１－２１修回日期：２０１４－０４－１５责任编辑：祝振中
