国际检验医学杂志２０１５年１月第３６卷第２期Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１５，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．２ ・ １６３ ・ ・论 著・ 流式细胞术检测二期梅毒患者外周血淋巴细胞亚群 梁 平，陈 宏，何晓丹，薛强东 （东莞康华医院皮肤科，广东东莞５２３０８０） 摘 要：目的 检测二期梅毒外周血淋巴细胞亚群，了解机体在二期梅毒的免疫状况。方法 选择本院门诊就诊、体检或术 前检查的３５例志愿者，按照其检测结果将其分为健康对照组与二期梅毒组。应用流式细胞仪检测两组患者外周血ＣＤ３ 、 ＣＤ４ 、ＣＤ８ 和ＣＤ１９ 淋巴细胞亚群。结果 二期梅毒组ＣＤ３ 和ＣＤ４ 均高于健康对照组，差异有统计学意义（Ｐ：０．００８ ５， ０．０３８ ４），ＣＤ８ 、ＣＤ４ ／ＣＤ８ 高于健康对照组，但差异无统计学意义（Ｐ一０．２１０ ８，０．３９５ ２）；二期梅毒组ＣＤ１９ Ｂ淋巴细胞低于 健康对照组，差异有统计学意义（Ｐ一０．００６ ｏ）。结论增强二期梅毒患者细胞免疫力有利于消除梅毒螺旋体。 关键词：二期梅毒； 外周血； 淋巴细胞亚群 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３～４１３０．２０１５．０２．００８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２Ｏ１５）０２—０１６３一Ｏ３ Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ Ｌｉａｎｇ Ｐｉｎｇ，Ｃｈｅｎ Ｈｏｎｇ，Ｈｅ Ｘｉａｏｄａｎ，Ｘｕｅ Ｑｉａｎｇｄｏｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｄｏｎｇｇｕａｎ Ｋａｎｇｈｕａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｄｏｎｇｇｕａｎ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５２３０８０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ８ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ａｎｄ ｔｏ ｋｎｏｗ ｔｈｅｉｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｃｏｎ— ｄｉｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｗ３Ｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＣＤ３ ，ＣＤ４ ，ＣＤ８ ａｎｄ ＣＤ１９ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｆｒｏｍ ３５ ｖｏｌｕｎ— ｔｅｅｒｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ １ ５ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ａｎｄ ２Ｏ ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ＣＤ３ ａｎｄ ＣＤ４ （尸＝０．００８ ５，０．０３８ ４），ＣＤ３ ａｎｄ ＣＤ４。。ｉｎ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ＣＤ８ ａｎｄ ＣＤ４ ／ＣＤ８ （Ｐ一０．２１０ ８，０．３９５ ２）．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ＣＤ１９ （Ｐ一０．００６ Ｏ），ＣＤ１９ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｏｆ ｐａ— ｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｉｓ ｂｅｎｅｆｉｔ ｔｏ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ；ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ； ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ 梅毒是由梅毒螺旋体（ＴＰ）感染引起的一种性传播疾病， 组被试一般资料比较差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５），组间具有 自然感染ＴＰ时在感染部位会出现富含病原体的硬下疳。硬 可比性。 下疳不经治疗可“自愈”，大多数患者于硬下疳“自愈”６～８周 １．２纳入与排除标准 二期梅毒组纳入标准：（１）根据病史、 后出现皮肤黏膜、骨骼、眼等二期梅毒损伤，是否发展为三期梅 临床表现和血清学检查综合诊断的二期梅毒患者；（２）患者知 毒与二期梅毒时期的症状相关。二期梅毒损伤广泛者一般不 情同意，并愿意加入本研究中；（３）ＨＩＶ抗体阴性并且未用过 会发生晚期活动性梅毒，只有二期梅毒症状轻并有ＴＰ慢性病 激素和抗菌药物等治疗；（４）无严重系统疾病。二期梅毒组排 灶者才会发展为三期梅毒，这可能与ＴＰ特异性抗原浓度低而 除标准：（１）有系统性疾病；（２）不愿加入本研究；（３）ＴＰ或非螺 免疫原性弱有关。人体免疫力与病原体相互作用在疾病的发 旋体试验有一项为阴性者。健康对照组纳入标准：（１）ＴＰ血清 展与结局中起到了重要的作用。但人体免疫力并不是完全有 试验阴性、非螺旋体抗原血清试验和ＨＩＶ均为阴性；（２）无严 效的，可表现为传染性免疫，即当机体有ＴＰ感染时才产生免 重系统疾病；（３）自愿加入本研究。 疫力。为了解机体在二期梅毒的免疫状况，本研究应用流式细 １．３仪器与试剂 美国ＢＤ公司ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ流式细胞仪、 胞仪对二期梅毒患者进行外周血Ｔ、Ｂ淋巴细胞亚群的检测， 淋巴细胞亚群试剂盒、红细胞裂解液和破膜剂。上海荣盛生物 并与健康人群对照，观察在二期梅毒时淋巴细胞亚群的变化， 药业有限公司的ＴＲＵＳＴ试剂盒；日本富士瑞必欧株式会社的 现将结果报道如下。 ＴＰＰＡ试剂盒，北京万泰生物药业股份有限公司的ＨＩＶ抗体 １资料与方法 ． 试剂盒。各试验参照各种仪器及试剂说明书操作规程由专人 １．１一般资料选择本院门诊就诊、体检或术前检查的３５例 进行。 志愿者为研究对象，其中男２１例，女１４例，按照其检测结果将 １．４方法 抽取患者外周静脉血２ ｍＬ，加肝素抗凝，免疫样 其分为健康对照组与二期梅毒组。健康对照组２ｏ例，男１４ 品制备前在４℃下保存。样品制备：取上述研究对象抗凝全血 例，女６例，平均（２９．５±６．７５）岁；二期梅毒组１５例，男７例， １００ Ｌ，分别加入前述单抗各２０ Ｌ，混匀；再加入红细胞溶解 女８例，平均（３０．３土９．８）岁；１５例患者ＴＰ明胶凝集试验 液２ ｍＬ，放置１０ ｒａｉｎ，以破坏红细胞，１ ５００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ， （ＴＰＰＡ）全部阳性，滴度１：１ ２８０～１：１０ ２４０，中位数１：２ 弃上清液；用磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）混匀，离心５ ｍｉｎ，弃上清液； ５６０，甲苯胺红不加热血清试验（ＴＲＵＳＴ）滴度１：２～１：１２８， 加ＰＢＳ １ ｍＬ，混匀进行检测，标本采集１２ ｈ内完成检测。 中位数１：３２，人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）检测均显示为阴性 １．５统计学处理 应用ＳＴＡＴＡ８．０软件包进行数据处理及 （一）；健康对照组２Ｏ例ＴＰＰＡ、ＴＲＵＳＴ和ＨＩＶ均为阴性。两 统计学分析，计量资料采用ｉ±ｓ表示，组间比较采用ｔ检验； ＊ 基金项目：广东省东莞市科学技术局资助项目（２０１３１０５１０１０２２１）。 作者简介：梁平，男。副主任医师，主要从事梅毒临床和相关基础研究。 ・ １６４ ・ 国际检验医学杂志２０１５年１月第３６卷第２期Ｉｍ ＪＩ ｂＭｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１５，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．２ 以 一０．０５为检验水准，Ｐ％０．０５为差异有统计学意义。 ２结 果 康对照组，但差异无统计学意义（Ｐ一０．２１０ ８，０．３９５ ２）；二期 梅毒组ＣＤ１９ Ｂ淋巴细胞低于健康对照组，差异有统计学意 义（Ｐ：０．００６ Ｏ）。见表１。 二期梅毒组ＣＤ３ 和ＣＤ４。‘均高于健康对照组，差异有统 计学意义（Ｐ一０．００８ ５，０．０３８ ４），ＣＤ８ 、ＣＤ４ ／ＣＤ８ 高于健 表１ ２组被试外周血淋巴细胞亚群水平比较 ～：无数据 论 ３讨 对照组，这种降低也可能与高滴度抗体形成的反馈抑制作用有 关，从另一个侧面也反映二期梅毒患者中Ｔｈｌ占优势。 Ｌｅａｄｅｒ等 在免接种实验的研究结果表明，兔睾丸中 ＣＤ４ 细胞随病情的进展分别在感染后第１８天和第３９天出现 一近年来国内梅毒报告发病例数持续增长，二期梅毒占． ４ｏ 以上，３０ ～４０ 未经治疗的二期梅毒最终发展为三期梅 毒，由于二期梅毒传染性大，所以是控制梅毒发展的重要环节。 梅毒感染时细胞免疫和体液免疫均对ＴＰ有清除作用，ＣＤ３。。 是Ｔ淋巴细胞表面标志，ＣＤＩ９ 是Ｂ淋巴细胞表面标志。ＴＰ 是颗粒性抗原，体液免疫在二期梅毒中对ＴＰ的应答并不重 要ｌ】］，细胞免疫在抗ＴＰ中起重要作用。动物接种实验也表 明，死的ＴＰ并不能刺激机体产生免疫，只有接种减毒的活ＴＰ 才能激活机体免疫，可见梅毒感染引起的免疫反应是细胞介 导的。 个双峰波，在第２５天时出现一个波谷，此时ＣＤ４ 的下降可 能是宿主体内ＴＰ清除、抗原刺激减少而导致细胞免疫反应下 调的结果ｌ＿７］。整个过程中ＣＤ８ 细胞缓慢上升，但总量始终低 于ＣＤ４ 细胞，这与本研究外周血中结果是相一致。Ｗｉｅｈｅｒ 等［８ 对豚鼠先天性梅毒的研究表明，在外周血、脾和淋巴结中 ＣＤ４ 升高、ＣＤ８ 降低、ＣＤ４ ／ＣＤ８ 比值均升高。ｖａｎ Ｖｏｏ— ｒｈｉｓ等 的研究发现，在人体一期梅毒和二期梅毒的皮损中， 只含有Ｔｈ１细胞因子的ＩＬ一２、ＩＦＮ一７和ＩＬ一１２，完全没有Ｔｈ２ 外周血ＣＤ３ 细胞代表Ｔ淋巴细胞的总体，在梅毒皮疹中 ＣＤ３ 细胞是局部浸润的主要炎性细胞，反应机体特异性免疫 应答能力，Ｔ淋巴细胞既可作为免疫效应细胞直接杀伤靶细 的细胞因子，也就是说人体一期和二期梅毒的细胞免疫反应均 以Ｔｈ１细胞占优势。 胞，又可作为免疫调节细胞，辅助其他免疫细胞分化和调节免 疫应答，ＴＰ的脂蛋白成分是Ｔ淋巴细胞趋化的动力Ｅ２］。 ＣＤ３ 细胞按表型不同分为ＣＤ４ 细胞和ＣＤ８ 细胞两个细胞 亚群。ＣＤ４ 细胞主要是辅助性Ｔ淋巴细胞（Ｔｈ），又可以分为 Ｔｈｌ和Ｔｈ２两个亚群，ＴＰ感染刺激机体淋巴细胞活化形成 ＴｈＯ细胞，并向Ｔｈｌ方向极化，Ｔｈ１分泌白细胞介素（ＩＬ）一２和 看似矛盾的两种结果可能都是对二期梅毒免疫一个侧面 的反映，二期梅毒的Ｔ淋巴细胞亚群既可能下降也可能上升， 这与病情严重程度密切相关。人体免疫反应受到严格而复杂 的，在杀伤病原体的同时要避免自身误伤，三期梅毒的损 伤就是机体细胞免疫反应引起的组织损伤。人体接种试验表 明，树胶肿是小量具有毒力的ＴＰ在致敏的宿主体内，通过激 发宿主迟发性超敏反应造成的结果ｒ１ 。Ｐｏｄｗｉｎｓｋａ等 对成 人获得性梅毒的研究结果表明，外周血中ＣＤ４ 水平和ＣＤ４ ／ ＣＤ８ 比值在潜伏梅毒时升高，随病情从一期梅毒、二期梅毒向 神经梅毒发展过程中，ＣＤ４ 逐步下降、ＣＤ８ 逐步升高，但仍不 改变ＣＤ４ 高于ＣＤ８ 的结果，外周血中ＣＤ４ 的降低和ＣＤ８ 干扰素（ＩＦＮ一 ）等细胞因子，促进巨噬细胞抑制和杀伤ＴＰ， 并可抑制Ｔｈ２的功能，增强细胞免疫。Ｔｈ２分泌ＩＬ一４和ＩＬ－１０ 等细胞因子，与Ｂ淋巴细胞增殖、成熟和促进抗体生成有关， 可增强抗体介导的免疫应答，并可下调Ｔｈｌ对ＴＰ的免疫应 答。ＣＤ８ 细胞可以分为在数量上占多数的抑制性Ｔ淋巴细 胞（Ｔｓ）和占少数的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）两个亚群，Ｔｓ 细胞通过转化生长因子（ＴＧＦ）、ＩＩ 一１０等细胞因子抑制Ｔｈｌ对 的升高与病情严重程度相关，只有在恶性梅毒和严重神经梅毒 时，ＣＤ４ 明显下降、ＣＤ８ 升高才表现为ＣＤ４ ／ＣＤ８ 比值明 显降低。梁平等＿１ 对一期梅毒患者的研究表明，在硬下疳溃 疡的第１周细胞免疫功能受抑制，第２周时增强，这与本研究 结果完全一致。当机体免疫杀伤作用使ＴＰ被大量清除时，外 来抗原对机体的免疫刺激作用下降，机体通过免疫调节对下调 ＴＰ的免疫应答，ＣＴＩ 通过细胞裂解和细胞凋亡作用介导杀伤 ＴＰ。ＣＤ４ ／ＣＤ８ 比值综合了ＣＤ４ 和ＣＤ８ 两者的信息，比 单独ＣＤ４ 或ＣＤ８ 的结果更能反映机体免疫状况，二期梅毒 组ＣＤ４ ／ＣＤ８ 比值虽高于健康对照组但差异无统计学意义 （Ｐ＞Ｏ．０５），总体反映二期梅毒的免疫功能并无明显下降。 目前国内流行的观点认为，二期梅毒ＣＤ３ 、ＣＤ４ 和 特异性免疫应答，此时的免疫接近于健康人群的结果，可能由 于机体免疫下调作用太强、太快，部分未被清除的ＴＰ潜伏下 来，造成慢病程感染。 ＣＤ４ ／ＣＤ８ 均低于正常，外周血与皮损组织中的Ｔ细胞分布 相反，并且ＣＤ４ 亚群中Ｔｈ２占优势ｌ＿３ ］，因此机体细胞免疫受 虽然有青霉素的特效治疗，仍有３Ｏ 以上患者治疗失败， 因此开发新的治疗方案一直在进行中，免疫学治疗成为新的方 向。但ＴＰ不同于其他病原体，普通方法无法染色，体外无法 抑制，这是造成ＴＰ潜伏体内形成长期慢性感染的重要因素。 这种观点是基于Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄｌ５ 综合多项动物实验的研究结果进 行的推测，即一期梅毒向二期梅毒进展中ＣＤ４ 亚群从Ｔｈｌ占 优势转变为Ｔｈ２占优势，以上结论与本研究结果完全矛盾。 本研究结果表明二期梅毒组ＣＤ４ 和ＣＤ８ 细胞均高于健康对 照组，ＣＤ４ 上升且比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。说明 二期梅毒患者细胞免疫功能有所增强，有利于消除或抗ＴＰ感 培养，疫苗对预防ＴＰ的传播也没有成功，ＴＰ与人体免疫系统 的相互作用并不完全清楚，研究结果也有许多矛盾之处，免疫 学调节剂的应用只是在免疫受抑制时才有效。而且起效时间较 长，其可行性值得探讨，还必须更深入、全面地了解ＴＰ的免疫 学性质，才能提出更好的治疗方案。 （下转第１６７页） 染，这与传染性免疫是一致的。二期梅毒组ＣＤ１９ 低于健康 国际检验医学杂志２０１５年１月第３６卷第２期Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１５，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．２ ・ １６７ ・ 有文献报道了“快速抗菌药物敏感试验方法的建立”，该方 法通过测定６ ｈ时水解酪蛋白（Ｍ—Ｈ）液体培养基中蛋白质水 抑菌环，即可测试其直径。 参考文献 ［１］叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程［Ｍ］．３版．南京： 东南大学出版社，２００６：８９０—９２３． 平变化得到ＡＳＴ结果＿３］，虽然快速（６ ｈ时获得ＡＳＴ结果），但 试验方法操作繁琐。也有文献报道了“用显色半固体进行快速 细菌药敏试验的方法”，结果显示，氯化三苯甲基四氮唑（ＴＴＣ） 显色半固体琼脂法与Ｋ—Ｂ法同时测定细菌药物敏感度的比 较，两种药敏方法敏感度完全相同或基本相同的合计有５０９ 例，占９６．４ ，标准菌株用ＴＴｃ显色半固体琼脂法和Ｋ—Ｂ法 进行药敏试验的结果比较，两者药敏抑菌环直径毫米数比较差 异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５），同时结果显示在３ ｈ内有９６．８ ［２］Ｌｕｂｅｒ Ｐ，Ｂａｒｔ ｅｌｔ Ｅ，Ｏｅｎｓｅｈｏｗ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｂｒｏｔｈ ｍｉ— ｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎ，Ｅ Ｔｅｓｔ，ａｎｄ ａｇａｒ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ＳＵＳ— ｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ ａｎｄ Ｃａｍｐｙｌｏｂａｅｔｅｒ ｃｏ— ｌｉ．［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００３，４１（３）：１０６２—１０６８． ［３］李琳，田青友，曹蕾．快速抗生素敏感试验方法的建立［Ｊ］．华北煤 炭医学院学报，２００５，７（３）：２８０—２８１． 的菌株可得出ＡＳＴ结果，５ ｈ １００．０ 的菌株可得出ＡＳＴ结 果，但该试验方法操作也较繁琐…４］。另有文献报道了“一种新 的细菌药敏试验方法的探讨”ｌ５］，该方法与文献［４］报道的方法 基本一致，结果也近似。文献［６］报道了一种改进的快速Ｋ—Ｂ ［４］李先斌，莫丽亚，赵蕊，等．用显色半固体进行快速细菌药敏试验 的方法［Ｊ］．实用预防医学，２００６，１３（２）：４４３—４４４． ［５］李慧．一种新的细菌药敏试验方法的探讨［Ｊ］．医药世界，２００６，８ （９）：６３—６４． 圆盘敏感度测试法，该方法使用四唑染料的衍生物来增强细菌 生长区和抑制区之间的抑菌圈轮廓，６～７ ｈ可获得ＡＳＴ结果， 该方法简单，但其获得ＡＳＴ结果的时间长于本研究的快速Ｋ— Ｂ法。Ｋ—Ｂ法ＡＳＴ除了可用于细菌外，还可用于酵母菌＿７］、真 菌［ ，也可用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测＿８］。 细菌的耐药性日趋严重，已经成为医学界的重大难题，加 强细菌耐药性的监测已经迫在眉睫。相关文献报道，金黄色葡 萄球菌耐药率最高的前４位抗菌药物为青霉素Ｇ（８７．３２ ）、 红霉素（８７．３２ ）、苯唑西林（８Ｏ．２８ ）、阿奇霉素（７６．０６ ）， 都大于７６ ［９］。大量文献报道金黄色葡萄球菌有很高的耐药 率［１０－１１］。相关研究显示，多种细菌有很广的耐药谱和很高的 耐药率ｌ＿１ 。这些应引起医学界的高度重视。 综上所述，快速Ｋ—Ｂ法快速而准确，获得ＡＳＴ结果的时 间，快速Ｋ—Ｂ法比细菌自动鉴定仪快数小时，比标准Ｋ—Ｂ法快 ［６］Ｂｏｙｌｅ ＶＪ，Ｆａｎｅｈｅｒ ＭＥ，Ｒｏｓｓ ＲＷ Ｊｒ．Ｒａｐｉｄ，ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｋｉｒｂｙ—Ｂａｕｅｒ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔ ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ，ｈｉｇｈ－ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｄｉｓｋｓ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｅｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９７３，３（３）：４１８—４２４． ［７］崔健丽，张辉，李春霞，等．改良纸片扩散法检测１７２株酵母菌对 酮康唑的敏感性［Ｊ］．中国抗感染化疗杂志，２００５，５（４）：２３５—２３６． ［８］周美容，龙伟清，凌寿坚．两种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的 Ｋ—Ｂ法应用评价［Ｊ］．国际检验医学杂志，２００６，２７（１２）：１０９０— １０９１． ［９］王恒秋，张广清．上呼吸道感染儿童金黄色葡萄球菌感染率和药 物敏感试验Ｉ－Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１１，３２（１２）：１０９０—１０９１． ［１Ｏ］蒋荩芳。周黎．金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析［Ｊ］．检 验医学与临床，２００８，５（２４）：１５０１—１５０２． ［１１］陈月燕，席云，肖刚，等．葡萄球菌医院感染及耐药谱分析［Ｊ］．国 际内科学杂志，２００７，３４（９）：５００—５０３． ［１２］韩兰芳，方建平．化脓性中耳炎的病原菌及耐药性分析［Ｊ］．国际 检验医学杂志，２００８，２９（６）：５５１—５５３． 许多，Ｋ—Ｂ法虽然较快速Ｋ—Ｂ法慢，但也比细菌自动鉴定仪快 １ ｈ以上，比标准Ｋ－Ｂ法快许多。标准Ｋ—Ｂ法进行ＡＳＴ，无需 等待１８～２４ ｈ观测抑菌环直径获得ＡＳＴ结果，只要肉眼可见 （上接第１６４页） 参考文献 ● （收稿日期：２０１４—１１－３０） ［７］Ａｒｒｏｌｌ Ｔｗ，Ｃｅｎｔｕｒｉｏｎ—Ｌａｒａ Ａ，Ｌｕｋｅｈａｒｔ ＳＡ，ｅｔ ａ１．Ｔ—ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎ— ｓｅｓ ｔｏ ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ ｓｕｂｓｐ．ｐａｌｌｉｄｕｍ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，１９９９， ６７（９）：４７５７－４７６３． ［１］张晓东，脱朝伟，宋芳吉，等．二期梅毒皮肤组织超微结构的研究 ［Ｊ］．中国皮肤性病学杂志，２０００，１４（３）：１６２—１６３． ［２］Ｓａｌａｚａｒ ＪＣ，Ｃｒｕｚ ＡＲ，Ｐｏｐｅ ＣＤ，ｅｔ ａ１．Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ ｅｌｉｃｉｔｓ ｉｎｎａｔｅ ａｎｄ ａｄａｐｔｉｖｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｓｋｉｎ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ［８］Ｗｉｃｈｅｒ Ｖ，Ｚｈａｏ Ｊ，Ｄｉｌｗｉｔｈ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｍｕｎｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｉｎ Ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｓ ｗｉｔｈ ａｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｓｙｐｈｉｌｉｓ［Ｊ］．Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ，１９９７，４２ （６）：７９４—７９８． ｄｕｒｉｎｇ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ：ａ ｆｌｏｗ—ｅｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００７，１９５（６）：８７９－８８７． ［９］ｖａｎ Ｖｏｏｒｈｉｓ ＷＣ，Ｂａｒｒｅｔｔ ＬＫ，Ｋｏｅｌｌｅ ＤＭ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｉｍａｒｙ ａｎｄ ｓｅｅ— ｏｎｄａｒｙ ｓｙｐｈｉｌｉｓ ｌｅｓｉｏｎｓ ｃｏｎｔａｉｎ ｍＲＮＡ ｆｏｒ Ｔｈｌ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎ— ｆｅｃｔ Ｄｉｓ，１９９６，１７３（２）：４９１－４９５． ［３］邹循辉，樊翌明，吴志华．二期梅毒患者细胞免疫水平及与梅毒发 病的相关性［Ｊ］．中国热带医学，２００８，８（３）：３９３—３９４． ［４］黄小雄，邹循辉，樊翌明，等．二期梅毒患者外周血Ｔｈｌ／Ｔｈ２及 Ｔｃｌ／Ｔｃ２的研究［Ｊ］．中国皮肤性病学杂志，２００６，２Ｏ（８）：４６９—４７０． ［１Ｏ］吴志华．梅毒的病因与发病机理［Ｍ］．２版．广州：广东人民出版 社，２００２：７１—８４． ［１１］Ｐｏｄｗｉｎｓｋａ Ｊ，Ｚａｂａ Ｒ，Ｃｈｏｍｉｋ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ（ＰＢＭＣ）ｏｆ ｓｙｐｈｉｌｉｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ Ｅ５］Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ ＴＪ．Ｔｈｅ Ｔｈｌ／Ｔｈ２一ｌｉｋｅ Ｓｗｉｔｃｈ ｉｎ ｓｙｐｈｉｌｉｔｉｃ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：ｉｓ ｉｔ ｄｅｔｒｉｍｅｎｔａｌ？［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，１９９２，６０（９）：３４７５—３４７９． Ｆ－６］Ｌｅａｄｅｒ ＢＴ，Ｇｏｄｏｒｎｅｓ Ｃ，Ｖａｎｖｏｏｒｈｉｓ ＷＣ．ＣＤ４（十）ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｇａｍｍａ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｐｒｅｄｏｍｉｎａｔｅ ｉｎ ｌｏｃａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ＩＬ一２［Ｊ］．ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｄ Ｍｉｃ，１９９５，１２（１）：１７－２７． ［１２］梁平，陈宏，何晓丹，等．流式细胞术分析一期梅毒外周血Ｔ淋巴 细胞亚群口］．中国医疗前沿，２０１３，８（９）：８－９． ｅａｒｌｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｙｐｈｉｌｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，２００７，７５（６）：３０２ｌ＿ ３０２６． （收稿日期：２０１４—０９—０８）
