白血病抑制因子在骨性关节炎组织的表达及临床研究

浙江中医药大学学报２００７年７月第３ｌ卷第４期　白血病抑制因子在骨性关节炎组织的表达及　临床研究　蒋煜文　舒　钧　胡侦明。　劳汉昌　１．南方医科大学附属顺德第一人民医院　顺德院　５２８３００　２．昆明医学院附属第二医院３．北京友谊医　摘要：［目的］探讨白血病抑制因子（１ｅｕｋｅｍｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ，ＬＩＦ）在骨性关节炎（ＯＡ）关节组织中的表达规律及临床相关性。　［方法］切取（３２人）７３例骨性关节炎滑膜、软骨和软骨下骨组织，含１０人正常关节组织标本，应用ＲＴ—ＰＣＲ检测ＬＩＦ　ｍＲＮＡ在　ＯＡ不同病变阶段中的表达，酶联免疫吸附反应（Ｅｌ　ＩＳＡ）ｉｆ￣＇１　ＬＩＦ在组织中的含量。［结果］中度ＯＡ病变软骨下骨ＬＩＦ　ｍＲＮＡ　表达量最高。重度０Ａ软骨中ＬＩＦ　ｍＲＮＡ的表达量最高，软骨下骨的表达量最低。ＥＬＩＳＡ检测ＬＩＦ在各组织的含量情况与上　述结果一致。［结论］ＬＩＦ在ＯＡ组织中表达呈现出一定的时间及空间分布的规律，提示ＬＩＦ作为一种分解代谢因子可能参与了　０Ａ发病过程。　关键词：白血病抑制因子；骨性关节炎；关节组织；ｔｕＲＮＡ表达　中图分类号：Ｒ６８４文献标识码：Ａ文章编号：１００５　５５０９（２００７）０４—０４３１　０３　Ｔｈｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　Ｆａｃｔｏｒ（ＬＩＦ）ｉｎ　ｔｈｅ　Ｈｕｍａｎ　Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｃ（ＯＡ）Ａｒｔｉｃｕｌａｒ　Ｔｉｓｕｅｓ　ａｎｄ　Ｒｅｌａｔｅｄ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｒｅ－　ｓｅａｒｃｈ　Ｊｉａｎｇ　Ｙｕｗｅｎ，Ｓｈｕ　Ｊｕｎ，Ｈｕ　Ｚｈｅｎｍｉｎｇ，ｅｔ　ａｌ　ｉ．Ｓｈｕｎｄｅ　Ｎｏ．ｉ　Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　（５２８３００），Ｃｈｉｎａ；２　Ｓｅｃｏｎｄ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｋｕｎｍｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ；３．ＢｅｉＪｉｎｇ　Ｆｒｉｅｎｄｓｈｉｐ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ（ＬＩＦ）ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ｏｓｔｅｏａｒ—　ｔｈｒｉｔｉｃ（０Ａ）ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ．［Ｍｅｔｈｏｄｓ］７３　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｏＤ—　ｅｒａｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｏｏｄ　ｑｕａｌｉｔｙ　ＲＮＡ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　Ｍａｇｎｅｔｉｃ　Ｂｅａｄｓ．Ｔｈｅｓｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｏｎｏｒｅｄ　ｂｙ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｈｏ　ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ　ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎｓ．Ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ＰＣＲ），ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓ　ｏｆ　ＬＩＦ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｓｅｍｉ—ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＬＩＦ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．　［Ｒｅｓｕｌｔｓ］ＬＩＦ　ｍＲＮＡ　ｗａｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｔＯ　ｖｅｒｙ　ｌｏｗ　ｌｅｖｅｌ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒ—　ｅｎｔ　ａｎａｔｏｍｉｃａｌ　ｌｏｃａｔｉｏｎｓ．Ｉｎ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｄｅｇｒａｄｉｎｇ　ｓｕｂｃｈｏｎｄｒａｌ　ｂｏｎｅ，ＬＩＦ　ｍＲＮＡ　ｗａｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｔＯ　ｉｔｓ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｌｅｖｅ１．ＬＩＦ　ｗａｓ　ｅｘ—　ｐｒｅｓｓｅｄ　ｔＯ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｌｅｖｅｌ　ｉｎ　ｓｅｒｉｏｕｓｌｙ　ｄｅｇｒａｄｉｎｇ　ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｔｉｓｓｕｅ．Ｔｈｉｓ　ｒｅｓｕｌｔ　ｗａｓ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｗｉｔｈ　ＥＬＩＳＡ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｒｅｓｕｌｔｓ．　［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ］Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｏｒａｌ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉａｌ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＬＩＦ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ＯＡ　ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｉｍｐｌｙ　ｔｈａｔ　ＬＩＦ　ｍａｙ　ｐｌａｙ　ｓｏｍｅ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｒｏｌｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ＯＡ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ；ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ；ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｔｉｓｓｕｅ；ｔｕＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　．　骨性关节炎（Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＯＡ）是一种常见的　表达规律，了解其在ＯＡ发病过程中的作用。　１资料　老年退行性骨关节疾病。近年来研究发现白血病抑　制因子（１ｅｕｋｅｍｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ，ＬＩＦ）作为一种　分解代谢细胞因子，可能参与了ＯＡ关节组织损坏　及退变的致病过程。但对于ＬＩＦ在ＯＡ患者关节不　１．１一般资料　所取３２人７３份标本系２００３年４　月￣２００３年１Ｏ月昆明医学院附属二院骨科部分患　者组织。分为３组，１组（１０人）为正常的关节组织。　同组织中的表达规律及作用机制尚未见深入研究。　本研究根据ＯＡ患者临床症状、ｘ线片和组织病理　所见进行分类。应用ＲＴ—ＰＣＲ和酶联免疫吸附反应　（ＥＬＩＳＡ）技术，检测ＬＩＦ在不同关节病变组织中的　２组（１０人）为轻中度退变的关节组织。３组（１２人）　为严重的骨性关节炎（ＯＡ）。其诊断分组主要依据　术前症状及体征、Ｘ线表现及术中所见。　１．２标本处理术中切除的滑膜、关节软骨及软骨　４３１　维普资讯 http://www.cqvip.com

瓣商　．嘏　旨沸菩整髓　蔚瘁霹　陋蓼｛嚣潍　渖嚣　章　浙江中医药大学学报２００７年７月第３１卷第４期　下骨组织立即置于冻干管内放人液氮中保存备用。　２实验方法　３．１　ＰＣＲ产物用１．６　的琼脂糖凝胶进行电泳显　２．１　ＲＴ＿ＰＣＲ检测ＬＩＦ　ｍＲＮＡ的表达　示，ＬＩＦ与内对照ｔ３－ａｃｔｉｎ基因的ＲＴ—ＰＣＲ产物理论　长度基本一致，且均有较强烈表达（图ｌ，２）。使用　ＬＩＦ／￣一ａｃｔｉｎ灰度比值作为ＬＩＦ　ｍＲＮＡ的相对表达　２．１．１　引物合成资料ＬＩＦ引物［】］：上游引物５’。　ＣＡＧＣＡＣＣＡＣＴＧＡＡＴＣＡＣＡＧＡＦＣ一３’，下游引物：　水平（见图ｌ、图２）。　５，－ＡＧＴＡＴＧＡＡＡＣＡＴＣＣＣＣＡＣＡＧＧＧ－３’，拟扩增　正常　正常　片断的长度５２７ｂｐ。　软骨　软骨　￣－ａｃｔｉｎ引物设计［２］：上游引物５，＿ＡＣＡＣＣＴＴＣ—　下骨正常软骨　下骨　正常滑膜　ＴＡＣＡＡＴＧＡＧＣＴＧ一３’，下游引物５’一ＣＴＧＣＴＴ—　ＧＣＴＧＡＴＣＣＡＣＡＴＣＴ一３’，拟扩增的片断长度为　８００ｂｐ——＿　８２８ｂｐ。（上海博亚生物技术有限公司合成引物）。　５００ｂｐ——＿　２．１．２　ＲＮＡ的提取参考Ｌｏｕｉｓｅ等提供的方法［３］　并作一定的改良：液氮中组织研磨至粉状。低温下　１００００转离心５ｍｉｎ，上清液置离心管。将一定量　ｌ　２　３　４　５　６　７　８　９　ｌ０　ｌ１　ＷｙＭａｇ．ＲＮＡ生物磁珠（每１００ｍｇ组织使用５Ｏ　ｒａＬ　一　ＷｙＭａｇ．ＲＮＡ磁珠）放人离心管，悬液变清后吸去上　图１正常关节组织ＬＩＦ　ｍＲＮＡ表达情况　清。每５Ｏ“ｌ磁珠中加入０．５ｍｌＲＮＡ结合液，放人磁　Ｍａｒｋｅｒ　１１为￣－ａｃｔｉｎ；２—１０为ＬＩＦ　ｍＲＮＡ表达情况　座３Ｏ秒，悬液变清后吸去上清。室温下混匀１０ｍｉｎ。　中期　每５Ｏ“ｌ磁珠中加入１．０ｍｌ的ＲＮＡ清洗液，放人磁　软骨下骨晚期滑膜　中期滑膜　座３Ｏ秒后除去上清液。重复两次。加洗脱液再放　人磁座洗脱ＲＮＡ。　２．１．３　ｃＤＮＡ的合成取ＲＮＡ模板５ｂＬｇ，引物ｌ５—　２０ｐｍｏｌ，加去离子水至ｌ１／Ａ，７０℃混合５ｍｉｎ，冰上冷　却。依次加入５倍的反应缓冲液４ＩＡ，１０ｍＭ４　ｄＮＴＰ　混合液２　ｌ（终浓度为１．０ｍＭ），ＲＮＡ酶抑制剂　２ＯＵ，加去离子水到１９ｉｔｌ，置３７℃５ｍｉｎ。加２００单位　图２　中期０Ａ关节组织中ｕＦｍＲＮＡ表达情况　的逆转录酶，在４２℃混合６０ｍｉｎ。加热７Ｏ℃１０ｍｉｎ，　Ｍａｒｋｅｒ　１１为　ａｃｔｉｎ　２—１０为ＬＩＦ　ｍＲＮＡ表达情况　冰上冷却。　晚期滑膜中ＬＩＦ表达量为较高，中期软骨下骨　２．１．４　ＰＣＲ扩增　５　ｌ逆转录产物，加２．５ｍＭ　表达量也较高　ｄＮＴＰ　４“ｌ，１０×含２５ｍＭ　Ｍｇｃｌ２缓冲液８ｕｌ，Ｔａｑ酶　ＬＩＦ／￣－ａｃｔｉｎ灰度比值作为ＬＩＦ　ｍＲＮＡ的　０．５　ｌ，上下游引物各ｌ　ｌ，加水至５Ｏ　ｌ离心，进入　相对表达水平，应用ＳＰＳＳ　１１．０软件进行统计分析，　ＰＣＲ循环。变性，退火及延伸温度分别为９４℃，　结果见图３。　６５℃，７２℃。反应时间分别为５０ｍｉｎ、５０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ，　３　３　共３５个循环。将内对照　ａｃｔｉｎ　ｃＤＮＡ扩增，条件同　卜　２　７　毫　＿　上。　２．１．５　ＲＴ—ＰＣＲ扩增后，产物用１．６　的琼脂糖凝　ｊ　ｌ　８　胶电泳，电泳图谱用Ｇｅｌ　Ｄｏｃ　１０００紫外图像分析系　ｌ　５　ｌ　２　。—Ｌ＿　一　－　统和分析软件分析。计算扫描扩增产物电泳带灰度　正常　中度重度　值，内对照Ｊ３一ａｃｔｉｎ校正后统计分析。　图３各部位不同病变程度比较　２．２酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）检测ＬＩＦ因子　其中：滑膜中ＬＩＦ　ｍＲＮＡ的表达量随着０Ａ病　研磨组织后，每ｌｇ组织加３～４ｍｌ的０．２５Ｍ　Ｔｒｉｓ—　变程度增高而增高；关节软骨中ＬＩＦ　ｍＲＮＡ表达量　ＨＣＬ（ＰＨ８），４℃下匀浆。４℃下８０００转离心１０ｍｉｎ。　在中重度ｏＡ病变较正常时为高；软骨下骨中，以中　取上清液放人一７Ｏ℃备用。按试剂说明４９２ｎｍ处测　度病变时最高，而重度ＯＡ病变较低。正常关节组　吸光值，建立标准曲线。　织各部分中ＬＩＦ　ｍＲＮＡ的表达量无明显差别。中度　３　结果　病变时以软骨下骨中的表达量最高，滑膜最少。晚　４３２　维普资讯 http://www.cqvip.com

浙江中医药大学学报２００７年７月第３１卷第４期　期重度病变时软骨中表达量最多，软骨下骨中最少。　３．２　ＥＬＩＳＡ检验的各组织中ＬＩＦ的含量结果进行　统计分析见图４。　３　３　３　２　７　２　４　２　ｌ　ｌ　８　ｌ　５　１　２　０　９　软骨下骨呈象牙样改变，硬化骨下方可以出现囊性　变，细胞因子不易通过硬化骨。上述检验结果显示　出ＬＩＦ的含量，同ＯＡ患者临床体征、影像学变化及　病理变化基本呈正相关，但与所记录患者的主诉并　非完全呈正相关。这可能同患者体质、对不适的耐　受程度以及记录者理解病情程度不同有关。　本实验不同阶段软骨下骨中ＬＩＦ的含量变化比　较明显，说明ＬＩＦ可能参与了软骨下骨的病理变化　正常　中度　重度　过程。ＯＡ病理变化最明显的是关节软骨，本组实验　图４　ＥＩ　ＩＳＡ检验各部位不Ｉ司病变程度比较　结果也显示中重度ＯＡ关节软骨中ＬＩＦ表达含量较　其中：关节各部分组织在正常及ＯＡ病变时，　高。这与ＬＩＦ对关节软骨的负性作用一致。　ＬＩＦ含量变化趋势同ＲＴ—ＰＣＲ的结果是一致的。　本实验的结果和以往的相关研究均提示ＬＩＦ作　４讨论　为一种分解代谢因子可能参与了ＯＡ发病过程。在　近些年的研究发现ＬＩＦ作为一种分解代澍细胞　这一过程中，ＬＩＦ可能对关节各部分组织有负性调节　因子可能参与了ＯＡ的发病过程。但对于这种细胞　作用。但ＯＡ形成的结果并非Ｉ　ＩＦ的单独作用，而　因子在人体骨关节炎发病过程中的时空组织分布及　是和其他细胞因子相互作用，相互影响的结果，对此　表达规律尚不明确。本组１Ｏ例正常关节组织实验　尚需进一步研究。　检测表明ＬＩＦ在正常关节组织代谢过程中作用很　参考文献：　［１］Ｋｏｎｔｕｒｅｋ　ＰＣ，Ｋｏｎｔｕｒｅｋ　ＳＪ，Ｓｔａｒｌｙｓｋａ　Ｔ，ｅｔ　小。本实验显示滑膜中的Ｉ　ＩＦ含量随病程的延长、　ａ１．Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｌｉｎｋ　ｉｎ　ＭＡＬＴ　ｌｙｍｐｈｏｍａ　病变加重而表达量逐渐增加。但在中度病变时，ＬＩＦ　［Ｊ］．Ａｌｉｍｅｎｔ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｔｈｅｒ，２０００，１４（１０）：１３１１－１３１８．　ｍＲＮＡ表达及含量较高的部位是骨与软骨，而软骨　［２］Ｏｏｔｏ　Ｔ，Ｎｉｓｈｉｚｏｎｏ　Ａ，Ｆｕｊｉｏｋａ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｌｏｃａｌ　ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ　下骨这一阶段含量达到其最高值，这也许是ＬＩＦ在　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ａ　ａｎｄ　ｐｏｓｔｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ　ｃｏｒｒｅ—　ＯＡ发病过程中具有明显致炎作用的佐证。软骨下　ｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ｉｎｌｅｔ—　骨中ＬＩＦ的含量随后明显降低。可能是因为ＯＡ早　ｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｏｒａｌ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ。　期，软骨下骨结构和生物力学改变出现在关节软骨　１　９９９，６７（５）：２５３１—２５３９．　退变之前，软骨下骨中的致炎细胞因子最先因微骨　［３２　Ｌｏｕｉｓｅ　Ａ．Ｍｃｋｅｎｎａ，Ａｎｇｅｌｉｋａ　Ｇｅｈｒｓｉｔｚ，Ｓｔｅｆａｎ　Ｓｏｄｅｒ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｉｇｈ—Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　Ｆｒｏｍ　折穿过软骨钙化带而作用于关节软骨。通过刺激软　Ｈｕｍａｎ　Ａｄｕｌｔ　Ａｒｔｉｃｕｌａｒ　Ｃａｒｔｉｌａｇｅ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏ—　骨细胞旁分泌的作用，使软骨中ＬＩＦ的含量保持较　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，２８６：８０—８５．　高水平。而ＯＡ早期关节失稳、随后软骨下骨重塑　［４］Ｂｒｏｗｎ　ＭＡ，Ｍｅｔｃａｌｆ　Ｄ，Ｇｏｕｇｈ　ＮＭ．Ｌｅｕｋａｅｍｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｏ—　和关节变形，对滑膜产生刺激逐渐加重，致炎细胞因　ｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　６　ａｒｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ａｔ　ｖｅｒｙ　ｌｏｗ　Ｉｃｙ—　子量也随之增加。ＯＡ晚期，关节软骨大部磨损，炎　ｅｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ａｄｕｌｔ　ｍｏｕｓｅ　ａｎｄ　ａｒｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｉｎｆｌａｍ—　性改变明显；软骨下骨增生、硬化，部分骨小梁疏松、　ｍａｒｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，１９９４，６（３）：３００—９．　断裂，骨细胞数量减少，细胞因子含量亦减少；同时　（收稿日期　２００７—０２—１２）　嘏　Ⅲ旨　彗壁团　讲本霹　诽　龄港器　蠢　（上接第４３０页）产物弥散，其疗效与传统的保留灌　［２］郑筱萸．中药新药临床研究指导原则［Ｍ］．北京：中国医　肠方法比较有着显著差异。同时也能够消除传统保　药科技出版社，２００２：１６７．　留灌肠引起的便意增强，排便次数增多的不足。慢　［３３　张秋林；罗月中；洪钦国．尿毒清胶囊延缓慢性肾功能衰　性肾衰中药保留灌肠改变了传统的给药途径，使药　竭患者透析治疗的临床观察［Ｊ］．新中医，２００７，３９（５）：　２９—３２．　液集中于肠道泻下降浊达到清除毒素的目的，经结　Ｉ－４］沈玲妹．参麦注射液治疗慢性肾功能不全３Ｏ例疗效观　肠途径治疗是对灌肠治疗方法的改进，作用效果明　察［Ｊ］．浙江中医学院学报，２００５，２９（２）：２９～３０．　显优于后者。　［５２　Ｓｐａｒｋ　Ｓ　Ｒ　Ｅ．Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｏ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　参考文献：　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｕｒｅｍｉａ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｎ　ｅｐｈ　ｒｏｌ，１９７９，¨：８卜８５．　［１］叶任高主编．内科学［Ｍ］．第５版．北京：人民卫生出版　（收稿日期　２００７—０１—１１）　社。１９９９：５６９－５７９．　４３３