２０１２年８月５日第２ｌ卷第ｌ５期 Ｖｏ１．２１，Ｎｏ．１５，Ａｕｇｕｓｔ ５，２０１２ 中ｌ 茄 Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｔｓ ・药物鉴定・ Ｄｒｕｇ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 反相高效液相色谱法测定心可舒颗粒中葛根素和芦丁含量 阳华 ，王文渊 ，蒋小玲 ４２５６００； ２．湖南永州职业技术学院，湖南永州４２５０００） ４２５６００； （１．湖南省永州市药品检验所，湖南永州３．湖南恒伟药业有限公司，湖南永州摘要：目的建立同时测定心可舒颗粒中主药有效成分葛根素和芦丁含量的方法。方法采用Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ 色谱柱（２５０ ｍｍ ｘ４．６ ｍｍ。 ５ ｍ），流动相为甲醇一水一乙腈一冰醋酸（２８：６０：１０：２），流速为０．８ ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５２ ｎｍ，枉温为３Ｏ ｃｃ。结果葛根素质量 浓度在２．５４—２５．４０ ｐ￣ｇ／ｍＬ的范围内与峰面积呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９ ８），平均回收率为９８．６４％，ＲＳＤ＝２．２５％（ｎ＝６）；芦丁质 量浓度在１．９７～１９．７０ ｐ￣ｇ／ｍＬ范围内与峰面积线性关系良好，ｒ＝０．９９９ ６，平均回收率为１００．５７％，ＲＳＤ＝２．５３％（ｎ：６）。结论该法 准确、简便，重现性好，可用于心可舒颗粒制荆的质量控制。 关键词：心可舒颗粒；葛根素；芦丁；高效液相色谱法 中图分类号：Ｒ２８４．１；Ｒ２８６．０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—４９３１（２０１２）１５—００３７—０２ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｅｒａｒｉｎ ａｎｄ Ｒｕｔｉｎｕｍ ｉｎ Ｘｉｎｋｅｓｈｕ Ｇｒａｎｕｌｅｓ ｂｙ ＨＰＬＣ Ｈｕａ ，Ｗａｎｇ Ｗｅｎｙｕａｎ。，Ｊｉａｎｇ Ｘｉａｏｌｉｎｇ３ （ ．Ｙｏｎｇｚｈｏｔｔ Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｙｏｎｇｚｈｏｕ，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ ４２５６０６； ２．Ｙｏｎｇｚｈｏｕ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｙｏｎｇｚｈｏｕ，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ ４２５６００； ３．Ｈｕｎａｎ Ｈｅｎｇｗｅｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｙｏｎｇｚｈｏｕ，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ ４２５０００） Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｕｅｒａｒｉｎ ａｎｄ ｒｕｔｉｎｕｍ ｉｎ Ｘｉｎｋｅｓｈｕ Ｇｒａｎｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ ｔｈｅ Ｓｙｍｍｅｔｙｒ Ｃ１ ８ ｃｏｌｕｍｎ（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ ｍ）ｗｉｔｈ ｍｅｔｈａｎｏｌ—ｗａｔｅｒ—ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ—ｇｌａｃｉａｌ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（２８：６０： １ ０：２）ａｓ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ ０．８ ｍＬ／ｍｉｎ．ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５２ ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ３０ ｃＣ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｆｏｒ ｐｕｅｒａｒｉｎ ａｎｄ ｒｕｔｉｎｕｍ ｗｅｒｅ ２．５４—２５．４ ｂ￣ｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９ ８）ａｎｄ １．９７—１９．７￣ｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９ ６）， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ９８．６％，ＲＳＤ＝２．２３％（ｎ＝６）ｆｏｒ ｐｕｅｒａｒｉｎ ａｎｄ １００．５％，ＲＳＤ＝２．０８％（ｎ＝６）ｆｏｒ ｒｕｔｉｎｕｍ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｂｅｔｔｅｒ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｔｏ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｘｉｎｋｅｓｈｕ Ｇｒａｎｕｌｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｘｉｎｋｅｓｈｕ Ｇｒａｎｕｌｅｓ；ｐｕｅｒａｒｉｎ；ｒｕｔｉｎｕｍ；ＨＰＬＣ 心可舒颗粒是以山楂、丹参、葛根、三七、木香５味中药为原料 制成的颗粒制剂，具有活血化瘀、行气止痛的功效，用于气滞血瘀 型冠状动脉粥样硬化性心脏病引起的胸闷、心绞痛、高血压、头 晕、头痛、颈项疼痛及心律失常、高血脂等症的治疗。山楂、丹参为 方中主药，其所含黄酮成分同样具有扩张血管、增加血流量ｎ。］、降 低心肌耗氧量、降低血清胆固醇、抗动脉硬化、抗心绞痛作用 】， 具有防治心血管疾病的功能ｌ６ ，测定方法使用可见一紫外分光光 度法。但现行使用的心可舒颗粒质量标准仅以测定葛根素的含量 来控制质量 ］，而未对其他两味君药进行质量评价。笔者采用反 相高效液相色谱法同时测定葛根素和芦丁的含量，以芦丁为对照 下，葛根素和芦丁的理论板数分别大于５ ０００和４ ０００，葛根素和 芦丁与其相邻峰分离良好，谱图见图１。 ＡＵ ｏ ０４０ ０ ０２０ Ｏ Ａ ＡＵ 计算总黄酮 ，可控制产品中山楂、丹参、葛根３味主药材的质 ０．０４０ 量，进一步完善和提高了该制剂的质量标准。 １ 仪器与试药 ０．０２０ Ｗａｔｅｒｓ ６００Ｅ泵高效液相色谱仪，Ｗａｔｅｒｓ ＰＡＤ９９６二极管阵列 检测器；Ｗａｔｅｒｓ Ｍ３２色谱工作站；Ｍｅｔｔｌｅｒ ＡＥ２４０型天平（梅特勒一 托利多上海仪器有限公司）；ＫＳ一６００Ｄ型超声清洗器（宁波科生 仪器厂）。葛根素对照品（批号为１１０７３６—２００５２７）、芦丁对照品 （批号为０７７７３—９９１０）均购自中国药品生物制品检定所；心可舒 ＡＵ ０ Ｂ ０．０４０ 颗粒（湖南恒伟药业有限公司，批号分别为０９０８１３，０９１１０１， ０９１００８）；甲醇、乙腈为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为超纯水，其 ０ ０２０ 余试剂均为分析纯。 ２ 方法与结果 ０ ２．１ 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Ｓｙｍｍｅｔｒｙ ＣＩ ８柱（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ Ｉｘｍ）；流速： Ａ １．葛根素 ２．芦丁 Ａ．混合对照品溶液 Ｂ．阴性对照品溶液 Ｃ．供试品溶液 ０．８ ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２５２ ｎｍ；柱温：３０℃；进样量：１０ ｉｘＬ；流动 相：甲醇一水一乙腈一冰醋酸（２８：６０：１０：２）。在上述色谱条件 图１ 高效液相色谱图 ・药物鉴定・ Ｄｒｕｇ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 中Ｉ虱荔 ＣｈｆＪ 口Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ２０１２年８月５日第２１卷第ｌ５期 Ｖｏ１．２１，Ｎｏ．１５，Ａｕｇｕｓｔ ５，２０１２ ２．２ 溶液制备 为Ｙ＝４ ８３７．１７４Ｘ＋１５７．９２，ｒ＝０．９９９ ８（ｎ＝６），表明葛根素质量 浓度在２．５４～２５．４Ｉｘｇ／ｍＬ范围内与峰面积线性关系良好；芦丁的 回归方程为Ｙ＝３ ２２８．５１６Ｘ～７１．８６，ｒ＝０．９９９ ６（ｎ＝６），表明芦 精密称取经五氧化二磷减压干燥２４ ｈ的葛根素对照品 １２．７ ｍｇ，芦丁对照品９．８５ ｍｇ，置５０ ｍＬ量瓶中，用７０％甲醇溶 解定容至刻度，制成含葛根素０．２５４ ｇ／Ｌ、芦丁０．１９７ ｇ／Ｌ的混合 对照品溶液。取装量差异项下的样品，研细，精密称取０．５ ｇ，置具 丁质量浓度在１．９７～１９．７ Ｉｘｇ／ｍＬ范围内与峰面积线性关系良好。 精密度试验：精密吸取同一混合对照品溶液１０ ，重复进 样６次，测定色谱峰面积。结果葛根素、芦丁峰面积积分值的ＲＳＤ 塞三角瓶中，加７０％甲醇５０ ｍＬ，称定质量，超声处理（功率２５０ Ｗ， 频率３３ ｋＨｚ）４０ ｍｉｎ，取出，放冷至室温，再次称定，用７０％甲醇补 足减失的质量，摇匀，滤过，精密取续滤液２ｍＬ，置５０ｍＬ棕色量 分别为１．８５％和２．０４％，表明仪器精密度良好。 稳定性试验：取同一供试品溶液，照２．１项下色谱条件分别 瓶中，７０％甲醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按处方比例 称取除山楂、丹参的其他药味，依照心可舒颗粒的制备工艺制成 缺山楂、丹参的心可舒阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制 成阴性对照品溶液。 ２．３方法学考察 于配制后０，２，４，６，８，１０ ｈ时进样。结果葛根素、芦丁峰面积积分 值的ＲＳＤ分别为１．２９％和１．５４％（ｎ＝６），表明供试品溶液在 １０ ｈ内稳定。 重复性试验：取６份同－－￣ｔＬ（批号为０９１００４）样品粉末０．５ ｇ， 精密称定，按２．２项下方法制成６份供试品溶液，按２．４项下 线性关系考察：分别精密量取混合对照品溶液０．５，１．０， ２．０，３．０，４．０，５．０ ｍＬ，置５０ ｍＬ棕色量瓶中，用７０％甲醇释至刻 操作。结果葛根素和芦丁含量的平均值分别为１６．５７ ｍｇ／ｇ和 ５．７４ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ分别为１．１７％和１．６９％（ ＝６）。 加样回收试验：精密称取已知含量的本品３组，每组２份，３ 度，摇匀，制成葛根素和芦丁的系列混合标准溶液。分别精密吸取 上述溶液１０ Ｌ，按２．１项下色谱条件进样测定，以峰面积ｌ，为 组分别精密加入一定量的葛根素和芦丁对照品，按供试品溶液制 备方法制备及色谱条件进行测定，计算回收率。结果见表１。 纵坐标、质量浓度 为横坐标绘制标准曲线。葛根素的回归方程 表１ 加样回收试验结果（ｎ＝６） ２．４样品含量测定 乙睛一冰醋酸的组成及比例进行的反复试验比较中发现，以甲 醇一水一乙睛一冰醋酸（２８：６０：１０：２）作流动相，分离效果较 取不同批次的样品，按供试品溶液制备方法制备所需供试品 溶液；精密吸取供试品溶液和对照品溶液各１０ Ｌ分别注入液相 色谱仪，测定峰面积，用外标法计算样品中葛根素、芦丁的含量。 结果见表２。 表２ 样品含量测定结果（ｎ＝３） 好，得到色谱图的峰形较好。所建立的方法重现性好，测定结果 准确，为产品的质量控制提供了新的依据。 作者简介：阳华（１９７４一），男，主管药师，研究方向为中药及 中药制剂质量检测与控制，（电子信箱）１９３４０６５９＠ｑｑ．ｃｏｒｎ；王文 渊，副教授，研究方向为药物分析，本文通讯作者，（电子信箱） ｗｗｙ０７＠１６３．ｔｏｍ。 参考文献： ［１］凌一．中药学【Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９８３：７８—８６． ［２］肖崇厚．中药化学【Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９６：１５１—１５４． ［３］刘北林，董继生，医巫亘，等．山楂黄酮提取及降血脂研究【Ｊ】．食品 科学，２００７，２８（５）：３２４—３２７． ３ 讨论 【４］夏龙凤．中药降脂颗粒的制备及其质量标准研究［Ｄ］．北京：首都师 范大学，２００７． 在采用超声提取有效成分时，考察了不同提取时间（２Ｏ，３０， ４０，５０ ｍｉｎ）对测定结果的影响。结果表明，超声４０ ｍｉｎ已能将样 品中的有效成分提取完全，因此选择超声提取４０ｍｉｎ。若以流动 ［５］孙敬勇，杨书斌，谢鸿霞，等．山植化学成分研究［Ｊ］．中草药，２００２， ３３（６）：４８３—４８６． 相为稀释剂，色谱显示主成分峰与杂质峰不能完全分离，影响定 量分析结果，故选用甲醇为稀释剂。 ［６］郭雪峰．毛竹与铺地竹叶黄酮类化学成分及其生物活性的研究［Ｄ］． 北京：中国林业科学研究院，２００７． ［７］ＹＢＺ０３０２２００６，国家食品药品监督管理局标准（试行）［ｓ］． 各取葛根素和芦丁对照品适量，初始流动相溶解配成溶液， 在２００～４００ｎｍ波长范围进行扫描，发现葛根素在１９５，２５２，３０５ｎｍ 处有吸收峰。芦丁在２５４，３４７ ｎｍ处有吸收峰，在２５２ ｒｉｍ处也有 较强吸收，故选择２５２ ａｍ作为检测波长。 在对流动相乙腈一水、甲醇一水、甲醇一水一乙睛、甲醇一水一 ［８］顾小曼，李 蕾．高效液相色谱法测定银杏叶中芦丁［Ｊ］．色谱， １９９５，１３（３）：２１６—２１７． ［９］杜进，郭磊，陶慧颖．ＨＰＬＣ测定银杏叶提取物中总黄酮含量［Ｊ］． 黑龙江医药，２００２，１５（６）：４２６—４２７＋ （收稿日期：２０１１—０２—２２；修回日期：２０１１—１０—１２）