・７ｌｌ・．论著．下呼吸道分泌物中糠秕马拉色菌的分离与鉴定陈东科许宏涛【摘要】目的对痰涂片镜检可疑为马拉色菌的标本进行马拉色菌的分离培养，并对分离菌株进行系统鉴定。方法收集２０１０年３月至２０１１年９月卫生部北京医院经派克墨水染色镜检可疑为马拉色菌的下呼吸道分泌物标本１３３份，接种于含ｌ％吐温６０的科玛嘉琼脂培养基（即改良念珠菌显色培养基），于３５℃大气环境中培养。挑取疑似菌落在含０．５％吐温４０和０．５％吐温印的沙保弱平板上进行纯培养。采用传统的表型鉴定方法对分离菌株进行鉴定，包括染色镜检观察菌体形态及染色性、沙保弱培养基生长试验、吐温试验、七叶苷分解试验、过氧化氢试验、吐温沉淀试验和蓖麻油试验，可疑菌株采用１８ｓｒＲＮＡ基因序列分析方法对分离菌株进行菌种鉴定。结果镜检可疑的下呼吸道分泌物中马拉色菌分离率为４７．４％（６３／１３３），６３株分离菌经传统的表型鉴定方法结合１８ｓｒＲＮＡ基因序列分析方法均鉴定为糠秕马拉色菌。标本直接涂片，用派克墨水染色镜下可明显区分马拉色菌和念珠菌。结论糠秕马拉色菌在改良念珠菌显色培养基上的菌落呈粉红色，可明显区别于其他念珠菌菌落，用改良念珠菌显色培养基可提高下呼吸道分泌物中糠秕马拉色菌的分离率。传统的表型鉴定结合基因序列分析可提高马拉色菌鉴定的准确性。ｆ中华捡验医学杂丧，２０１２，３５：７１１－７１５）【关键词】马拉色霉菌属；痰；表型；ＲＮＡ，核糖体，１８Ｓ；序列分析；细菌学技术ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭａｌａｓｓｅｚｉａ．ｆｕｒｆｕｒｆｒｏｍｌｏｗｅｒｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓＣＨＥＮＤｏｎｇ－ｋｅ。ＸＵＨｏ鸭－ｔＯＯ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂｅ日堍ＨｏｓｐｉｔａｌｏｆｔｈｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｉｊｉｎｇｉ００７３０．ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ｃＨＥＮＤｏｎｇ－ｋｅ．ＥｍａｉｌＩｖ—ｄ－ｋ＠２６３．ｎｅｔ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅｓＴｏｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｓｏｌａｔｅＭａｌａｓｓｅｚｉａｆｉｌｌｆｕｒｗｈｉｃｈｗｅｒｅｓｕｓｐｅｃｔｅｄｉｎｓｐｕｔｕｍｓｍｅａｌ鸭．ａｎｄｔｈｅｎｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｓｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ．ｎｅｔｈｏｄｓＦｒｏｍＭａｒｃｈ２０１０ｔｏＳｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１１，１３３ｌｏｗｅｒｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎＢｅｉｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌｏｆｔｈｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＨｅａｌｔｈｗｈｉｃｈｗｅ托ｓｕｓｐｅｃｔｅｄｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＭａｌａｓｓｅｚｉａ知咖ｒｂｙＰａｒｋｅｒｉｎｋｓｔａｉｎｉｎｇ．ｎＩｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｍ刮ｏｎＣＨＲＯＭａｇａｒｍｅｄｉｕｍｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｌ％Ｔｗｅｅｎ６０（ｗｈｉｃｈｗａＥ，ｍｏｄｉｆｉｅｄｆｒｏｍＣａｎｄｉｄａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｍｅｄｉａ）ｉｎｔｈｅａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｔ３５℃．ＴｈｅｓｕｓｐｅｃｔｅｄｃｏｌｏｎｉｅｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄｏｎｂｅｔｈＳＤＡｐｌａｔｅｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０．５％Ｔｗｅｅｎ４０ａｎｄＳＤＡｐｌａｔｅｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０．５％Ｔｗｅｅｎ６０．Ｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｐｕｒｅｃｏｌｏｎｉｅｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｔａｉｎｉｎｇ，ｇｒｏｗｔｈｏｎＳａｂｏｕｒａｕｄａｇａｒｐｌａｔｅｓ，Ｔｗｅｅｎｔｅｓｔ，ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇＥｓｃａｌｉｎ，Ｃ８ｔａｌ鹤ｅｔｅｓｔ，Ｔｗｅｅｎｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｔｅｓｔａｎｄｃａｓｔｏｒｏｉｌｔｅｓｔ．Ｔｈｅｎｔｈｅｓｕｓｐｅｃｔｅｄｃｏｌｏｎｉｅｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙａｎａｌｙｚｉｎｇｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｌ８ｓｒＲＮＡｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＭａｌａｓｓｅｚｉａｆｕｒｆｕｒｆｒｏｍｌｏｗｅｒｆｌｌ咖ｒｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓｗａｓ４７．４％（６３／１３３）ａｎｄ６３ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅａｌＳＯｉｄａｎｔｉｆｉｅｄ鹪Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｂｙｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｍａｔｈｏｄｓｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅ１８ｓｒＲＮＡｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ．ＭａｌａｓｓｅｚｉａｃａｎｂｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｅｄｆｒｏｍＣａｎｄｉｄａｂｙｄｉｒｅｃｔｓｍｅｓＡ＂ｏｆｔｈｅｓｐｅｃｉｍｅｎｗｉｔｈＰａｒｋｅｒｊｎｋｓｔａｉｎｉｎｇ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＭａｌａｓｓｅｚｉａ危币‘，Ｗａｓｆｏｕｎｄａ８ｐｉｎｋｃｏｌｏｎｉｅｓＯｎｍｏｄｉｆｉｅｄＣａｎｄｉｄａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｍｅｄｉａｗｈｉｃｈｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒｏｍｏｔｈｅｒＣａｎｄｉｄａｃｏｌｏｎｉｅｓ．ＴｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｌｏｗｅｒｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓＣ８ＬｒＩｂｅｉｍｐｒｏｖｅｄｂｙｍｏｄｉｆｉｅｄＣａｎｄｉｄａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｅｍｅｄｉｇＴｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｃｃｕｒａｃｙＣａｎｂｅｆｕｎｈｅｒｉｍｐｒｏｖｅｄｂｙｃｏｍｂｉｎｉｎｇｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｗｉｔｈ１８ｓｒＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ．（Ｃ＾ｆｎＪＬａｂＭａｄ。２０１２。３５：７１，．７１５）【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ＭａｌａＳｓｅｚｉａ；Ｓｐｕｔｕｍ；Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ；ＲＮＡ，ｒｉｂｏｓｏｍａｌ，１８Ｓ；Ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ；ＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－９１５８．２０１２．傩．０１３马拉色菌为一种嗜脂性酵母，属人体皮肤正常基金项目：国家自然科学基金（３０８７２７１９）的菌群，也是一种条件致病真菌。到２０世纪９０年作者单位：１００７３０卫生部北京医院检验科代中期，有学者基于形态学、超微结构、生理生化特通信作者：陈东科．电子信箱：ｃ－ｄ－ｋ＠２６３．ｎｅｔ万方数据史堡焦熊医堂盘查垫１２生！旦箜翌鲞箜！翅垦竖璺』！些堕鲤，叁坚塾垫！兰：！丛篁：墨垒墨征以及分子生物学的研究，将马抟色菌分为厚皮马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｐａｃｈｙｄｅｒｍａｔｉｓ）、合轴马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ）、糠秕马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｆｕｏｒｕｒ）、钝形马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｏｂｔｕｓａ）、球形马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｇｌｏｂｏｓａ）、马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｒｅｓｔｒｉｃｔａ）和斯洛菲马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｓｌｏｏｆｆｉａｅ）７个种…。近年来，随着分子生物学研究的进展尤其是核糖体ＤＮＡ测序和随机扩增多态性分析在真菌分型上的应用，又有皮肤马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｄｅｒｍａｔｉｓ）江１、马属马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｅｑｕｉ）ＨＪ、同本马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｊａｐｏｎｉｃａ）、大和马拉色菌（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｙａｍａｔｏｅｎｓｉｓ）¨Ｊ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｎａｌ２ｚｚ［ｓｊ及Ｍａｌａｓｓｅｚｉａｃａｐｒａｅ【６ｊ６种马拉色菌被发现，现已报道的马拉色菌有１３个种。然而后６种新的马掩色菌种系发生上与合轴马拉色菌密切相关，还需要对其特征进行更多的研究以确认其为新种１７１。在易感因素的影响下，马拉色菌与花斑癣、毛囊炎、脂溢性皮炎、特应性皮炎及某些银屑病等疾病的发生密切相关，常侵袭皮肤角质层引起浅部真菌病。在已公认的马拉色菌７个种中，糠秕马拉色菌较为常见，其最常导致的疾病为花斑糠疹，糠秕马拉色菌还可引起败血症、腹膜炎、肺炎等【８］。本研究探讨了临床患者下呼吸道标本中糠秕马拉色菌的分离及鉴定情况。材料与方法一、材料１．标本来源：标本采自２０１０年３月至２０１１年９月卫生部北京医院呼吸道感染患者的气管吸痰４５００份。直接涂片经革兰染色镜检，镜下找到形态疑似马拉色菌为入选标准，剔除同一患者的重复标本，共１３３份疑似标本。糠秕马拉色菌ＡＴＣＣｌ４５２１由四川省人民医院喻华老师馈赠，球形马拉色菌ＣＢＳ９７９５由上海华山医院抗生素研究所胡付品博士馈赠。２．试剂与仪器：科玛嘉念珠菌显色培养基（ＣＨＲＯＭａｇａｒＴＭＣａｎｄｉｄａ）为法国柯玛嘉产品，沙保弱琼脂（Ｓａｂｏｕｒａｕｄｄｅｘｔｒｏｓｅａｇａｒ，ＳＤＡ）购自北京陆桥技术有限责任公司。糠秕马拉色菌分离培养基（筛选平板）为加１％吐温６０的科玛嘉念珠菌显色培养基（吐温．科玛嘉平板）。４％蓖麻油的ＳＤＡ平板，加２％吐温２０、４０、６０、８０的ＳＤＡ，加０．５％吐温４０和０．５％吐温６０的ＳＤＡ（菌株传代用），均为本实验室配制。吐温２０、吐温４０、吐温６０、吐温８０、七叶苷斜万方数据面培养基均购自杭州天和微生物试剂有限公司。触酶试剂ＩＤ—ＡＳＥ、革兰染色液购自法国生物梅里埃公司。派克标准墨水（Ｂｌｕｅ－Ｂｌａｃｋｉｎｋ）为上海派克笔有限公司产品。蓖麻油为湖北科田药业有限公司产品。橄榄油为西班牙亿芭利橄榄油公司产品。二、方法１．标本筛选：痰标本经革兰染色、镜检，发现有可疑为马拉色菌（革兰染色阳性、成群圆形或卵圆形、单出芽、芽生孢子与母孢子连接处可见颈圈样结构）的标本，另涂片作派克墨水染色，镜检确认（念珠菌孢子不着色）后接种马拉色菌筛选平板。２．菌株分离培养：挑一环镜检阳性的标本接种于吐温科玛嘉平板上，用接种环密涂，于３５℃大气环境，孵育２ｄ开始观察。挑取小圆。白色至粉红色，突起，较干燥，有特殊芳香气味的菌落涂片，用派克墨水染色后镜检，疑似菌株在加０．５％吐温４０和０．５％吐温６０的ＳＤＡ平板上进行纯培养。孵育至１０ｄ无马拉色菌生长为阴性。３．菌株鉴定一ｏ：鉴定过程以糠秕马拉色菌标准菌株ＡＴＣＣｌ４５２１和球形马拉色菌ＣＢＳ９７９５做质控对照。４．形态学鉴定：取分离菌株涂片，用５００ｍｌ／Ｌ派克墨水染色后镜下观察形态为卵圆形出芽孢子。５．沙保罗培养基生长试验：将分离菌种接种于ＳＤＡ培养基上，３５℃培养１４ｄ，记录生长情况。６．吐温试验：（１）打孑Ｌ法：配制０．５麦氏浓度待检菌液，密涂直径９０ｌｎｍＳＤＡ平板，以直径３ｌｎｍ的无菌钻孔器在平板四周打４个孑Ｌ，分别加入１００％吐温４０、吐温６０、吐温８０，３５℃培养３ｄ后观察生长情况。（２）点种法［Ｉ训：配制０．５麦氏浓度待检菌液，吸取菌悬液５出分别滴加于含２％吐温２０的ＳＤＡ培养基上，３５℃培养５ｄ，记录结果，明显生长为阳性，不生长为阴性。７．七叶苷分解试验：将待检菌接种于七叶苷琼脂斜面培养基上，并在斜面上滴ｌ滴橄榄油，３５℃培养３ｄ，观察培养基的颜色变化。培养基斜面变黑者为阳性，不变色为阴性。８．过氧化氢试验：滴加ＩＤ－ＡＳＥ触酶试剂ｌ滴于吐温一科玛嘉平板上的待检菌菌落上，立即观察，产生气泡则为阳性，不产生气泡为阴性。９．吐温沉淀试验：在加０．５％吐温４０和０．５％吐温６０的ＳＤＡ培养基上观察马拉色菌的菌落周围，如果出现白色沉淀圈，即为吐温沉淀试验阳性。１０．蓖麻油试验：（１）打孔法：配制０．５麦氏浓尘堡捡监医堂盈盛！！！；笙！旦笙！！盔笙！翅业也』！坐丛坐！，△！！ｇ幽垫！！，坠！：！！：盥！！：！度待检菌液，密涂直径７０３ｍｍＳＤＡ平板，以直径落（见罔２ａ），在吐温科玛嘉平板ｌ：的菌落形态为粉红色、隆起、圆形、光滑或粗糙的菌落（见图２ｂ），菌落散发ｍ特殊的香味。派克墨水染色镜检马拉色菌菌体形态为卵嘲形、单出芽、芽生孢子与母孢子连接ｍｍ的无菌钻孔器在平板上打孔，在孔内加入蓖麻油ｌ滴，３５℃培养５ｄ后观察生长情况。（２）点种法…］：配制５麦氏浓度待检菌液，吸取菌悬液ｌ“ｌ滴加于含４％蓖麻油的ＳＤＡ培养基上，３５ｃＣ培养５处可见颈圈样结构，个别菌株可见菌丝体（见图３ｄ，记录结果，明显生长为阳性，不生长为阴性。１１．１８ｓａ）。６３株临床分离菌株的菌落与糠秕马拉色菌ｒＲＮＡ基因序列分析：随意抽取５株不ＡＴＣＣｌ４５２１的形态特征一致，镜下形态不同于球形同时间分离的马拉色菌菌株进行基闪序列分析，以糠秕马拉色菌标准菌株ＡＴＣＣｌ４５２１做质控对照。具体方法参照文献［１２］进行，获得序列提交美国国家生物技术信息中心（ＮａｔｉｏｎａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒｆｏｒＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ＮＣＢＩ）ＧｅｎＢａｎｋ数据库（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）进行序列比对，分析待检真菌与参考序列相似度。Ｂｌａｓｔ序列比对结果与某种系的代表参照序列相比，未知菌株序列的相似性≥９９％，未知菌株鉴定为该种。结一、菌株分离结果从１３３份疑似痰标本分离出６３株马拉色菌，分离率为４７．４％。６３例培养阳性患者的病Ⅸ分布为，呼吸科病房８例（１２．７％），呼吸监测室７例（１１．１％），急诊科病房１４例（２２．２％），老年病房２３例（３６．５％），神内病房４例（６．４％），神外病房３例（４．７％），其他病区４例（６．４％）。二、菌株鉴定结果１．形态学鉴定：革兰染色阳性、成群圆形或卵圆形、单出芽、芽生孢子与母孢子连接处可见颈圈样结构、直径为３—８怫ｍ（见图ｌａ），派克墨水染色（见图ｌｂ），镜检确认（念珠菌孢子不着色，见图１ｃ）。糠秕马拉色菌ＡＴＣＣｌ４５２１在吐温ＳＤＡ平板上的菌落形态为奶酪色、隆起、圆形、光滑或粗糙的菌注：ｎ罔为Ⅱｉ：温ＳＤＡ平板培养７ｄ；ｈ罔为吡温科玛靠平板培养６ｄ图２马托色菌菌落形惫果飞凹’・ｏ’・ｏ沌：ｎ图为群、！染色的马托色蒲孢千；ｈ…勾派兜聚水染色的７５｝口色蒲孢ｆ；ｒｌ警１为派兜鼹水染包，念珠【辇ｉ孢产４ｉ符乜（×ｌ（ｘｍ）田ｌ呼吸道感染患嚣痰涂片万方数据生垡丝堕医堂盘查！Ｑ！！生！且筮！！鲞箜！塑鱼堕！』！坐型型：叁！耻塾！！！！：！！！：箜，堕垒§雹图３。０ｉ分离自呼吸道感染患者马拉色菌镜下形态ｏ泣：ａＩ冬｛为临床分离抹【”Ｊ见菌丝体）；ｂ图为球形马拉色菌ｃＢｓ９７９５；ｃ图为糠秕马拉色菌ＡＴＣＣｌ４５２１（ａ—ｃ囝均为派克墨水染色ｘ１０００）马拉色菌ＣＢＳ９７９５（见图３ｂ），与糠秕马拉色菌ＡＴＣＣｌ４５２１相似（见图３ｃ），但不同菌株稍有差异。２．沙保弱培养基生长试验：６３株马拉色菌在ＳＤＡ平板上经１４ｄ孵育，均不生长。３．吐温试验：试验结果显示，６３株马拉色菌对吐温４０、吐温６０和吐温８０的需求为阳性，吐温２０为弱阳性。４．七叶苷分解试验：孵育３ｄ后，６３株马拉色的致病力较弱，机体免疫力下降是导致系统感染的前提。本研究人组的患者年龄范围为５０～１０４岁，平均８４岁，均有基础性疾病，大部分为鼻饲患者，近期或正在使用抗生素（部分患者使用了抗真菌药物），标本均为经气管吸痰，多次送检均分离到糠秕马拉色菌。笔者依据目前临床实验室普遍使用的念珠菌显色培养基（ＣＨＲＯＭａｇａｒ。ＭＣａｎｄｉｄａ），在其中加入了马菌的七叶苷试验结果均为阳性（斜面变黑）。５．过氧化氢试验：６３株马拉色菌的过氧化氢试验结果均为阳性。６．吐温沉淀试验：６３株马拉色菌的吐温沉淀试验结果均为阳性。７．蓖麻油试验：经５ｄ孵育，６３株马拉色菌的蓖麻油试验结果均为阳性。综合上述结果分析，６３株临床分离的马拉色菌均符合糠秕马拉色菌的生物学特征。８．ＤＮＡ测序结果：碱基序列提交美国ＮＣＢＩ的ＧｅｎＢａｎｋ获取对比指标。５株待测菌测序结果均为糠秕马拉色菌。讨论拉色菌生长必需的脂质物质（系列研究另文报道），结果显示马拉色菌在改良念珠菌显色培养基上的菌落（如图２ｂ所示）可明显区别于其他真菌菌落【９Ｊ。用改良念珠菌显色培养基（加１％吐温６０）分离可疑痰标本中糠秕马拉色菌的分离率为４７．４％（６３／１３３），此方法未见文献报道，可推广到其他标本中糠秕马拉色菌的分离使用。在痰标本涂片镜检中，使用派克墨水染色较革兰染色更能有效地区分马拉色菌和念珠菌（如图１ｂ、ｃ所示），派克墨水在马拉色菌鉴别的特异性方面明显优于革兰染色，尤其体现在对混合标本的检测。在进行吐温试验和蓖麻油试验时，ＳＤＡ琼脂平板点种法较传统的打孑Ｌ法操作更简便、结果易观察和判断，且成本低，本研究结果与文献报道一致Ｌｌ啦…。点种法更适用于大批量菌株的检测。由于糠秕马拉色菌是皮肤表面的正常菌群之一，临床上在花斑糠疹病灶部位分离率较高，但由该菌引起的系统性感染病例并不多见。证明该菌是否就是呼吸道致病菌，还要结合临床表现及其他诊断指标是否异常具体分析，６３例糠秕马拉色菌培养阳性病例均为长期住院患者，均有鼻饲、气管切开并插马拉色菌属是一种条件致病真菌，仅在某些特殊条件下由孢子相转为菌丝相而致病ｕｒ。其致病机制与机体的细胞免疫、体液免疫及非特异免疫有关Ｌｌ４。。赵红梅等。。５。的动物实验结果显示，单纯用菌悬液感染免疫功能健全的小鼠或豚鼠均不能引起临床和病理水平上的病变，而在预先进行免疫抑制后才能引起明显的临床和病理改变：提示马拉色菌万方数据・７１５・管，标本均采自负压吸痰，即使这样对痰培养检出菌的致病性确定要慎重，尤其是真菌。如果作为定植菌考虑也应引起临床医生的关注，毕竟在此之前并没有类似的连续监测的研究报告．在整体状况交叉、ｓｐｅｃｉｅｓ：ａｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈ．ＪＭｙｅｏｌＭｅｄ．１９９６．６：１０３・Ｉ１０．［６］ＳｕｇｉｔａＴＭ．ＴａｋａｓｈｉｍａＴ。ＳｈｉｎｏｄａＨ，ｅｔａ１．Ｎｅｗｙｅａｓｔｓｐｅｃｉｅｓ。Ｍａｌａｓｓｅｆｆａｄｅｒｍａｔｉｓ．ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｔｏｐｉｅｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉ０１．２００２．４０：１３６３．１３６７．【７］ＮｅｌｌｏｆａＡ．ＪａｍｅｓＳＡ，ＢｏｎｄＣＪ，ｅｔａ１．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｎｏｖｅｌＭａｌａｓｓｅｚｉａｓｐｃｃｉ∞ｙｅａｓｔｏｎｎｏｒｍａｌｅｑｕｉｎｅｓｋｉｎ．Ｖｅｔ反复感染并长期大量使用抗菌药物的患者，定植菌即为条件致病菌也可能成为最终的感染菌。因此，用科学的态度客观地评价该菌在致病中的意义是十分必要的。参［１］Ｇｕ６ｈｏＢｅｃ．２００２，１５０：３９５－３９８．［８］Ｔｅｇ［ｉａ０．ＳｃｈｏｅｈＰＥ．ＣｕｎｈａＢＡ．Ｍａｋｔｓｓｅｚｉａｆｕ币，ｒｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．ＩｎｆｅｃｔＣｏｎｔｒｏｌＨｏｓｐＥｐｉｄｅｍｉ０１．１９９１。１２：６７６－６８１．［９］陈东科．孙长贵．实用临床微生物学检验与图谱．北京：人民卫生｝ｌｊ版社，２０１ｌ：６６４－６６７．［１０］崔凡．沈永年．徐宏斌，等．马拉色菌属鉴定中吐温试验新方法的研究．实用医院临床杂志．２０１０，７：３８４Ｉ．考文献ＭａｌａｓｓｅｚｉａＥ．ＢｏｅｋｈｏｕｔＴ，ＡｓｈｂｅｅＨＲ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｔｈｅｅｃｏｌｏｇｙｏｆｈｕｍａｎｓｋｉｎａｎｄｓｐｅｃｉｅｓｉｎａｔ；ｐａｔｈｏｇｅｎｓ．Ｍｅｄ［１１】张瑞峰．冉玉平．代亚玲．油蕈法蓖麻油试验鉴定马拉色菌的研究．四川大学学报（医学版），２０１０，４１：６９２．６９５．［１２】耿佳靖．袁梁，鲁辛辛．１８ＳｒＲＮＡ基闲序列分析在临床常见酵缔样真菌鉴定中的应用．中华检验医学杂志，２００９，３２：６４４与４８．Ｍｙｅｏｌ，１９９８．３６：２２０－２２９．［２］ＳａｎｄａｔｚａｄｅｈｉｍｍｕｎｉｔｙｐｉｔｙｒｉａｓｉｓｔｏＭＲ，ＡｓｈｂｅｅＨＢ，ＣｕｎｌｉｆｆｅｔｈｅｍｙｃｅｌｉａｌｐｈａｓｅｏｆＷＪ，ｅｔａ１．Ｃｅｌｌ—ｍｅｄｉａｔｅｄＪＤｅｒｍａｔｏｌ，２００１。１４４：Ｍａｌａｓｓｅｚ＇ｉａ．ｓｐｐ．ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｖｅｒｓｉｅｏｉｏｒａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｂｒ７７斟．［１３］林元珠．现代儿童皮肤病学．北京：学苑｝ｎ版社．２００８：２５２．［１４］张海平．陶诗沁，杨莉佳，等．讫斑癣和脂溢性皮炎患者皮损中马托色菌种的鉴定及其分布情况．临床皮肤科杂志，２００５。３４：６６６－６６７．［３］Ｇｕｐ诅ＡＫ．Ｂｌｕｈｍ［４］ＧａｉｔｓｎｉｓＲ．ＳｕｍｍｅｒｂｅｌｌＲ．Ｐｉｔｙｒｉａｓｌｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ．ＪＥｕｒｏｆＡｃａｄＤｅｒｍａｔｏｌＶｅｎｅｍ０１．２００２，１６：１９－３３．Ｇ．ＶｅｌｅｇｒａｋｉＡ．ＦｒａｎｇｏｕｌｉｓＥ．ｅｔａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ［１５］赵红梅．冉玉平，蒋献，等．肾移植患者皮肤脓肿分离出糠秕马拉色菌ｉ例报道．四川大学学报，２００５，３６：１４３－１４６．（收稿日期：２０１Ｉ－１０－０７）Ｍａ／ａｓｓｅｚ／ａＭｉｅｒｏｂｉｏｌｓｐｅｃｉｅｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｋｉｎａｃａｌｅｓ，ｂｙＰＣＲ—ＲＥＬＥ．ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔ．２００２。８：１６２—１７３．Ｅ，ＬｅｓｏｕｒｄＭ．ｅｔａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ（本文编辑：武昱）【５］ＧｕｉＢｏｔＪ．ＧｕｅｈｏＭａ／ａｓｓｅｚ／ａ．学界与业内新动态．２０１２年医学实验室自动化研讨会召开随着实验室自动化在我国的不断发展，实验室建设的方向从标准化和规范化向信息化和智能化转变已经成为趋势。日益成熟的实验室白动化技术应用使得检验技术和管理的统一成为可能，并成为科室要求高效率和高质量的好帮手。同时，不断完善的实验流程能够更好地为患者与临床提供及时、优质的服务。如何行之有效地改善实验室流程成为实验室共同努力的方向。连续两届成功举办医学实验室自动化研讨会后，２０１２年３月２９日在浙江省宁波市，贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司举办的主题为“更快更高更强”的“２０１２年医学实验室自动化研讨会”成功召开，超过６００位临床检验专家与医师出席。会议由第三军医大学西南氏院检验科主任、全国医院感染控制专业委员会副主任委员府伟灵教授与第二军医大学长征医院实验诊断科主任仲人前教授共同主持．卫生部临床榆验中心陈文祥主任、中华检验医学杂志编辑部韩锟主任亦莅临现场致辞。此次研讨会邀请到周内外知名专家进行精彩演讲。深圳市妇幼保健院龙峰主任做了“实验室自动化流水线价值初探”的报告．介绍了通过流水线的引进．推动ｒ医院数字化建设．促进了医院业务的发展，提升了检验科综合实力，完善了实验室生物安全．实现了综合效益的增长。来自美国（张楠）ＦｒａｎｃｉｓｃａｎＨｅａｌｔｈＳｙｓｔｅｍ主任ＬｉｎｄａＧｕａｙ介绍了。实验室精益流程”；圣约瑟夫医学中心应用ｋ明一精益流程与自动化相结合的成功案例．阐释了未来现代化实验宅的长远发展之路。首都医科大学附属北京安贞医院检验科袁慧主任以“实验室的智能化建设”为题．报告了如何实现检验科各部门一体化．提高检验信息的准确性、稳定性和安全性的内容。中国医药大学附属医院施木青主任的“ＤＭ２与ＴＬＡ协同在实验室ＩＳ０１５１８９与ＣＡＰ认证过程中的经验分享”引起强烈反响。他从实验室管理者的角度分析了挑战与对应的战略．突出介绍了ＤＭ２的自动化审核功能．及引入之后与１ｒＩＡ的协同效益；两者的有效结合．协助实验室通过相应认证。此外。芜湖市第二人民医院陈健康主任的“谈发展检验自动化的意义”也引起在场嘉宾的共鸣。会后专家们一起参观了宁波第一人民医院及宁波酆州人民医院．共同探讨、交流实验室自动化对流程改革的意义．关注自动化在中国的发腮前景。与会嘉宾均对此次高层次的自动化研讨会给于充分肯定与积极评价。期待２０１３年医学实验室自动化研讨会再相聚！万方数据
