西部医学２０１４年２月第２６卷第２期 Ｍｅｄ Ｊ Ｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１４，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．２ ・１４５・ 体上，且不易产生宿主免疫反应［８ 。故本研究采用 慢病毒载体来生产带有红色荧光的ｖｉｇｉｌｉｎ慢病毒。 我们的研究将ＤｓＲｅｄ２从ｐＤｓＲｅｄ２一Ｎ１中用Ｎｈｅ Ｉ、Ｎｏｔ工双酶切切下，连人ｐｃＤＮＡ３．１（一）上，再从 ｃｅｎｔｒｉｃ ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｔｉｎ ａｎｄ ｉｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｔｏ ｔｈｅ ）ｃａｓｔ Ｓｃｐｌ ６０ｐ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｃｅｌｌ ｐｌｏｉｄｙ ＥＪＪ．ＥＭＢＯ Ｊ’１９９９，１８（１３）：３８２０—３８３３． ［－４３ Ｗａｎｇ ＱＱ，Ｚｈａｎｇ Ｚ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｖｉｇｉｌｉｎｓ ｂｉｎｄｓ ｔｏ ｐｒｏ— ｍｉｓｃｕｏｕｓｌｙ Ａ—ｔｏ＿Ｉ—ｅｄｉｔｅｄ ＲＮＡｓ ａｎｄ ａｒｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｃＤＮＡ３．１（一）一ＤｓＲｅｄ２中用Ｋｐｎｌ单酶切切下 ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｔｉｎ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ，２００５；１５（４）：３８４２３９１． Ｅ５３ Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＫＳ，Ｄｏｄｓｏｎ ＲＥ，Ｎａｇｅｌ ＭＡ，ｅｔ ａ１．Ｖｉｇｉｌｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｖｉｔｅｌｌｏｇｅｎｉｎ ｍＲＮＡ ３’一ｕｎ— ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ ｐｏｌｙｓｏｍａｌｒｉｂｏｎｕ— ＤｓＲｅｄ２片段插入ｐＣＳ—ＣＧ－ｖｉｇｉｌｉｎ中，成功构建了 ｐＣＳ—ＣＧ—ＤｓＲｅｄ２一ｖｉｇｉｌｉｎ重组慢病毒载体。并将该重 组慢病毒载体与慢病毒包装质粒一起共转染 ＨＥＫ２９３Ｔ细胞，包装出带红色报告基因的ｖｉｇｉｌｉｎ慢 病毒。用该病毒分别感染ＨＥＫ２９３Ｔ和ＨｅｐＧ２细 ｃｌｅａｓｅ １［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｅａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２０００，９７（２３）：１２４９８— １２５０２． Ｅ６］ 杨文理，武静。谢晓砚，等．人ｖｉｇｉｌｉｎ基因全长编码区的分段 胞，均能观察到较强的红色荧光，说明包装出的慢病 毒能高效的感染ＨＥＫ２９３Ｔ和ＨｅｐＧ２细胞。这个过 克隆及鉴定Ｉ－Ｊ］．四川大学学报（医学版），２００８，３９（６）：８７７— ８８１． 程中我们构建了一个穿梭载体ｐｃＤＮＡ３．１（～）一 ＤｓＲｅｄ２，这种方法在没有合适酶切点的情况下避免了 ［７］ Ｆｏｌｌｅｎｚｉ Ａ，Ｓａｎｔａｍｂｒｏｇｉｏ Ｌ，Ａｎｎｏｎｉ Ａ．Ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｔ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，２００７，７（５）：３０６—３１５． ［８］ Ｃｈｕｍａｋｏｖ ＳＰ，Ｋｒａｖｃｈｅｎｋｏ ＪＥ，Ｐｒａｓｓｏｌｏｖ ＶＳ。ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍＲＮＡ ｔａｒｇｅｔｓ ｗｉｔｈ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｓｈＲ— 采用ＰＣＲ来获取目的片段时可能发生的错配等情况， 大大提高了构建的效率。 ４ 结论 ＮＡ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｐｌａｓｍｉｄ，２０１０，６３（３）：１４３— １４９． Ｖｉｇｉｌｉｎ是一个多功能蛋白质，本研究构建了ｐＣＳ— ＣＧ—ＤｓＲｅｄ２一ｖｉｇｉｌｉｎ重组慢病毒载体，并成功地包装出 相应的慢病毒，包装出的ｖｉｇｉｌｉｎ慢病毒为我们后续研 －Ｉ９］ Ｒａｍｏｓ ＯＳ，Ｃａｒｒａｔａｌｄ ＹＰ，Ｐｕｅｒｔａ ＳＧ，ｅｔ ａ１．Ｄｕａｌ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｇｅｎｅｒａｔｅｓ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｅ２一ＣＳＦＶ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅｉｒ ｍｉｌｋ，ｂｕｔ ｉｍｐａｉｒｓ ｅａｒｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ［Ｊ１．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，２０１１，７５（７）：１２８０— １２８９． 究ｖｉｇｉｌｉｎ在细胞中的生物学形态奠定了基础。 【参考文献】 Ｈ Ｈ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ ＨＲ．Ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｔｉｎ：ＲＮＡ ［１］ Ｂｉｒｃｈｌｅｒ ＪＡ，Ｋａｖｉ［１Ｏ］Ｋｅｅｎ ＪＥ，Ｈｕｎｇｅｒｆｏｒｄ ＬＬ，Ｌｉｔｔｌｅｄｉｋｅ ＥＴ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｗｅ ｏ— ｖｉｎｅ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ｅｗｅ ａｎｄ ｌａｍｂ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｐｒｅｖ Ｖｅｔ Ｍｅｄ，１９９７，３０（２）：１５５－１６９． ｐｏｉｎｔｓ ｔｈｅ ｗａｙ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ，２００４，１４（１８）：Ｒ７５９一Ｒ７６１． ［ｚ］ Ｈｕｅｒｔａｓ Ｄ，Ｃｏｒｔ６ｓ Ａ．Ｃａｓａｎｏｖａ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ＤＤＰ１，ａ ｍｕｌｔｉ—ＫＨ—ｄｏｍａｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ．ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ Ｅｌ１３周亚峰，李红霞，蔡思达，等．穿梭质粒ｐＣＤＨ１一ＧＦＰ—ＨＣＮ４的构 建及ＨＣＮ４重组慢病毒的包装Ｉ－Ｊ］．苏州大学学报（医学版）， ２Ｏ１２，３２（３）：３５４—３５８． ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ＥＪ３．Ｃｕｒｒ Ｂｉｄ。２００４，１４（１８）：１６１１— １６２０． ［１２３王婷婷，王淑娟，严景华．ｈＮｏｃ４Ｌ基因重组慢病毒表达载体的构 建与鉴定ｒｊ］．生物工程学报，２０１０，２６（１１）：１５６９—１５７５． （收稿日期：２０１３—０９—２５；修回日期：２０１３—１２—０９；编辑：张文秀） ［３］ Ｃｏｒｔ６ｓ Ａ，Ｈｕｅｒｔａｓ Ｄ，Ｆａｎｔｉ Ｌ，ｅｔ ａ１．ＤＤＰ１，ａ ｓｉｎｇｌｅ—ｓｔｒａｎｄｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ，ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｐｅｒｉ一 本刊主要栏目设置与投稿范围 《西部医学》为医学综合类学术期刊，主要栏目设置有：专家述评、基础医学与实验研究、临床研究与经验、影 像医学、临床药学、检验医学、临床护理、综述与讲座、短篇与个案、读者・作者・编者等栏目。 凡符合本刊栏目设置要求的规范论文，均可投送本刊。请作者撰稿前先阅读本刊“投稿须知”，“投稿须知” 可在本刊网站查询（网址：ＷＷＷ．ｘｂｙｘｑｋ．ｃｎ）；投稿可直接发到本刊邮箱：ＸＩＢＵ＠ｃｈｉｎａｊｏｕｒｎａ１．ｎｅｔ．ｃｎ（本刊邮箱 可在万方、中国知网、维普等及本刊网上查阅）。本刊未在任何地方设立组稿中心，所谓《西部医学》北京、上海、 西安等组稿中心，均系盗用本刊名号的非法行骗活动，请广大读者、作者提高警惕，不要上当受骗。 （本刊编辑部）
