表皮生长因子受体19、21外显子突变丰度与nsclc患者临床特征及吉非替

窑经验交流窑表皮生长因子受体19、21外显子突变丰度与NSCLC患者

临床特征及吉非替尼疗效的关系

李苏霞

关键词

蒋亦燕

陈细秀

王鹏飞

杨晓蕾

非小细胞肺癌；表皮生长因子受体；突变丰度；吉非替尼

排除标准：（1）非EGFR突变；（2）合并其他可能危及患者生命安全的严重疾病；（3）合并控制性差的严重糖尿病、心血管疾病、高血压等；（4）无法进行生存随访；（5）合并其他器官恶性肿瘤。

方

EGFR19和21外显子突变检测法

收集NSCLC

是临床应用最广的NSCLC靶向治疗药物[1]。吉非替尼是表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（epidermal

lungcancer，NSCLC）的重要治疗方法，其中吉非替尼

靶向治疗是目前非小细胞肺癌（nonsmallcell

growthfactorreceptor-tyrosinekinaseinhibitor，2（EGFR）酪氨酸激酶结合，通过抑制其活性而阻断转移等作用[2]。多项临床研究已证实，EGFR基因突变EGFR-TKI），能够竞争性地与表皮生长因子受体

2.1

EGFR下游信号传导通路，发挥抑制肿瘤恶性增殖、剂盒（北京天根生化科技有限公司，批号20130921）状态是EGFR-TKI疗效的重要预测指标[3-4]。近年临床发现，同为携带EGFR基因敏感突变的NSCLC患者，EGFR-TKI治疗的中位无进展生存期（progression突变丰度有关。本研究检测NSCLC患者EGFR19、21外显子突变类型及突变丰度，探讨EGFR19、21外显子突变丰度与NSCLC患者临床病理特征及吉非替尼疗效的关系。现报道如下。11.1

临床资料一般资料

收集2013年10月—2016年11月

freesurvival，PFS）差异明显[5]。这可能与EGFR基因

21外显子检测引物：EGFR19正向5'-GTGCATCGC-GenBank数据库中人EGFR基因序列，设计EGFR19、提取血液DNA，测定A260nm/280nm吸光度。参照

患者血液，使用DP318-02血液基因组DNA提取试

TGGTAACATCC-3'，反向5'-TGTGGAGATGAGCAG-3'。引物合成由上海生工生物工程（上海）股份有限公

GGTCT-3'；EGFR21正向5'-GCTCAGAGCCTGGC-

ATGAAC-3'，反向5'-CATCCTCCCCTGCATGTGTT-94益，30s，55益，30s，72益，45s，40个循环；72益，

司合成。采用PCR扩增目的片段，程序：94益，5min；10min。琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，并采用琼脂

糖凝胶DNA回收试剂盒（北京索莱宝科技有限公司，批号20130826）回收纯化DNA产物。将回收纯化的DNA产物送至华大基因，使用IIIumina高通量测序平台直接测序，结果于GenBank数据库中人

温州医科大学附属第一医院收治的NSCLC患者94例，其中男53例，女41例，年龄（60.58依10.16）岁；吸烟史42例（44.68豫）；病理类型：腺癌75例，非腺癌

21外显子突变19例；临床分期：域期24例，芋期56例，郁期14例。EGFR基因序列比对，检测EGFR19、

情况。同时采用ARMS法定性定量检测EGFR19、21本研究经医院伦理委员会审核通过。1.2

纳入、排除标准

纳入标准：（1）经组织病理学

外显子突变。将直接测序法和ARMS法同时检测为

检查确诊为NSCLC且符合相关诊断标准，并经TNM

EGFR突变，且突变类型一致的病例，定义为高丰度

治疗方法及疗效评价

采用吉非替尼片

分期标准进行临床分期[6]；（2）临床病理资料完整；组；直接测序法未检出EGFR突变但ARMS法检测

定义为低丰度组。（3）病理组织EGFR突变为阳性；（4）进行吉非替尼出突变的患者，治疗；（5）患者均对本研究知情且签署知情同意书。2.2

基金项目：浙江省温州市科技计划项目（No.Y20170748）

作者单位：温州医科大学附属第一医院全科医学科（李苏霞，蒋亦燕，

陈细秀，杨晓蕾）、胃肠外科（王鹏飞）（温州325000）

通信作者：李苏霞，Tel：13777799062；E-mail：lisuxia779@163.com

（AstraZenecaUKLimited，规格：0.25g/片，批号后，行胸部CT、外周血肿瘤标志物等检查。

20130911）口服进行靶向治疗，每天1片。治疗4周

28

浙江中西医结合杂志2020年第30卷第1期ZhejiangJITCWM（Vol.30No.12020）1.1）评估治疗效果[7]，完全缓解（completeresponse，CR）：所有靶病灶消失，无新病灶出现，且肿瘤标志物

指标性别男2.3疗效标准参照实体瘤疗效评估标准（version

表1EGFR19、21外显子突变丰度与NSCLC患者

临床病理特征的关系[例（豫）]

例数

EGFR19、21外显子突变高丰度组25（47.17）低丰度组28（52.83）字2值

P值

正常，至少维持4周；部分缓解（partialresponse，PR）：靶病灶最大径之和减少逸30%，至少维持4周；

530.7370.391

疾病稳定（stabledisease，SD）：靶病灶最大径之和缩小未disease达出，PRPD），：或增大未达PD；疾病进展（progressive100现新病灶。靶疾病病灶控最大制径率之=（和CR+PR+SD至少增加）逸/总20%例数，或伊2.4

豫2018生。存随访

对患者生存期进行随访，截止时间

治疗开始年12至月病情31发日生。PFS进展为或第死亡1次的总使用时吉间非，总替尼生片存率（overallsurvival，OS）为截止随访时间患者病情未

进展或死亡的例数。2.5

统计学方法

应用SPSS22.0统计软件分析数

据，计量资料用平均数依标准差（x依s）表示，采用两样本t检验两组间差异性，计数资料用百分数（%）表示，采用字2检验组间差异性，绘制高丰度组和低丰度组Kaplan-Meier生存曲线，采用LogRank法检验两组生存率差异，以P约0.05表示差异有统计学意义。3.13

结

EGFR19果

、21外显子突变情况94例患者经直

接测序法或ARMS法检测结果，EGFR19外显子片段L858R性缺失突变59性缺失点+EGFR21突变35例例外（显37.23（62.77子豫豫），EGFR21外显子L858R），EGFR19点双外突显变子片2段例2.13豫）。其中被2种方法同时检测到突变且突变类型一致的48例，为高丰度组；直接测序法未检出突变而ARMS法检测为突变的46例，为低丰度组。3.2

EGFR19、21外显子突变丰度与NSCLC患者临

床病理特征的关系

EGFR19、21外显子突变丰度在

性别、年龄、吸烟史、TNM分期等方面差异无统计学意义（P跃0.05）；腺癌患者EGFR19、21外显子突变高丰度比例高于非腺癌患者（P约0.05），组织中高分化

患者EGFR19、21外显子突变高丰度比例高于低分化患者（P约0.05）；EGFR19、21外显子突变丰度在病理类型。、组织分化程度等方面差异有统计学意义（EGFR19见表1。

P约3.3

0.05）、21外显子突变丰度与吉非替尼疗效

的关系

EGFR19、21外显子突变高丰度组疾病控制

率.58豫，低丰度组疾病控制率63.04豫，两组疾病

女4123（56.10）18（43.90）年龄（岁）逸603316（48.48）17（51.52）6132（52.46）29（47.）0.1350.713

吸烟约60

史有4223（.76）19（45.24）无5225（48.08）27（51.92）0.4160.519

病理类型腺癌73（57.33）32（42.67）非腺癌195（26.32）14（73.68）5.8370.000

TNM域分期2415（62.50）9（37.50）芋耀郁7033（47.14）37（52.86）1.6870.194

组织分化程度低分化3814（38.）24（63.16）中高分化

56

34（60.71）

22（39.29）

5.163

0.023

注：NSCLC为非小细胞肺癌；EGFR为表皮生长因子受体

控制率比较，差异有统计学意义（P约0.05）。见表2。

表2

EGFR19、21外显子突变丰度与吉非替尼疗效的

关系[例（豫）]

组别

例数

CR

PR

SD

PD

疾病控制率

高丰度组4819（39.58）21（43.75）3（6.25）5（10.42）43（.58）低丰度组468（17.39）17（36.96）4（8.69）17（36.96）29（63.04）

字2值9.229P值

0.002

注：CR为完全缓解；PR为部分缓解；SD为疾病稳定；PD为疾病进展；EGFR3.4

为EGFR19表皮生长、因21子受外体

94例患者截止至随访显时子间突，变死亡丰度45与生例存，生期的存49关系

OS为52.13豫，PFS例，组OS为.58豫（31/48为（14.06），低依3.57丰度）个组月OS。其中为39.13高丰度

豫6.09818/46个月，，）低P，=0.014两组丰度组）。OS比较，差异有统计学意义（字2=

中高位丰PFS度组为中（位12.06PFS依2.87为（）15.98个月依，3.24两组）中0.000位PFS比较，差异有统计学意义（t=6.199，4

）。见图1。

P=

讨

论

研究表明，EGFR主要分布于细胞膜表面，为跨膜糖蛋白，包括胞内酪氨酸激酶活化区、跨膜区和胞外配体结合区[8]。EGFR基因是重要的肿瘤驱动基因之一，在促进肿瘤增殖、转移、血管生成等过程中发

（（浙江中西医结合杂志2020年第30卷第1期ZhejiangJITCWM（Vol.30No.12020）29

图1

高丰度组和低丰度组Kaplan-Meier生存函数分析

挥重要作用，是NSCLC临床靶向治疗的重要靶点[9]。

吉非替尼靶向治疗NSCLC的疗效取决于EGFR基因突变[10]。然而，有研究发现，同为携带EGFR基因EGFR-TKI敏感突变的类NSCLC分患者药EGFR-TKI物6个人月群左，治疗的右一便部出分PFS现患疾者可病规长进范服达展1~2，而用

另一部年[11]。针对这一问题，部分学者研究认为与EGFR突变类型有关，即EGFR19外显子片段化缺失突变的临床疗效优于EGFR21外显子L858R突变[12]。但相关研究的样本量往往偏小，而在一些大型临床实验中未能证实此论断。有学者[13]提出EGFR基因突变丰度存在个体差异可能是影响吉非替尼（EGFR-TKI）疗效的重要原因，并证实EGFR基因高突变丰度组患者EGFR-TKI治疗的PFS明显长于低突变丰度组患者。

NSCLC研的究生物表明标，志血物浆EGFR突变检测可作为早期

[14]。本研究选择94例EGFR基因突变患者血液为样本，进行直接测序法和ARMS法EGFR19检测EGFR基因突变类型及突变丰度，结外显子L858R外显子点片突段变性率缺37.23失突豫变，率EGFR1962.77豫、21，EGFR21果外显子双ARMS突变率2.13豫。48例患者同时被直接测序和

度NSCLC相对法较检高测。到进一同一步类分型析突发变现，，表EGFR明EGFR突突变丰表现为腺病癌理、分组型织、组中织高分分化化程患度者之EGFR间存在差变突变异丰丰，度主要在度相

对较高高的Wang，与高NSCLC等宁等[15]、娄冲等[16]研究结果相似。

[17]研究表明，EGFR基因突变的丰度较患者PFS较低突变丰度患者改善；Li等[18]研究表明，EGFR基因突变丰度与EGFR-TKI治疗疗效显著相关，EGFR基因突变低丰度可能对

NSCLCEGFR控制率基患.58因者突PFS豫变产生不利影响。本研究结果显示，，高而丰低度丰组度使组疾用吉病非控替制尼率治疗的63.04豫疾，病高丰度组使用吉非替尼治疗的疾病控制率显著高于低丰度组。分析两组患者PFS和OS发现，高丰度组患者PFS较低丰度组明显延长，OS明显高于低丰度组，说明EGFR基因突变丰度与NSCLC患者吉非替尼治疗疗效及预后密切相关。

综上所述，NSCLC患者EGFR基因突变丰度的高低与临床病理分型、组织分化程度及吉非替尼治疗疗效有关，突变丰度高的患者吉非替尼治疗疗效

相对较好，患者PFS和OS明显延长。本研究不足之处在于应用直接测序法和ARMS法检测EGFR基因突EGFR变丰基度因存突在变一丰定度局限与NSCLC性，而本患研者临床究重点病在于验证吉非替尼疗效的关系，因此仍需进一步探索理新特的征定及

量检测EGFR基因突变丰度的方法。

参

考

文

献

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（收稿：2019-05-06

EGFR-TKIsinadvancedNSCLCwithEGFRmutations

修回：2019-08-26）

胃苓散加味方联合特利加压素治疗肝硬化

合并域型肝肾综合征临床研究

姜

关键词

斓

陈

刚陈

伟

张

莉

肝硬化；域型肝肾综合征；胃苓散加味方；特利加压素

字表法分为对照组和观察组各38例。本研究经医院1.2

诊断标准

西医诊断标准参照《胃肠病学和肝

肝肾综合征是终末期肝病患者较为常见的并发稀释性低钠血症和低尿钠，一旦产生，治疗困难，且存活率较低[1]。故目前提倡及时控制肝肾综合征，提高患者生存率，主张早诊断，早治疗。目前以内科药物控制为首选，特利加压素治疗肝肾综合征安全有效，但长期使用易产生腹泻及耐药性等。本研究探讨胃苓散加味方联合特利加压素协同治疗肝硬化合并域型肝肾综合征的临床疗效。11.1

资料与方法

症之一。临床特征为自发性少尿或无尿、氮质血症、伦理委员会审核通过，患者知情且签署知情同意书。

[2]

病学》诊断标准：（1）肝硬化腹水；（2）血肌酐>

[3]肌酐无改善。中医诊断标准参照《中医内科学》，中

132.6滋mol/L；（3）停止利尿剂2天且白蛋白扩容后血医辨证属脾肾阳虚水停毒蕴证：腹胀，朝宽暮急，青

筋显露，乏力，纳差，神倦怯寒，恶心欲吐，肢冷或下肢水肿，腰膝酸冷疼痛，尿少，便溏，舌淡暗边有齿痕、苔白腻，脉涩细。1.3

纳入、排除标准

纳入标准：（1）符合中西医诊

临床资料选择浙江省衢州市中医医院消化内

科2016年4月—2019年2月接治的肝硬化合并域型肝肾综合征患者76例作为研究对象，采用随机数

作者单位：浙江省衢州市中医医院消化内科（衢州324300）

通信作者：姜斓，Tel：13857030720；E-mail：lanjiang9853@163.com

断标准；（2）年龄18~80岁；（3）无休克且近期无肾毒性药物使用史；（4）自愿接受1个月治疗和检查，依从性良好；（5）无胃苓散加味方、特利加压素等相关药物过敏史；（6）治疗前1个月内未服用其他中药