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血管内穿刺法建立大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤模型

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晦床医药实践2017年3月第26卷第3期 文章编号:1671—8631(2017)03—0211—03 血管内穿刺法建立大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤模型… 孙新刚¨,侯亚芝 ,马乾 ,王荔。,王改青 ,胡为民 (1.山西医科大学第二医院,山西太原030001;2.山西医科大学,山西太原030001) 摘要 目的:建立一种微创、有效、重复性好的大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)动物模型。方法: 制备正常对照组和SAH组大鼠,每组12只。采用血管内穿刺法建立SAH后EBI动物模型,观察各组动物脑组织大 体标本,比较各组大鼠一般情况、神经行为学评分、脑含水量及血脑屏障通透性。结果:与对照组及假手术组相比, SAH组大鼠神经行为学评分明显降低(t=12.37,P<0.01),蛛网膜下腔可见弥漫性分布的血液或血凝块,脑含水量 (t=一9.4,0P<0.01)及血脑屏障通透性(t=一38.70,P<0.01)明显增加。结论:采用血管内穿刺法可成功建立大鼠 蛛网膜下腔出血后早期脑损伤模型。 关键词蛛网膜下腔出血;早期脑损伤;血管内穿刺 文献标识码:A 中图分类号:R651.1 A model of early brain injury following experimental subarachnoid hemorrhage established by intra- vascular puncture SUN Xingang ,HOU Yazhi ,MA Qian ,WANG Li ,WANG Gaiqing ,HU Weimin (1.The Second Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China;2.Shanxi Medical University,Taiyuan 030001, China) Abstract Objective:To establish a model of early brain injury(EBI)following experimental subarachnoid hemorrhage (SAH)in rat.Methods:A total of 24 healthy SD rats were randomly divided into either SAH(n:12)or control group(n= 12).Intravaseular puncture method was adopted to establish the EBI animals after SAH mode1.The general condition,neurobe— havioral scores,cerebral water content and permeability of blood brain barrier of the two groups were compared.Results:Blood spread the subarachnoid space of rats in the SAH group.Compared with that of the control group,the neurobehavioral scores of the SAH group decreased significantly(t=12.37,P<0.01),while the cerebral water content(t=一9.04,P<0.01)and permeability of blood brain barrier(t=一38.70,P<0.01)increased significantly.Conclusion:Intravascular puncture makes a reliable model of early brain injury following experimental SAH rat. Key words subarachnoid hemorrhage;early brain injury;intravascular puncture 研究表明,早期脑损伤(EBI)是导致蛛网膜下 腔出血(SAH)患者预后不佳的主要原因…。本研究 拟采用血管内穿刺法建立SAH后EBI动物模型,旨 在为有关EBI的实验研究提供帮助。 1材料与方法 动物经麻醉、备皮、消毒后,取颈正中切口,分离暴露 右侧颈外动脉(EGA)和颈内动脉(ICA),结扎并切 断ECA和ICA之间吻合支,将ECA结扎切断拉直, 使其与ICA成一直线。取头部锐化3—0单股尼龙 线由颈外动脉置人颈内动脉,深约l8.5 him,有阻力 时再进3 mm刺破血管,约15 S后拔出尼龙线,结扎 颈外动脉残端,恢复血流并缝合切口。对照组大鼠 采用相同手术过程,但不穿破血管壁。所有动物于 术后24 h处死。 1.1实验动物与分组 健康清洁级雄性SD大鼠24只,体重300~350 g。在标准环境饲养,湿度40%~70%,温度20—25 oC,自由摄食饮水,24 h昼夜循环光照。随机分为对 照组及SAH组,每组12只,其中6只用于血脑屏障 通透性检测,另6只用于脑含水量检测。 1.3神经行为学评估 参照Garcia等的神经行为学评分方法 J,所有 大鼠处死前行神经功能评分。共包括6项:四肢运 动对称性,攀爬运动,自主运动,前爪伸展性,触须反 1.2动物模型制作 采用血管内穿刺法制作SAH组动物模型_2 J。 [1]本课题为山西医科大学第二医院博士基金课题(项目编号:201501—7) 本文通讯作者:孙新刚 ・2l2・ Proceedin ̄‘)r Clinical Medicine.Mar.2017.Vol 26 No.3 应及肢体本体感觉,得分越低神经功能缺失越严重。 1.4血脑屏障通透性检测 参照文献方法 制作EB标准曲线。大鼠心脏 灌注前l h经股静脉注射2%EB生理盐水溶液(5 mL/kg),取适量穿刺侧颞叶基底部脑组织置入盛有 50%三氯乙酸溶液1.5 mL的匀浆器中,匀浆离心后 取上清液加入3倍量无水乙醇,计算每毫升液体所 代表的脑组织量。标准溶液设为空白对照,应用紫 外分光光度仪检测各组溶液OD值,据标准曲线定 量分析样本脑组织中的EB含量(rig/mg),以此为指 标反映血脑屏障通透性。 1.5脑含水量检测 参照文献方法采用干湿重法 ,大鼠断头取脑 后称取湿重,然后放人105℃电热干烘箱24 h后再 图1 SAH组大鼠脑标本观察 称干重。根据如下公式计算:脑含水量=[(湿重一 干重)/湿重]x 100%。 1.6统计学方法 数据以SPSS 18.0统计软件处理,计量资料以 ±s表示,组间比较采用t检验,P<0.05为差异有 统计学意义。 2 结 果 2.1 一般状况及神经行为学评分 SAH组大鼠麻醉清醒后均出现精神萎靡、嗜睡、 乏力,饮水、进食及活动减少,对照组未见明显异常。 SAH组神经行为学评分较对照组明显减低,差异有 统计学意义(见表1)。 2.2大体标本观察 SAH组在蛛网膜下腔可见弥漫性分布的血液或 图2对照组大鼠脑标本观察 血凝块,主要分布于颅底蛛网膜下腔,脑组织水肿明 显,未见脑组织损伤(见图1)。对照组无蛛网膜下 腔出血及脑水肿(见图2)。 及高致残率的特点 。近年来越来越多的证据表 明,导致SAH患者预后不佳的主要原因是EB1 。 为明确SAH后EBI的发病机制,急需制备一种能模 拟其病理生理变化的动物模型。以往有关SAH的 实验研究,多采用蛛网膜下腔注血法制备动物模型, 2.3 血脑屏障通透性及脑含水量检测 与对照组相比,SAH组大鼠血脑屏障通透性及 脑含水量均明显增加,差异有统计学意义(见表1)。 圭, 以枕大池注血法最常见 。该方法所致出血组织的 分布部位与后循环动脉瘤破裂所致出血相近,但临 床上约90%的SAH患者其动脉瘤性位于前循环 。 两组大鼠神经功能评分与血脑 . 屏障通透・陛及脑含水量比较 ~’ ’本研究采用血管内穿刺法刺破前循环的血管,颅腔 保持闭合,能更好地模仿人类动脉瘤性蛛网膜下腔 出血的病理生理过程。 EBI是指SAH后72 h内全脑组织所发生的直 3讨 论 接损伤,包括血脑屏障破坏、脑水肿及脑细胞凋亡 SAH是一种神经系统急危重症,具有高死亡率 等 j。本研究中SAH组大鼠神经行为学评分明显 临床医药实践2017年3月第26卷第3期 ・213・ 减低,脑组织含水量及血脑屏障通透性明显增加,说 明此模型可成功模拟SAH后EBI的病理改变过程。 formation after intracerebral hemorrhage:effects of extrav— asated red blood cells on blood flow and blood—brain 本方法操作简单,易重复,为SAH后EBI发病机制 的进一步研究提供了实验基础。 参考文献:  I1 I LANTIGUA H,0RTEGA—GUTIERREZ S,SCHMIDT J M,et a1.Subarachnoid hemorrhage:who dies,and why? barrier integrity[J].Stroke,2001,32(12):2 932—2 398. [6] MACD0NALD R L.Delayed neurological deterioration fater subarachnoid haemorrhage『J].Nat Rev Neurol, 2013,10(1):44—58. [7] VA 几 R H,WEIDAUER S.KONCZAUA J.et a1.Time course in the development of cerebral vasospasm after ex— perimental subarachnoid hemorrhage:clinical and neurora diological assessment of the rat double hemorrhage model l J I.Crit Care,2015,19(1):309. 』2 I BEDERSON J B,GERMANO I M,GUARINO L.Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new non— craniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat [J].Neurosurgery,2006,58(6):1 190—1 197. [8] VELTHUIS B K,RINKEL G J.RAM0S L M,et a1.Sub— arachnoid hemorrhage:aneurysm detection and preopera— I J f.Stroke,1995,26(6):1 086—1 091. [3] 李翠萍,钱素云.降钙素原在危重症监护中的研究进 展[J].国外医学儿科学分册,2004,3l(2):84—86. 1 4 l BELAYEV L,SAUL I,BUSTO R,et a1.Albumin treat— ment reduces neurological deficit and protects blood— brain barrier integrity after acute intraeortical hematoma tive evaluation with CT angiography[J].Radiology, 1998,208(2):423—430. YAN J,ROLLAND W B,et a1.Early brain inju— [9] FUJII M,ry,an evolving frontier in subarachnoid hemorrhage re— f5]in the rat ].Stroke,2005,36(2):326—331. XI G,HUA Y,BHASIN R R,et a1.Mechanisms of edema search[J].Transl Stroke Res,2013,4(4):432—446. 收稿日期:2016—12—30 (本文编辑:张红) 作者简介:孙新刚(1982一),男,山西省运城市人,博士学位,副主任医师,主要从事脑血管病的临床与基础研究工作。 文章编号:1671—8631(2017)03—0213—04 l,25一二羟维生素D,对单侧输尿管梗阻大鼠 肾间质纤维化调节性T细胞的作用研究 ] 王建吴,罗静,郭珲 (山西医科大学第二医院,山西太原030001) 摘要 目的:探讨1,25一二羟维生素D,[1,25(OH) D ]对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾问质纤维化调节性T 细胞(Treg)的作用。方法:54只健康雄性wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、UUO组(B组)、1,25(OH) D 治疗组 (C组)。每组于术后第1天、第3天、第7天分批处死6只,留取。肾脏组织。用HE染色观察肾脏病理变化,采用免疫 组织化学染色法测定肾脏人叉头框蛋白P3(FOXP3)、平滑肌肌动蛋白(d—SMA)的表达。结果:与假手术组相比, UUO组FOXP3表达水平显著降低,o/.一SMA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与UUO组相比,1,25 (OH) D,治疗组FOXP3表达水平显著升高, 一SMA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:调节 性T细胞可能参与了肾问质纤维化的发生及发展;1,25(OH):D,作为免疫调节剂可通过上调调节性T细胞减缓肾脏 纤维化的进展。 关键词1,25一二羟维生素D ;肾脏问质纤维化;调节性T细胞 中图分类号:R692.2 文献标识码:A Effects of 1,25一dihydroxyvitamin D3 on Treg cells in UUo rats with renal interstitial fibrosis WANG Jianwu,LUO Jing,GUO Hui (The Second Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China) Abstract Objective:To explore the effects of 1,25一dihydroxyvitamin D1 on regulatory T cells in unilateral uretera1 ob— struction(UUO)rats with renal interstitial ifbrosis.Methods:Fifty—four Wistar rats were assigned to healthy control group(A group),UUO group(B group),and 1,25一dihydroxyvitamin D3 treatment roup(C group).Afgter surgery for 1 day,3 days and 7 days,6 rats were selected from every group randomly,and killed to get the rena1.Renal pathological changes were observed [1]本课题为山西省留学人员管理委员会办公室科研资助项目(课题编号:2013—117);山西省国际科技合作项目(课题编号: 2013081056) 本文通讯作者:郭珲 

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