食品与发酵科技 Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｆｅｒｍｅｎａｎｉ￣ｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 第５３卷（第２期）Ｖｏ１．５３，Ｎｏ．２ 响应面法优化超声波辅助提取鸡枞菌多糖 及其抗氧化活性研究 张恒 ，郑俏然 ，李敏 （１．雅安职业技术学院药检系，四ＪＩＩ雅安６２５０００；２．长江师范学院生命科学与技术学院，重庆涪陵４０８１００） 摘要：本研究采用响应面法优化超声波提取鸡枞茵多糖的工艺条件，并进一步研究了其抗氧化活性。在单因素的基 础上，选取超声波作用时间、温度及液固比为影响因子，应用Ｂｏｘ—Ｂｅｈｎｋｅｎ中心组合进行３因素３水平的实验设计， 以多糖提取率为响应值，进行响应面分析。结果表明，超声波提取鸡枞茵多糖的最佳条件为超声波作用时间３６ｍｉｎ、 温度４ｌ℃、液固比３７：１时，可得最大多糖提取率，预测值为６＿３６％，与验证值（６．３２％）基本一致。鸡枞茵多糖对羟基自 由基（・０Ｈ）、超氧阴离子自由基（０ 一・）及ＤＰＰＨ自由基都有较强的清除能力，具有良好的抗氧化活性。 关键词：超声波提取；多糖；鸡枞茵；响应面法；抗氧化活性 中图分类号：ＴＳ２０１．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４—５０６Ｘ（２０１７）０２—００１３—０００６ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｌｌｙｂｉａ ａｌｂｕｍｉｎｏｓａ Ｐ０ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅｔｈｏｄ ＺＨＡＮＧ Ｈｅｎｇ ，ＺＨＥＮＧ Ｑｉａｏ－Ｒａｎ ，ＬＩ Ｍｉｎ （ ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｙａ’ａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ｙａ’ａｎ ６２５０００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｙａｎｇｔｚｅ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｌｉｎｇ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０８１００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｇｏｌｌｙ— ｂｉａ ａｌｂｕｍｉｎｏｓａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．Ｕｓｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｃｏｌｌｙｂｉａ ａｌｂｕｍｉｎｏｓａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ａｓ ｔｈｅ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ，ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｉｍｅ ａｎｄ ｗａｔｅｒ－ｍａｔｅｒｉａｌ ｒａｔｉｏ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗｅｒｅ ｉｎ— ｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｓｔｕｄｉｅｓ，ａ ｔｈｒｅｅ－ｖａｒｉａｂｌｅ，ｔｈｒｅｅ—ｌｅｖｅｌ Ｂｏｘ—Ｂｅｎｈｎｋｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｒｅ— ｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｅｅｈａｒｉｄｅｓ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｃｏｌｌｙｂｉａ ａｌｂｕｍｉｎｏｓａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ ３６ｍｉｎ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ４１℃，ａｎｄ ｗａｔｅｒ－ｍａｔｅｒｉａｌ ｒａｔｉｏ ｏｆ ３７：１（ｍＬ／ｇ），ｕｎｄｅｒ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ ６．３６％，ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｔｕａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｓ ６．３２％．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｏｌｌｙｂｉａ ａｌｂｕｍｉｎｏｓａ ｐｏｌｙｓａｅｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｎ・ＯＨ，Ｏ２一ａｎｄ ＤＰＰＨ ｒａｄｉｃａｌ ｗａｓ ｓｔｒｏｎｇ，ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ Ｃｏｌｌｙｂｉａ ａｌｂｕｍｉｎｏｓａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｈａｄ ｇｏｏｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｐｏｌｙｓａｅｅｈａｒｉｄｅｓ；Ｃｏｌｌｙｂｉａ ａｌｂｕｍｉｎｏｓａ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ；ａｎ－ ｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—５０６Ｘ．２０１７．０２—００４ 收稿日期：２０１７—０２—１２ 基金项目：２０１５年重庆市教委科学技术研究项目（ＫＪ１５０１２０１８） 作者简介：张恒（１９８５一），女，硕士，讲师，研究方向：功能性食品的研究与应用。 ￥通讯作者 １４ 食品与发醇科技 ２０１７年第２期 鸡枞菌（Ｃｏｌｌｙｂｉａ ａｌｂｕｍｉｎｏｓａ），又名蚁枞、鸡丝 菇等，属担子菌纲，伞菌目，口蘑科，蚁巢伞属，营养 丰富。鸡枞菌含有脑苷、皂苷、多糖、纤维素酶、多酚 等多种活性成分，具有醒脑、镇痛抗炎和抗氧化等生 物活性，其中，多糖是其主要活性物质之一。研究表 明．鸡枞菌多糖具有多种生物学功能，如抗肿瘤、抗 氧化、增强机体免疫力、改善小鼠急性酒精肝损伤、 降血脂等的作用［１－５￣。提取鸡枞菌多糖常用的方法有 水提法、酸提法及碱提法［６１。近年来研究发现，超声 波辅助提取法［７－－９７、酶法［１叫及微波辅助提取法［１卜 能 显著提高多糖得率，然而，响应面法优化超声波辅助 提取鸡枞菌多糖的提取工艺还未见报道，本研究采 用响应面法优化其多糖超声波提取工艺，并研究其 抗氧化活性，为高效率提取鸡枞菌多糖及其开发利 用提供理论依据。 １材料与方法 １．１材料与设备 鸡枞菌：市购．四川雅安二郎山。 主要试剂：浓硫酸、乙醇、苯酚、葡萄糖、丙酮、无 水乙醚、ＦｅＳＯ 、Ｈ：Ｏ 、水杨酸、邻苯三酚、Ｔｒｉｓ碱、 ＨＣ１、ＤＰＰＨ，均为国产分析纯。 仪器与设备：超声波清洗机、大容量离心机、旋 转蒸发仪、冷冻干燥机、紫外／可见分光光度计等。 １．２ 方法 １．２．１鸡枞菌多糖的提取工艺流程 鸡枞菌子实体一干燥．＋粉碎一过筛－÷超声波 提取一离心一抽滤 浓缩一醇沉＿离心 无水乙 醇、无水乙醚和丙酮洗涤一蒸馏水定容 多糖溶 液 １．２．２多糖含量测定 （１）葡萄糖标准曲线的绘制 精确称取１００ｍｇ分析纯葡萄糖（事前在ｌ０５ 烘至恒重）放在小烧杯中，用少许蒸馏水溶解后转入 到１００ｍＬ的容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀，浓度为 ｌｍｇ／ｍＬ。吸取上述溶液ｌＯｍＬ，用蒸馏水稀释至 ｌＯＯｍＬ，即为ｌＯ０１￣ｇ／ｍＬ，即为标准葡萄糖溶液。分别 吸取０、０．２ｍＬ、０．４ｍＬ、０．６ｍＬ、０．８ｍＬ、１．０ｍＬ、１．２ｍＬ的 标准葡萄糖溶液置于２０ｍＬ具塞玻璃试管中，用蒸 馏水补至２ｍＬ，向试液中加入１．０ｍＬ ５％苯酚溶液， 接着快速垂直加入５．０ｍＬ硫酸（勿触碰试管壁，便于 与反应液混合完全），静置ｌＯｍｉｎ，振荡使反应液完 全混合。再将试管放在３０℃水浴锅中加热２０ｍｉｎ， ４９０ｎｍ测定吸光度，以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸 光度为纵坐标，制得标准曲线。 （２）样品多糖含量的测定 将洗涤后的沉淀转移到１００ｍＬ容量瓶．并用蒸 馏水定容得食用菌多糖测定液。吸取样品液１．０ｍＬ． 按上述步骤测光密度，以标准曲线计算多糖含量。 １．２．３单因素实验 分别以液固比、温度、时间为单因素进行实验， 探讨其对超声波辅助提取鸡枞菌多糖的影响。 １．２．４响应面分析 在单因素实验结果基础上，根据Ｂｏｘ—Ｂｅｈｎｋｅｎ 实验设计原理，以料液比、温度、时间三因素三水平 的中心组合实验，利用Ｄｅｓｉｇｎ—Ｅｘｐｅｒｔ软件进行响应 面分析，确定超声波法提取鸡枞菌多糖的最佳工艺 条件。因素水平表见１。 表１ 响应面实验因素和水平编码值 Ｔａｂ．１ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｄｅｓｉｇｎ １．２．５ 回归模型验证实验 按照Ｄｅｓｉｇｎ Ｅｘｐｅｒｔ ７．０给出的最优参数进行 实验，重复３次，计算实验值与理论值之间的误差。 １．２．６・ＯＨ清除率的测定 （１）测定 采用Ｆｅｎｔｏｎ法测定鸡枞菌多糖清除羟基自 由基的能力。向试管中加入不同浓度的多糖溶液 ｌｍＬ，ＦｅＳＯ４（１．８ｍｍｏｌ／Ｌ）溶液２．ＯｍＬ，水杨酸——乙 醇（１．８ｍｍｏｌ／Ｌ）１．５ｍＬ，最后加Ｈ２ｏ２（０．０３％）０．１ｍＬ启 动反应，振荡混合，水浴３７℃，保温２０ｍｉｎ，在波长 ５１０ｒｉｍ下测量各自的吸光度Ａ值。 （２）计算清除率 自由基清除率Ｄ＝『（Ａ。一Ａ）／Ａｏ］ｘｌ００％ 式中：Ａ 空白管的吸光度； Ａ——加人自由基清除剂后的吸光度．其中空 白实验样品为蒸馏水。 ｌ－２．７ ０２－・清除率的测定 （１）测定 采用邻苯三酚自氧化法测定鸡枞菌多糖对超氧 阴离子自由基的清除能力。在反应体系中加入ｐＨ＝８．２ 的Ｔｒｉｓ—ＨＣ１缓冲液５ｍＬ。再加入０．５ｍＬ不同浓度的 多糖溶液，２５℃水浴中恒温２０ｍｉｎ后，用滴管加人 ５０ｍｍｏｌ／Ｌ的邻苯三酚１０１ｘＬ，迅速摇匀，于３２５ｎｍ处 每隔３０ｓ测定吸光度Ａ值。 第５３卷（总第１９８期） 张恒等：响应面法优化超声波辅助提取鸡枞菌多糖及其抗氧化活性研究 １５ （２）计算清除率 清除率Ｅ＝ 攀 咀ｘ１００％ 空白 自氧化速率Ｓ＝ＡＡ／Ａｔ．其中空白实验样品为蒸 馏水。 １．２．８ ＤＰＰＨ自由基清除率的测定ｎ １．２．８．１测定 （１）预实验 取ＤＰＰＨ（０．１ｍｇ／ｍＬ）溶液ｌｍＬ，配置一定浓度 的多糖样品溶液，将样品溶液由少到多逐渐加入，边 加边混合，并观察溶液的褪色情况，当溶液颜色基本 褪去时，记下样品的加量，即为最大用量。在此最大 用量的基础上，向前设置几个成等差数列的用量，并 确定一个反应体系总用量Ｖ总，并得出每个用量对应 的浓度。 （２）测量 Ａ０值测量：取ＤＰＰＨ溶液（０．１ｍｇ／ｍＬ）ｌｍＬ加入 到小试管中，不加样品液，加入无水乙醇Ｖ总ｍＬ，充 、褂臣莒丰冀嫡 分混合，在波长５１７ｎｍ下测吸光度Ａ值，此Ａ值为 ５ ４ ３ ２ Ａ０（Ａｏ多在０．７—０．９之间）。 Ａ值测量：取ＤＰＰＨ（０．１ｍｇ／ｍＬ）溶液ｌｍＬ加入 到小试管中，加样品液Ｘ ｍＬ（Ｘ是根据预试结果 确定的样品液的用量），再加（Ｖ总一Ｘ）ｍＬ无水乙醇， 混合，静置３０ｍｉｎ，在波长５１７ｎｍ下测吸光度Ａ值。 １．２．８．２计算清除率 清除率Ｄ＝［（Ａｏ－Ａ）／Ａｏ］￣１００％ 式中：Ａ 空白管的吸光度； Ａ——加入自由基清除剂后的吸光度。 ２结果与分析 ２．１ 葡萄糖标准曲线 葡萄糖标准曲线如图１。如图１所示，用苯酚一 硫酸法拟合的标准曲线方程为ｙ＝０．００５２ｘ＋０．００１ （Ｒ２＝０．９９９７），该方程拟合度较好。 ｊ四 凸 ０ Ｏ ２０ ４０ ６Ｏ ８Ｏ １００ １２０ 葡萄糖含ｔ／（ｕ ｇ・ｍ ） 图１ 葡萄糖的标准曲线 Ｆｉｇ＿１ Ｇｌｕｃｏｓｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ２．２单因素实验 ２．２．１提取时间对多糖提取率的影响 在液固比４０：１．温度５０℃条件下，研究超声波 提取１０ｍｉｎ，２０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，４０ｍｉｎ，５０ｍｉｎ等不同提取 时间对鸡枞菌多糖提取率的影响，结果如图２。由图 ２可知，从１０—５０ｍｉｎ，随着超声波提取时间的延长， 多糖提取率逐渐增大．当超声波提取时间为３０ｍｉｎ 时，提取率达最大值，此后，提取率逐渐降低。因此， 本实验选择超声波提取时间为３０ｍｉｎ。 ２．２．２提取温度对多糖提取率的影响 在液固比４０：１，提取时间３０ｍｉｎ条件下，研究 １ ０ ６ ５ ４ ＼褂 ３ ２ １ Ｏ １０ ２０ ３Ｏ ４０ ５０ 时间／ｍｉｎ 图２提取时间对多糖提取率的影响 Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｙｉｅｌｄ ４０ ５Ｏ ６Ｏ ７０ 温度／（℃） 图３提取温度对多糖提取率的影响 Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｙｉｅｌｄ ２Ｏ ３０ ４０ ５Ｏ ６０ 液固比／（Ｖ・ｍ。‘） 图４ 液固 Ｅ对多糖提取率的影响 Ｆｉｇ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ０ｆ ｑｕｉｄ－ｔｏ—ｍａｔｅｒｉａｌ ｒａｔｉｏ ｏｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｙｉｅｌｄ １６ 食品与发酵科技 ２０１７年第２期 表２响应面设计及试验结果 ３ＯｃＣ，４Ｏ℃，５Ｏ℃，６０℃，７０￣Ｃ等不同提取温度对鸡枞 菌多糖提取率的影响。如图３所示．提取温度对鸡枞 菌多糖提取率也有一定的影响．当提取温度为４０℃ 时，提取率达到最大，而后随着提取温度的增加，提 Ｔａｂ．２ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕ ｒｆａｃｅ ｄｅｓｉｇｎ ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ 取率降低，当提取温度为５０—７０℃范围内时，鸡枞菌 多糖的提取率趋于平稳。因此，本实验选择提取温度 为４０℃。 ２．２＿３液固比对多糖提取率的影响 在温度４０ｏ（＝，提取时间３０ｍｉｎ条件下，研究２０：１、 ３０：１、４０：１、５０：ｌ、６０：１等不同液固比对鸡枞菌多糖提 取率的影响，实验结果如图４。 如图４所示，随着液固比的增加，鸡枞菌多糖的 提取率逐渐增大．当液固比为４０：１时，其提取率达 到最大。而当液固比增大为５０：１及６０：１时，提取率 减小。因此，本实验选择液固比为４０：１。 ２－３ 鸡枞菌多糖提取工艺响应面优化设计与结果 分析 ２Ｉ３．１ 拟合模型的建立与模型方差分析 响应面实验设计及结果见表２。对表２中数据 进行回归拟合，得到自变量与鸡枞菌多糖提取率（Ｙ） 的二次多项回归方程为： Ｙ＝６．３２＋０．３３Ａ一０．３８Ｂ一０．３５Ｃ一０．０３６ＡＢ一０．１４ＡＣ＋ ０．０５２ＢＣ一０．４８Ａ 一Ｏ．３８Ｂ 一０．６７Ｃ 式中：Ｙ——多糖提取率，％； Ａ——时间，ｍｉｎ： Ｂ——温度．℃： Ｃ——液固比 对模型的方差分析结果见表３。分析结果表明， 对鸡枞菌多糖提取率所建立的二次多项式模型具有 高度显著性（Ｐ＜０．０００１），方程负相关系数的平方（Ｒ ） 为０．９９７９，失拟项不显著（Ｐ＝０．１２６３），Ｒ２ ｊ＝Ｏ．９９５１， 说明建立的模型能够解释９９．５ｌ％响应值的变化，能 很好的描述鸡枞菌提取过程中多糖提取率随提取条 件的变化规律，可以用此模型对多糖的提取率进行 分析和预测。 由表３可以看出，在所选择的试验范围内，影响 多糖提取率的因素按主次顺序排列为提取温度（Ｂ） ＞液固比（Ｃ）＞提取时间（Ａ）。在所选各因素水平范围 内．Ａ、Ｂ、Ｃ、ＡＣ、Ａ２ Ｂ２，Ｃ 对提取率Ｙ的影响显著。 由此可知，实验因素对响应值的影响不呈简单的线 性关系．交互项ＡＣ和二次项对响应值也有较大的 影响。 ２－３．２响应面分析 根据回归方程，固定１个因素在零水平上，研究 表３回归模型方差分析 Ｔａｂ．３ Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅ 方差来源 平方和 自由度 均方 Ｆ值Ｐ值 注： 差异极显著，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１ 另外２个因素间的交互效应，作响应曲面图，分析各 影响因素对多糖提取率的影响以及各因素间的交互 效应，如图５一图７。从其等高线图可以直观看出两 因素的交互作用，等高线的形状反映出交互作用效 应的强弱，圆形表示两因素交互作用不显著，等高 线形状越接近椭圆形表示交互作用越强。 由表３及图５一图７可知．提取时间和温度、提 取温度和液固比的交互作用不显著，提取时间和液 第５３卷（总第１９８期） 张恒等：响应而法优化超声波辅助提取鸡枞菌多糖及其抗氧化活性研究 多糖提取率／％ ５Ｏ．０Ｏ ４５．ＯＯ 横｝ 爨 ＯＯ 餐４ｏ．Ｏ０ ∞ ３５．Ｄ０ ３Ｏ．０Ｏ ２Ｏ ＯＯ ２５．ＯＯ ３Ｏ．ＯＯ ３５．ＯＯ ４０．ＯＯ Ａ：时间／ｍｉｎ 图５提取温度和时间交互作用图 Ｆｉｇ．５ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌｏｔ ｓｈｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕ ｒｅ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｙｉｅｌｄ ５０．ＯＯ ４５ Ｏ０ ＝、 Ｅ ＞ ４０．ＯＯ 丑 圈 梃 Ｏ０ ｕ ３５Ｏ０ ．３Ｏ ＯＯ ２０．ＯＯ ２５．Ｏ０ ３Ｏ ００ ３５．ＯＯ ４０．０Ｏ Ａ：时间／ｍｉｎ 图６提取液固比和时间交互作用图 Ｆｊｇ．６ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌｏｔ ｓｈｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ—ｔｏ—ｍａｔｅｒｉａｌ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｙｉｅｌｄ ４５ 二、 Ｅ ＞ ４０ 回 挺 Ｕ Ｏ０ ３５ ３０ ２０．００ ２５．ＯＯ ３０．００ ３５．０Ｏ ４０．Ｏ０ Ｂ：温度／℃ 图７提取液固比和温度交互作用图 Ｆｉｇ．７ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌｏｔ ｓｈｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ－ｔｏ—ｍａｔｅｒｉａｌ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕ ｒｅ ｏｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｙｉｅｌｄ 固比交互作用极显著。从图５可以看出，提取温度和 提取时间对鸡枞菌多糖提取率的影响均呈抛物线 之升高，达到最高点后又逐渐减小，说明温度和时间 过高或过低都不能使多糖提取率达到最大，而只有 它们取某个适中值时，才可使其达到最大值。图６、图 形，随着温度的升高和时间的增加多糖提取率也随 １８ 食品与发酵科技 ２０１７．Ｗ－￣ｌｇ ２期 ７与图５有同样的趋势。 通过软件分析。得出回归模型存在最大值点。鸡 枞菌多糖提取率的最大预测值为６．３６％，各因素取值 分别为时间３６．１４ｍｉｎ。温度４０．９６℃，液固比３６．６：１。 考虑到实际操作．选择最适条件为时间３６ｍｉｎ，温度 ４１℃，液固比３７：１，在此提取条件下进一步进行验证 试验．验证实验测得鸡枞菌多糖的提取率为６．３２％ （相对误差０．６％），与预测值基本一致，这充分说明 了该模型能够较好地模拟和预测鸡枞菌多糖的超声 波辅助提取条件与多糖提取率之间的关系，同时也 说明了超声波提取工艺参数的可行性。 ２．４鸡枞菌多糖抗氧化活性研究 ２．４．１鸡枞菌多糖对・ＯＨ的清除率研究 由图８可以看出。鸡枞菌多糖具有较强的・ＯＨ清 除能力。在实验所取鸡枞菌多糖浓度２００—８００ｐ．ｇ／ｍＬ 范围下，随着多糖浓度的增大，清除率逐渐提高，当 鸡枞菌多糖浓度为８００１－￣ｇ／ｍＬ时，对・ＯＨ的清除率 达５６．３２％。 ２．４．２鸡枞菌多糖对０２－・的清除率研究 由图９可以看出，鸡枞菌多糖具有较强的０２－・ ２００ ４００ ６００ ８００ 鸡枞菌多糖浓度／（ｕ ｇ・ｍＬ ） 图８鸡枞菌多糖对・ＯＨ的清除率 ＦＩｇ．８ Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ・ＯＨ ７０ ６Ｏ ５０ ， ￣Ｉ４０ ３０ ２Ｏ １０ ０ ２００ ４００ ６００ ８００ 鸡枞菌多糖浓度／（ ｇ・ｍ ） 图９鸡枞菌多糖对Ｏ ・的清除率 ＦＩｇ．９ Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ Ｏｚ－・ 清除能力．在实验所取鸡枞菌多糖浓度２００—８ｏｏ￣ｇ／０／０＼褂 ｍＬ范围内，随着食用菌多糖浓度的增加，其对Ｏ 一・∞ 卯 ∞ ∞ 加 ｍ ０ 的清除率逐渐增加。当多糖浓度为６００１ｘｇ／ｍＬ时，清 除率达５Ｏ％以上，当其浓度为８００１ｘｇ／ｍＬ时对Ｏ 一・ 的清除率达６４．００％。 ２．４－３ 鸡枞菌多糖对ＤＰＰＨ自由基的清除率研究 由图１０可以看出．鸡枞菌多糖具有较强的 ＤＰＰＨ自由基清除能力。随着多糖浓度的增加，其对 ＤＰＰＨ自由基的清除率逐渐增大．当ＤＰＰＨ溶液基 本褪色时，达最大清除率。当鸡枞菌多糖浓度为 ９３３１ｘｇ／ｍＬ时，ＤＰＰＨ自由基清除率为７３．７％。 ７Ｏ ６Ｏ ５０ ４０ 簇３０ ２Ｏ １Ｏ Ｏ ２００ ４００ ６００ ８００ １０００ 鸡枞菌多糖浓度／（１ａ ｇ・ｍＬ。‘） 图１０鸡枞菌多糖对ＤＰＰＨ自由基的清除率 Ｆｉｇ＿１ ０ Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｒｌ ＤＰＰＨ ３ 结论 在单因素试验基础上。采用响应面法优化超声 波辅助提取鸡枞菌多糖提取工艺．回归分析结果表 明，提取温度、时间及液固比对鸡枞菌多糖提取率都 有显著影响，且提取时间和液固比的交互作用对提取 率的影响也显著。采用响应面试验设计方法得出了 的超声波辅助提取鸡枞菌多糖提取工艺参数的回归 方程，方差分析表明，该模型具有高度显著性。在提 取温度、提取时间、液固比分别为４１ｏＣ、３６ｍｉｎ、３７：ｌ 时，可得最大多糖提取率，预测值为６．３６％，在此条 件下进行验证实验，得到多糖提取率为６．３２％，与预 测值基本一致，此回归模型预测各因素与提取率之 间的关系比较可靠．对于鸡枞菌多糖的开发利用及 产业化具有一定的理论指导意义。 鸡枞菌多糖具有较强的抗氧化活性．当鸡枞菌 多糖浓度为８００１￣ｇ／ｍＬ时。对・ＯＨ的清除率达 ５６．３２％；当其浓度为８００１￣ｇ／ｍＬ时对Ｏ 一・的清除率 达６４．００％：当鸡枞菌多糖浓度为９３３１ｘｇ／ｍＬ时， ＤＰＰＨ自由基清除率为７３．７％。 （下转第１２１页） 第５３卷（总第１９８期） 田智斌等：干法工艺对ＣＯＰＤ肠内营养食品中‘１）一３脂肪酸的影响 １２１ 在６５℃以后．（１）一３脂肪酸质量分数曲线斜率增 大，呈现明显降低趋势，过氧化值呈现上升趋势，变 化幅度均较大，原因可能是温度的升高破坏了微囊 ＣＯＰＤ肠内营养配方食品中加人ｔｏ一３脂肪酸，其占 配方的供能比应为１－６％。 但由于ｔｏ一３脂肪酸具有一般油脂类原料易被 氧化的特性．不利于常温条件下贮存，因此需要采用 微囊化工艺处理制备成性质较稳定的微囊化原料， 再添加到ＣＯＰＤ肠内营养配方中。在产品工艺选择 化‘１）一３脂肪酸的囊材，使其结构发生了变化。囊芯 即‘ｏ一３脂肪酸直接接触高温，随之在短时间内发生 氧化。因此，在具体工艺研究使用微囊化脂肪类原料 时，需注意控制工艺过程的温度，通过实验确定其温 度阈值，以防止脂肪类原料快速被氧化，影响到终产 上。湿法工艺和干法工艺是目前肠内营养食品加工 工艺中比较常用的两种工艺。干法工艺生产设备、操 作成本、技术难度较低，但对配方所使用原辅料的质 量要求较高，在国外普遍使用该工艺。在国内采用湿 法工艺较为广泛，工艺过程较为复杂，需对产品混合 原料进行剪切、浓缩、喷雾干燥等操作，生产成本较 品的质量。综合考虑，干法工艺添加微囊化∞一３脂 肪酸混合适宜温度为６５℃。 ２．２贮存时间和ｔｏ一３脂肪酸含量稳定性的关系 将５０ｇ制备样品采用适宜包材密封包装，置于 稳定性考察箱（温度：３７℃±２ｏＣ，ＲＨ：７５％±５％）中保 存。检测样品中的ｔｏ一３脂肪酸含量，计算其质量分 数，取样检测频率为每月一次，检测周期６个月，并 检测其过氧化值，结果见图２。从曲线图中可以看 出。经过微囊化的ｔｏ一３脂肪酸的质量分数和过氧化 高，喷雾干燥过程高温也易对产品中营养素含量产 生影响。而干法工艺均没有这些弊端，原料添加量易 于控制，最大化的减少了营养素的损耗，但其缺点是 某些微量营养素不易在产品中混合均匀，因此还需 要对干法工艺进行持续改进。 参考文献 ［１］ 韩军花．特殊医学用途配方食品系列标准实施指南［Ｍ］． 中国质检出报社，２０１５：１３８． ［２］ 黄秀娟．微胶囊化油脂的生产技术［Ｊ］．粮油食品科技， ２００６，１４（３）：１７—１９． 值，在６个月的贮存中都没有显著的的变化。说明经 过微囊化工艺处理后，ｏ一３脂肪酸的稳定性得到提 ｔ高，不易被氧化变质，有利于脂肪酸营养素在配方中 的保留，延长了产品贮存时间。因此在ＣＯＰＤ肠内营 养配方食品配方中。干混合加人微囊化的ｔｏ一３脂肪 酸可长时间贮存。 ３结论 『３１ ＧＢ，ｒＦ ５００９．１６８—２００３食品中二十碳五烯酸和二十二碳 ｏｔ一３脂肪酸是一种多不饱和脂肪酸。对人类健 六烯酸的测定． ［４］ ＧＢ ５００９．２２７—２０１６食品安全国家标准食品中过氧化 值的测定． 康具有重要意义，尤其对ＣＯＰＤ患者来说更是一类 极为重要的营养素，在临床营养应用中，通常建议在 （上接第１８页） 参考文献 ［１］ 张灵芝．鸡枞菌子实体多糖分离纯化与结构分析及抗肿 瘤活性研究［Ｄ］．广州：华南理工大学硕士论文，２０１２． 用［Ｊ］．中草药，１９９９，３０（９）：１－３． ［８］王铮敏．超声波在植物有效成分提取中的应用［Ｊ］．三明 高等专科学校学报，２００２，１９（４）：４５—５３． ［９］ ＲＯＤＲＩＧＵＥＳ Ｓ，ＰＩＮＴ０ ＧＡＳ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｅｎｏｌｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｒｏｍ ｃｏｃｏｎｕｔ（Ｃｏｃｏｓ ｎｕｃｉｆｅｒａ） ［２］ 周继平，许泓瑜．鸡枞菌粉不同组分的体外抗氧化活性 研究［Ｊ］．中国野生植物资源，２００８，２７（５）：４６—４９． ［３］王思芦，汪开毓，耿毅，等．鸡枞菌多糖对小鼠Ｔ细胞免 ｓｈｅｌｌ ｐｏｗｄｅｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００７，８０ （３）：８６９—８７２． 疫功能的影响［Ｊ］．中国兽医科学，２０１３，４３（１）：７７—８３． ［４］ 赵云霞，陶明煊，程光宇，等．鸡枞菌多糖对急性酒精肝 损伤小鼠超微病理结构及ＡＤＨ２，ＡＬＤＨ２ ｍＲＮＡ表达 ［１０］王宗君．茶树菇多糖提取与抗氧化性研究［Ｄ］．广西：广 西大学．２００７． ［１１］ＰＡＮ Ｘ，ＬＩＵ Ｈ，ＪＩＡ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ—ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ ｌｉｃｏｉｒｃｅ ｒｏｏｔ［Ｊ］． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０００，５（３）：１７３—１７７， 的影响［Ｊ］．食品科学，２０１５（５）：１９５—１９９． ［５］ 谭晓虹，方秀梅．云南产鸡枞菌多糖含量测定［Ｊ］．张家 Ｅｌ医学院学报，２００４，２１（１）：２—３． ［１２］黄桂萍，肖红，张敏生，等．微波技术提取香菇多糖的研 究［Ｊ］．食品科学，２００６，２７（１１）：２６７～２６９． ［１３］李熙灿，等．荜茇清除ＤＰＰＨ自由基能力的研究［Ｊ］．辽宁 中医药大学学报，２００７，９（１）：１４４—１４５． ［６］张智芳，林文庭，陈灿坤．植物多糖提取工艺的研究进 展［Ｊ］．海峡预防医学杂志，２００８，１４（３）：１８—２Ｏ． ［７］赵兵，王玉春，欧阳藩，等．超声波在植物提取中的应
