挥发性脂肪酸的测定
⼀、GC（Gas chromatograph）⼯作条件仪器： GC-14B型⽓相⾊谱仪（⽇本岛津公司）
⽑细柱：NUKOLTM Capillary Column ( Supelco )；Column No.34292-07B30m×0.32mm×0.25µm film thickness
⽓相⾊谱仪参数：⾊谱柱采⽤⽑细吸管柱，柱温，汽化温度180℃，采⽤氢离⼦⽕焰检测器，检测温度180℃，载⽓为氮⽓，压⼒为60 KPa，氢⽓压⼒为50 KPa，氧⽓压⼒50 KPa，灵敏度（档）为101，衰减 3.0⼆、样品制备1．试剂制备
（1）配制25%w/v 的偏磷酸溶液，将25克偏磷酸溶在100mL双蒸⽔中（2）巴⾖酸的配制，在100ml的偏磷酸溶液中加⼊0.6464g的巴⾖
酸，定容到100mL。
（3）标准样品，准确称取⾊谱标准级⼄酸0.9100 g、丙酸0.3700 g、
丁酸异丁酸0.1765g、戊酸和异戊酸分别为0.1985g，
分别溶于双蒸⽔中，再各⾃定容⾄100 mL2．样品制备
(1) 发酵液取（或过滤瘤胃液）VFA测定 1ml样品到离⼼管中，再加⼊0.2 ml的偏磷酸巴⾖酸混合溶液，－20℃冰箱保存过夜，解冻后
12000rpm离⼼10min，取上清液保存，测定前再12000rpm 离⼼10min(或少许通过0.22µm针式滤器，滤液直接进样⽤ 1.0微升微量进样器瞬时注⼊⾊谱仪，进样量为0.2－1.0µL。
(2) ⾷糜及粪样VFA测定取1克置于离⼼管中，加⼊5－10倍的双蒸⽔，混合均匀。取1mL上清夜，加偏磷酸巴⾖酸0.2mL/mL。其它步骤同上。3．保留时间的确定
与样品处理相同，在 1 ml标准样品中加⼊0.2mL偏磷酸与巴
⾖酸的混合样，上样测出⼄酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸的保留时间。4．有机酸浓度的计算
通过标准样品和内标巴⾖酸各⾃的（或浓度）和峰⾯积可以计算出⼄酸、丙酸及丁酸等有机酸的相对校正因⼦，然后根据⼄酸、丙酸及丁酸的重量（或浓度）与其峰⾯积成正⽐计算出各个样品中的⼄酸、丙酸及丁酸浓度。（样品某酸峰⾯积值×巴⾖酸标样峰⾯积×某酸标样浓度）某酸浓度(mM)＝（样品中巴⾖酸⾯积值×标样某酸峰⾯积）5．有机酸重现率
将某有机酸（如⼄酸）连续上样⼏次，测定其峰⾯积值，利⽤某酸峰⾯积值和内标峰⾯积值计算其重现率。
⼄酸重现率变异系数： 1.2872±0.06404丙酸重现率变异系数： 0.5104±0.01961丁酸重现率变异系数： 0.3422 ±0.01037
异丁酸重现率变异系数： 0.4668±0.01447戊酸重现率变异系数： 0.1431±0.01754异戊酸重现率变异系数： 0.1671±0.034966. 不同标样有机酸的GC峰形
丙酸
异丁酸
戊酸
巴⾖酸戊酸丁酸异戊酸
⼄酸 丙酸 异丁酸混合标样 样品
标样的分⼦量和出峰时间沸点分⼦量出峰时间
巴⾖酸86.09 1.95min⼄酸 118℃ 60.05 0.87min丙酸 141℃ 74.08 1.0min丁酸 163.5℃ 88.11 1.2min异丁酸 154.5℃ 88.11 1.06min1.68min戊酸 102.14
异戊酸102.14 1.38min
⽓相⾊谱的⽓体⼯作条件（VFA测定）钢瓶减压阀压⼒⽓象⾊谱压⼒表
氢⽓ 0.14MPa 50KPa 空⽓(AIR1) 0.4MPa 50KPa氮⽓（ARRIER2） 0.4MPa 60KPa300KPa PRIMARYCARRIER(P)消化道微⽣物研究室南京农业⼤学动物科技学院2007.9.28
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