淀粉含量的测定方法： 酸水解法

A.1原理

试样经石油醚或乙醚除去脂肪、经乙醇除去可溶性糖类后，其中淀粉用盐酸水解成具有还原性的单糖，然后按还原糖测定，并折算成淀粉。

A.2试剂和材料

如无特别说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的三级水。

A.2.1 盐酸溶液（1+1）：量取50 mL盐酸（HCl），量取50 mL水，混匀。

A.2.2氢氧化钠溶液：400 g/L，称取40 g氢氧化钠（NaOH）用水溶解，冷却至室温，用水稀释至100mL。

A.2.3乙酸铅溶液：200 g/L，称取20 g乙酸铅（PbC4H6O4·3H2O），用水溶解并稀释至100 mL。A.2.4硫酸钠溶液：100 g/L，称取10 g硫酸钠（Na2SO4），用水溶解并稀释至100 mL。A.2.5 85%乙醇溶液：取85 mL无水乙醇（C2H5OH)或.5 mL的95%乙醇，用水稀释至100 mL。A.2.6甲基红指示液：2 g/L，称取甲基红（C15H15N3O2）0.20 g，用少量乙醇溶解，用水稀释至100 mL。A.2.7碱性酒石酸铜甲液：称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.050 g亚甲蓝（C16H18ClN3S·3H2O），溶于水中并定容至1000 mL。

A.2.8碱性酒石酸铜乙液：称取50 g酒石酸钾钠(C4H4O6KNa·4H2O)、75 g氢氧化钠（NaOH），溶于水中，再加入4 g亚铁（K4Fe(CN)6·3H2O），完全溶解后，用水稀释至1000 mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。

A.2.9 D-无水葡萄糖（C6H12O6）：纯度≥98%（HPLC）。A.2.10 石油醚：沸点范围60℃～90℃。

A.2.11乙醚（C4H10O）。

A.2.12精密pH试纸：6.8～7.2。

A.3仪器和设备

A.3.1天平：感量为1 mg和0.1 mg。A.3.2恒温水浴锅：可加热至100 ℃。A.3.3回流装置，并附250 mL锥形瓶。A.3.4高速匀浆机等实验室常规制样设备。A.3.5电炉。

A.4分析步骤

A.4.1试样

A.4.1.1按GB/T 9695.19 取样。

A.4.1.2 取有代表性的试样不少于200 g，样品粉碎两次并混匀。

A.4.1.3制好的试样应尽快分析，若不立即分析，应密封冷藏贮存，防止变质和成分发生变化。贮存的试样在启用时应重新混匀。 A.4.2样品制备

称取试样 2 g~5 g（精确到0.001 g），置于250 mL锥形瓶中，用50 mL石油醚或乙醚分五次洗去试样中脂肪，弃去石油醚或乙醚。用150 mL85%乙醇溶液分数次洗涤残渣，以充分除去可溶性糖类物质。根据样品的实际情况，可适当增加洗涤液的用量和洗涤次数，以保证干扰检测的可溶性糖类物质洗涤完全。滤干乙醇溶液，以100 mL水洗涤漏斗中残渣并转移至250 mL锥形瓶中，加入30 mL盐酸(1+1)，接好冷凝管，置沸水浴中回流2 h。回流完毕后，立即冷却。待试样水解液冷却后，加入2滴甲基红指示液，先以氢氧化钠溶液(400 g/L)调至黄色，再以盐酸(1+1)校正至试样水解液刚变成红色。若试样水解液颜色较深，可用精密pH 试纸测试，使试样水解液的pH 约为 7。

然后加 20 mL乙酸铅溶液(200 g/L)，摇匀，放置 10 min。再加 20 mL硫酸钠溶液(100 g/L)，以除去过多的铅。摇匀后将全部溶液及残渣转入500 mL容量瓶中，用水洗涤锥形瓶，洗液合并入容量瓶中，加水稀释至刻度。过滤，弃去初滤液 20mL，滤液供测定用。

A.4.3测定

A.4.3.1文件溶液配制

葡萄糖文件溶液：称取约 1 g (精确至0.0001g)经过 98 ℃~100 ℃ 干燥 2 h的D-无水葡萄糖，加水溶解后加入 5 mL盐酸，并以水定容至 1000 mL，计算葡萄糖文件溶液浓度Cs(mg/mL)。此溶液每毫升相当于约 1 mg葡萄糖。

A.4.3.2标定碱性酒石酸铜溶液

吸取5.00 mL碱性酒石酸铜甲液及5.00 mL碱性酒石酸铜乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃珠两粒，从滴定管滴加约9 mL葡萄糖文件溶液，控制在2 min内加热至沸，保持溶液呈沸腾状态，以每两秒一滴的速度继续滴加葡萄糖，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖文件溶液的总体积，同时做三份平行，得出平均消耗体积(Vs)，按式（1）计算每10 mL(甲、乙液各5 mL)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量m1(mg)

也可以按上述方法标定4 mL～20 mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)来适应试样中还原糖的浓度变化。

A.4.3.3试样溶液预测

吸取5.00 mL碱性酒石酸铜甲液及5.00 mL碱性酒石酸铜乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃珠两粒，控制在2 min内加热至沸，保持沸腾以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒一滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录试样溶液的消耗体积。当样液中葡萄糖浓度过高时，应适当稀释后再进行正式测定,使每次滴定消耗试样溶液的体积控制在与标定碱性酒石酸铜溶液时所消耗的葡萄糖文件溶液的体积相近，约在10 mL左右。

A.4.3.4试样溶液测定

吸取5.00 mL碱性酒石酸铜甲液及5.00 mL碱性酒石酸铜乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃珠两粒，从滴定管滴加比预测体积少1 mL的试样溶液至锥形瓶中，使在2min内加热至沸，

保持沸腾状态继续以每两秒一滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。同法平行操作三份，得出平均消耗体积(V1)。结果按式(2)计算。

当浓度过低时，则采取直接加入10.00 mL样品液，免去加水10 mL，再用葡萄糖文件溶液滴定mL样液中所至终点，记录消耗的体积(V2)与标定时消耗的葡萄糖文件溶液体积(Vs)之差相当于10 含葡萄糖的量m2(mg)。结果按式(3)、式(4)计算。

A.4.3.5试剂空白测定

同时用水代替试样进行相同的制备，做试剂空白试验。按A.4.3.4中浓度过低时的方式测定，即：用葡萄糖文件溶液滴定试剂空白溶液至终点，记录消耗的体积(V0)与标定时消耗的葡萄糖文件溶液体积(Vs)之差相当于10 mL样液中所含葡萄糖的量m0(mg)。按式(5)、式(6)计算试剂空白中葡萄糖的含量。。

A.5分析结果的表述

A.5.1 10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)相当于葡萄糖的质量按式(1)计算

m1 = Cs× Vs

式中:

…………………………(1)

m1 ——— 10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)相当于葡萄糖的质量，单位为毫克(mg)；

Cs ——— 葡萄糖文件溶液浓度(mg/mL)；

Vs ——— 标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖文件溶液的体积，单位为毫升(mL)；

A.5.2 试样中葡萄糖含量按式(2)计算:

X1=500m1V1 …………………………(2)

式中:

X1 ——— 所称试样中葡萄糖的量，单位为毫克(mg)；

m1 ——— 10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)相当于葡萄糖的质量，单位为毫克(mg)；500 ——— 样品定容体积(mL)；

V1 ——— 测定时平均消耗试样溶液体积，单位为毫升(mL)；

A.5.3 当试样中淀粉浓度过低时葡萄糖含量按式(3)、式(4)进行计算:

X2=500m210 …………………………(3)

V2

m2=m1×1−Vs

…………………………(4)

式中:

X2 ———所称试样中葡萄糖的质量，单位为毫克(mg)；

m2 ———标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖文件溶液的体积与加入

试

样后消耗的葡萄糖文件溶液体积之差相当于葡萄糖的质量，单位为毫克(mg)；

500———样品定容体积(mL)； 10 ———直接加入的试样体积(mL)；

m1 ———10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)相当于葡萄糖的质量，单位为毫克(mg)；

V2 ———加入试样后消耗的葡萄糖文件溶液体积，单位为毫升(mL)；

Vs ———标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖文件溶液的体积，单位为

毫升(mL)。

A.5.4试剂空白值按式(5)、式(6)计算:

X0=500mo10 …………………………(5)

V0m0=m1×1−Vs …………………………(6)

式中:

X0 ———试剂空白值，单位为毫克(mg)；

m0 ———标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖文件溶液的体积与加入空

白后消耗的葡萄糖文件溶液体积之差相当于葡萄糖的质量，单位为毫克(mg)；

500———样品定容体积(mL)； 10 ———直接加入的试样体积(mL)；

V0 ———加入空白试样后消耗的葡萄糖文件溶液体积，单位为毫升(mL)；

Vs ———标定10mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)时消耗的葡萄糖文件溶液的体积，单位为

毫升(mL)。

A.5.5试样中淀粉的含量按式(7)进行计算:

X=(X1−X0)×0.9×100 或 X=(X2−X0)×0.9×100 …………………………(7)

m×1000m×1000式中:

X ———试样中淀粉的含量，单位为克每百克(g/100g)； X1 、X2 ——— 所称试样中葡萄糖的量，单位为毫克(mg)； X0 ———试剂空白值，单位为毫克(mg) 0.9———葡萄糖折算成淀粉的换算系数；

m ———称取试样质量，单位为克(g)；

结果保留三位有效数字。

A.5.6精密度

在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 。