转化:在基因克隆技术中,是特指经将外源DNA分子(质粒DNA或以它为载体构建的重组子)导入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
液相杂交:参加反应的两条核酸链(指使变性的待测核酸单链与放射笥核素标记的已知的核酸单链--探针)都游离在溶液中(保温),形成杂交复合物。
延伸:Extension是指变性退火引物与模板DNA结合后,在适当的条件下(温度一般为70-75℃),以四种dNTP为材料,通过DNA聚合酶的作用,单核苷酸从引物的3'末端掺入,沿模板按引物5'-3'方向不断延伸合成新股DNA链。
退火:模板DNA与人工合成的一对引物在适合的温度下分别与变性后的模板DNA在需要扩增区域的两翼进行准确互补配对结合而形成双链螺旋结构的过程。
探针:指一小段能与特定的靶发生特异性相互作用(互补配对)且能
被特殊的方法所探知的单链核酸序列。
固相杂交:solid-phasehybridization,是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物(如纤维素膜或尼龙滤膜)上,另一条反应核酸链则游离在溶液中的杂交。
感受态细胞:受体细胞经过一些特殊方法(如电击法、CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的细胞,这种细胞称为感受态细胞。分子诊断:又称DNA诊断或基因诊断,是通过从生物体(比如疾病患者等)内提取样本用基因检测方法来判断该生物体是否有基因异常或携带有其它不应该属于该生物体的生物成份。包被:即将抗原或抗体连接到固相载体上的过程。
Western印迹:是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体,并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之;其使用的探针是抗体,它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应;其作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。。
Vector:载体,把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的一种能自我复制的DNA分子。SerologicReaction:血清反应,指体外抗原抗体反应。因抗体主要存在于血清中,在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验,所以指体外抗原抗体反应亦称为血清反应。
RT-PCR:反转录PCR是指在反转录酶的作用下将mRNA反转录成cDNA,
然后再采用PCR对cDNA进行扩增和分析,从而实现对mRNA分析的方法。
Restriction:作用,细菌细胞分解外
源DNA,从而其在胞内存在的作用。
Probe:指一小段能与特定的靶发生特异性相互作用(互补配对)且能被特殊的方法所探知的单链核酸序列。
Precipitation:沉淀反应,可溶性抗原(血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液、各种微生物蛋白分子等)与相应抗体结合后,在一定条件下出现肉眼可见的沉淀,此为沉淀反应。
PolymeraseChainReaction:PCR,聚合酶链式反应,又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是1985年由Mullis等人创立的一种在引物指导下由酶催化的对特定克隆或基因组DNA序列进行的体外扩增反应。
PlateauEffect:平台效应,PCR反应中,靶DNA片段的扩增最初表现为直线上升,随着靶DNA片段的逐渐积累,当引物:模板:DNA:聚合酶达到一定比值时,酶的促化反应趋于饱和,此时靶DNA产物浓度不再增加,即出现所谓平台效应。
Plasmid:质粒,一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,以超螺旋状态存在于宿主细胞中。
NucleicAcidsHybridization:核酸分子杂交,是指不同来源的两条核酸单链,由于具有一定同源序列,在一定条件下按碱基互补配原则形成异质双链的过程;核酸分子杂交和核酸复性的机理是一致,它是分子生物学领域中应用最为广泛的技术之一,具有灵敏度高、特异性强等优点。
Modification:修饰作用,在甲基化酶的作用下,内源DNA的碱基被甲基化的过程称为修饰作用。
Incubation:温育,抗原抗体完成反应的保温过程。
HI:血凝抑制,先将可溶性抗原与特异性抑制血球凝集的血清(抗体)混合,隔一定时间后加入“致敏红细胞红”(细胞表面吸附可溶性抗原),则不再与相应抗体发生凝集现象的过程。
HA:血凝素,是由3条糖基化多肽分子以非共价形式聚合而成的三聚体,其C末端有一疏水区插入病毒囊膜的双层脂质膜中,是与病毒囊膜的结合部位。
GeneChip:基因芯片又称DNA芯片、生物芯片,在一张固相支持介质上同时固定成百上千个核酸片段,再将扩增的核酸样品与之杂交,反应结果用同位素法、化学荧光法、化学发光法或酶标法显示,然后用精密的扫描仪或CCD摄像技术记录,通过计算机软件分析,综合成可读的总信息,是集成化的核酸分子杂交技术。
Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay:酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记,底物被酶催化成有色物质,产物的量与样本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或
定量分析的免疫测定法。
Blotting:印迹,就是将电泳分离后的琼脂糖凝胶中核酸片段转移到尼龙膜或纤维素膜上的过程,
转移后核酸片段保持相对位置不变。
Blocking:封闭,是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。
Agglutination:凝集反应,细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后,在一定条件下出现肉眼可见的凝集物的过程。Avidity:亲合力,抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度Affinity:亲和力,抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间相适应而存在着的引力,是抗原抗体间固有的结合力。
实验一桔小实蝇DNA的提取
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