动物营养学报2011,23(3):387-394 Chinese Journal ofAnimal Nutrition doi:10.3969/j.issn.1006-267x.2011.03.006 应用体外产气与体外消化法评定不同生育期 豆科牧草营养价值 张桂杰 王红梅。 罗海玲 张英俊 王海 朱虹 孟慧 (1.中国农业大学动物科技学院,动物营养学国家重点实验室,北京100193;2.中国农业大学草地研究所,北京100193 3.宁夏大学农学院,银川750021) 摘要:本试验旨在探讨华北农牧交错带紫花苜蓿、棘豆、草木樨和野豌豆4种主要豆科牧草 不同生育期营养价值变化规律。利用常规化学成分分析、体外消化技术和体外发酵产气技术测 定4种豆科牧草盛花期和结实期的主要营养成分、体外消化率和瘤胃微生物体外发酵产气量。 结果表明:开花期草木樨、紫花苜蓿的粗蛋白质含量差异不显著(P>0.05),与棘豆和野豌豆相 比差异显著(P<0.05),野豌豆与棘豆粗蛋白质含量差异显著(P<0.05),棘豆、紫花苜蓿、草木 樨、野豌豆的粗蛋白质含量随生育期延长而下降,差异极显著(P<0.01);结实期与开花期相 比,中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的含量有增长趋势(P>0.05),4种牧草的干物质体外消化率 (DMD)、中性洗涤纤维体外消化率(NDFD)、酸性洗涤纤维体外消化率(ADFD)呈下降趋势 (P>0.05);棘豆、紫花苜蓿结实期和开花期的24 h产气量差异显著(P<0.05),只有棘豆2个 生育期的48 h产气量差异显著(P<0.05),4种牧草2个生育期的理论最大产气量差异不显著 (P>0.05),4种豆科牧草结实期的延滞期相比开花期有增长趋势(P>0.05)。综上所述,本研 究所选4种豆科牧草结实期营养价值低于开花期。 关键词:豆科牧草;生育期;营养价值;体外产气法;体外消化率 中图分类号:¥816.15 文献标识码:A 文章编号:1006-267X(2011)03-0387-08 气法操作方法易掌握,测定数据重复性好,较真实 地模拟饲料在瘤胃内的消化状况,可得到更多有 用的营养参数,近年来已被广泛应用 。。 。有报 牧草作为反刍家畜的主要饲料来源,在畜牧 业中的地位十分重要。牧草的营养特性决定了其 在反刍家畜中的应用地位。研究表明,同种牧草 在不同的生育期,其粗蛋白质(cP)、中性洗涤纤 维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)等营养物质在茎 叶之间的转移与分配均不断发生着变化,从而导 道指出,在采食量不变的情况下,牧草生长每增加 1 d,干物质消化率下降0.5个百分点¨ 。Cleale 等_1刮研究混播多年生牧草成熟阶段对消化率的影 响,结果发现,成熟期每增加21 d,牧草消化率降 致植株整体饲用价值和利用率的巨大改变 。目 前关于反刍动物饲草料营养价值评定有体内法( vivo)、半体内法(in situ)和体外法(in vitro)等方 法 一 。体外产气法最早是由Menke等 提出, 其理论依据是饲料样品在瘤胃液中培养24 h后其 低10个百分点(与每天降低0.5个百分点一致), 导致每天必须增加0.8个百分点的谷物来满足动 物能量需求。张晓庆等¨ 采用此法测定了不同品 种不同生育期苜蓿的体外干物质(DM)和有机物 CO,和甲烷产气量与体内消化率测定值之间存在 很高的相关性,与体内法、半体内法相比,体外产 收稿日期:2010—09—0l (OM)消化率,并探讨了消化率与营养成分和生长 期之间的互动关系,表明苜蓿的营养价值和消化 基金项目:农业部公益性行业科技(200903060);国家高技术研究发展计划(2OO7AAlOz233) 作者简介:张桂杰(1983一),男,山东宁津人,博士研究生,主要从事动物营养与饲料科学研究。E-mail:Gjzhangcau@yahoo.cn }通讯作者:罗海玲,教授,博士生导师,E。mail:Luohailing@call・edu・c“;张英俊,教授,博士生导师,E。mail:Zhan gyj@。 ・edu.cn 动物营养学报 率随着其生育期的推移显著下降,且苜蓿体外DM 和OM消化率与CP和ADF含量分别呈强正、负 相关。在我国北方农牧交错带内,种植业和草地 1.3.2 DMD、NDFD和ADFD的测定 按Tilly等 的2阶段法进行。首先在厌氧条 件下,用瘤胃液的稀释液(瘤胃液:缓冲液= 1:2)消化定量的样品48 h,然后用胃蛋白酶在 畜牧业在空间上交错分布,时间上相互重叠¨圳,豆 科牧草在草地畜牧业中扮演着非常重要的角色。 豆科牧草是反刍动物优质的蛋白质饲料,生育期 对豆科牧草的CP、粗纤维(CF)含量等指标有重要 的影响,但关于农牧交错带内豆科牧草不同生育 酸性条件下再消化48 h。瘤胃液采自饲喂精粗比 为40:60试验饲粮的安装有永久性瘤胃瘘管的 西门塔尔×冀南杂交l代阉牛。 1.3.3体外发酵产气量的测定 期营养价值的变化规律鲜有报道。本文以华北农 按Menke等 的方法进行。在39℃厌氧条 牧交错带不同生育期常见豆科牧草的CP、NDF、 ADF、干物质体外消化率(DMD)、中性洗涤纤维 体外消化率(NDFD)、酸性洗涤纤维体外消化率 (ADFD)、体外产气动态参数等指标为研究内容, 探讨豆科牧草开花期和结实期的营养价值变化规 律 1材料与方法 1.1牧草样品采集地概况 河北沽源草地生态系统国家野外科学观测研 究站位于华北农牧交错带的河北省北部沽源坝 上,该农牧交错带是内蒙古典型草原东南舌状延 伸地带,处于半干旱季风气候带,除夏季东南 暖湿气流的影响外,较长时间受蒙古高压寒冷干 旱气候的控制,年平均气温1℃,1月份平均气温 一18.6℃,7月份平均气温17.6℃,≥10 oC积温 l 513.1℃,无霜期85 d,年平均降水量 430.7 mm,主要集中于7 月份,占全年降水量 的79%,年蒸发量1 735.7 mm。 1.2试验材料 棘豆(Oxytropis glabra DC)、野豌豆(Vicia sepium Linn)、草木樨(Melilotus oifcinalis Pal1)和 紫花苜蓿(Medicago sativa Linn)样品采集于河北 沽源国家草地生态系统野外观测研究站,于2007 年7月4一l0日采集棘豆、野豌豆、草木樨和紫花 苜蓿盛花期样品,8月1一l0日采集4种牧草绿熟 期和黄熟前期样品,混合后置于取样袋中,65℃烘 干48 h,称测各样品的鲜重和DM含量,粉碎过筛 (1 mm),按四分法取样。 1.3试验方法 1.3.1营养成分测定 牧草DM、CP、NDF和ADF含量按常规方法 测定¨ 。半纤维素(HC,%):NDF—ADF,中性 洗涤可溶物(NDS,%)=100一NDF。 件下,将200 mg待测样品于物质放人特制的 100 mL玻璃注射器(德国制造)中,用30 mL经稀 释后的瘤胃液消化,记录72 h内25个时间点的产 气量。每个样品设3个重复。 采用模型Y=B[1一e ¨ 卵 ]计算动态消化 产气参数。 式中:Y为t时间点200 mg底物DM的产气量 (mL),B为200 mg底物DM理论最大产气量 (mL),C为样本的产气速度(h ),t为体外培养 时间(h),lag为产气延滞期(h)。 1.3.4统计分析 采用SAS统计分析软件中的广义线性模型 (GEM)进行单因子方差分析和Duncan氏多重比 较E21] 2 结 果 2.1 主要豆科牧草不同生育期营养成分的分析 本试验所测定的不同生育期豆科牧草主要营 养成分如表l所示。开花期草木樨、紫花苜蓿CP 含量差异不显著(P>0.05),与另外2种牧草差异 显著(P<0.05),野豌豆与棘豆CP含量差异显著 (P<0.05),棘豆开花期的CP含量最低。结实期 与开花期相比,豆科牧草CP的含量极显著下降(P <0.01),本试验的4种豆科牧草,棘豆、紫花苜 蓿、草木樨、野豌豆开花期与结实期的CP含量差 异极显著(P<0.01),草木樨CP含量下降了9.16 个百分点。 结实期与开花期相比,草木樨NDF的含量差 异极显著(P<0.01),其他3种牧草的NDF的含 量有增长的趋势,但不同生育期内差异不显著 (P>0.05)。与开花期相比,结实期草木樨NDF的 含量增加了17.73%,远远高于其他3种牧草的增 幅。ADF的增幅在不同种类间也不同,草木樨的 ADF含量在2个生育期内差异极显著(P< 3期 张桂杰等:应用体外产气与体外消化法评定不同生育期豆科牧草营养价值 0.01),紫花苜蓿的ADF含量在2个生育期内差 异显著(P<0.05),野豌豆和棘豆的ADF含量随 着生育期延长也有增长的趋势,但差异不显著 (P>0.05)。 表1 不同生育期豆科牧草营养成分含量 Table l Nutrient contents of leguminous forages in different growing periods % 同列数据相同字母者表示差异不显著(P>0.05),相邻字母者表示差异显著(P<0.05),相隔字母者表示差异极显著 (P<0.01)。下表同。 In the same column,values with the same letter superscripts mean no signiifcant difference(P>0.05),wiht adjacent letter superscripts mean signiifcant difference(P<0.05),and wih steparate letter superscripts mean extremely significant difference (P<0.01).The same as below. 2.2 不同生育期豆科牧草体外消化率的变化 规律 理论最大产气量显著不差异(P>0.05)。从延滞 期可以看出各种牧草在体内的利用难易程度,结 实期草木樨延滞期最长,其次为结实期野豌豆。 产气动态曲线显示,在培养开始阶段(0~ l6 h),气体增加速度剧烈。随着发酵的进行,豆 科牧草开花期的产气量增长较结实期速度快,草 木樨尤为明显。在发酵0~8 h这段时间内,苜蓿 和草木樨开花期与结实期的产气动态曲线基本吻 合,但是8 h后,开花期的产气动态曲线在结实期 之上,棘豆的这一趋势更明显,从发酵开始,开花 期产气曲线就在结实期之上。野豌豆产气曲线与 由表2可知,棘豆和草木樨结实期DMD显著 低于开花期(P<0.05),草木樨、野豌豆、紫花苜蓿 的NDFD在2个生育期内差异显著(P<0.05),棘 豆的NDFD、ADFD和草木樨的ADFD在2个生育 期内差异不显著(P>0.05),紫花苜蓿与野豌豆的 ADFD在2个生育期内差异显著(P<0.05)。 2.3不同生育期豆科牧草体外产气动态参数的 变化规律 豆科牧草开花期和结实期的体外产气动态参 数如表3和图l所示,棘豆、紫花苜蓿2个生育期 的24 h产气量差异显著(P<0.05),随着发酵的 其他牧草不同,0~8 h结实期产气动态曲线在开 花期之上,而8 h后,结实期的产气曲线在开花期 之下 延续,只有棘豆2个生育期的48 h产气量差异显 著(P<0.05)。4种豆科牧草开花期和结实期的 390 动物营养学报 23卷 表3不同生育期豆科牧草体外阶段产气量和产气动态参数 3期 张桂杰等:应用体外产气与体外消化法评定不同生育期豆科牧草营养价值 391 J山,善 兀p。Jd%0栅 厂IuI/u0 弓0Jd∞S嘟 鲫 m 5 0 一棘豆结实期 Seeding stage of 硒 三Ⅲ5 0 lo) trop拈glabra DC 一棘豆开花期 Flowening stage of o) tr0pis glabra DC 8 l6 24 32 40 48 56 64 72 发酵时间Fermentation time/h 发酵时问Fermentation time/h 草木樨结实期 Seeding stage of Melilotus si,la ̄eole" ledeb 十草木樨开花期 Flowening stage of Melilotus suaveolen /edeb Lu/LI。专弓2ds日0蜘 ∞ 三m 5 Iuv舌 np0Jds日0卿 发酵时间Fermentation time/h Ⅱ 8 l6 24 32 40 48 56 64 72 发酵时间Fermentation time/h 图1瘤胃微生物对不同生育期豆科牧草体外发酵产气量动态变化的影响 Fig.1 Effects of lumen microflora on the dynamic characteristics of in vitro gas production for the leguminous forages in diferent growing periods 含量有增长趋势,草木樨的NDF和ADF在2个生 3讨影响 论 育期内差异极显著(P<0.01),且增幅明显高于其 他3种豆科牧草,紫花苜蓿的NDF和ADF在2个 生育期内差异显著(P<0.05),野豌豆和棘豆的 NDF和ADF随着生育期延长也有增长趋势,但显 3.1生育期对豆科牧草营养成分与体外消化率的 豆科牧草由于营养生长期茎叶比例小,CP含量 高,随着现蕾期出现,叶片逐渐老化,茎叶比增加,细 著不差异(P>0.05)。豆科牧草ADF含量显著低 胞壁成分增加,细胞内容物逐渐减少,株丛中的木质 素和结构性支撑物质增加,使得CP迅速下降,纤维 含量增加 J。豆科牧草CP含量随生育期的延长而 下降,表现为牧草在生长过程中蛋白质沉积的速度 逐渐变慢,而其他物质沉积增加,这样虽然蛋白质的 绝对量不会减少,但是相对于整个植株的营养成分 于其他科牧草,但随着季节的推移,ADF含量都呈 增加趋势 J。串叶松香草的ADF和NDF的含量 随生育期的延长而逐渐增加 。据报道,豆科牧草 在初花期后,每推迟l d刈割,其营养价值下降1% 以上…,其原因是牧草NDF含量受植株成熟度、收 获期以及牧草种类的影响,随着生育期的延长,牧草 NDF、ADF、木质素含量上升。 而言,其所占比例却处于不断下降之中 J。有研 究报道,高寒草甸豆科牧草的CP平均含量高于其 他牧草,各牧草6月份CP含量高,随着时间的推 豆科牧草的种类是影响体外消化率的主要因 素,开花期草木樨、紫花苜蓿的DMD都在68%左 右,而在结实期草木樨DMD比紫花苜蓿降低了8 移,CP含量随之下降 。亦有研究表明,串叶松香 草随着生育期的推移,CP含量逐渐降低 。本试 验的4种豆科牧草开花期与结实期的CP含量差异 极显著(P<0.01),呈下降趋势。 不同种类豆科牧草在不同生育期NDF和ADF 的变化规律不同 ]。本研究表明,不同种类豆科牧 个百分点,说明草木樨随着生育期的延长营养价值 下降较快,故对于草木樨应该在较早的生育期利用。 对于牧草干物质体外消化率的报道很多,研究 一致认为随着生育期的延长,牧草DMD会下降。 有研究表明,随着生育期的后移,串叶松香草各营养 草存在差异,相比开花期,结实期的NDF和NDF的 成分的降解率逐渐降低,其中CP降解率较高,ADF 动物营养学报 23卷 的降解率最低,各营养成分的降解率与牧草中CP 的含量成正比,与NDF、ADF的含量成反比,不同生 育期DM、OM降解率变化规律一致 。本试验结 果与以上研究相似,不同生育期豆科牧草的DMD、 NDFD、ADFD呈下降趋势,其中棘豆和草木樨的下 降明显,结实期牧草DMD显著低于开花期(P< 0.05)。这是因为随着时间的推移,可溶性的非结 构性碳水化合物和易溶的纤维性物质含量随之减 少,而难溶的结构性碳水化合物及木质素含量相对 相关,与CP含量呈正相关。本研究结果表明,理论 最大产气量与NDF、ADF和HC含量呈负相关,而 与CP含量呈正相关。 对体外发酵产气延滞时间和产气速率常数进行 比较分析表明,高含量的ADF及NDF会降低微生 物对豆科牧草的降解速率 ,从而延缓发酵的启 动,而当牧草中非结构性碳水化合物或易发酵物质 的含量较高时,微生物会利用降解产物迅速繁殖,从 而提高产气速率,加速发酵的启动。 增加,导致消化率降低 。 3.2 生育期对豆科牧草体外产气的影响 本试验中,结实期豆科牧草在体内发酵的延滞 期都长于开花期,表明开花期的豆科牧草在体内更 容易利用。延滞期随生育期的延长而增长,与植物 细胞壁在整个生命周期中的生理特点有关,初生细 胞壁分化成熟形成厚而硬的次生细胞壁,构成初生 壁的主要物质有易溶的纤维素、HC和果胶等,而构 成次生壁的物质以纤维素为主,且含有木质素等其 他物质 ]。 从产气曲线可以看出,开花期豆科牧草的营养 价值优于结实期,这是由于随着生育期的延长,易溶 的非结构性碳水化合物含量下降,不溶的结构性碳 水化物含量上升,而不溶的结构性碳水化合物很难 被动物利用。有关燕麦秸秆产气特性的研究发现, 12、24、48 h产气量及产气速率与NDF和ADF含量 呈显著负相关;发酵延滞时间则与NDF含量呈显著 正相关,说明燕麦秸秆中的NDF含量对燕麦秸秆发 酵产气特性产生影响 引。关于高山植物饲用潜力 的研究表明,不同牧草品种的体外发酵产气特性存 在较大差异,且CP与产气量没有显著相关性,所测 饲草中CP对产气量的影响不大_2 。Cone等_3叫对 酪蛋白和淀粉的体外发酵研究发现,蛋白质发酵 72 hA的产气量仅为碳水化合物的30%。NDS中 的成分主要包括蛋白质、脂肪、无氮浸出物(糖类、 淀粉和果胶)和部分矿物元素等物质,从NDS中除 去CP及矿物元素后,剩余成分主要是非结构性碳 水化合物。高巍等 对苜蓿干草的体外发酵研究 表明,苜蓿干草NDS产气量占饲草累积产气量的绝 大部分。综上所述,非结构性碳水化合物与结构性 碳水化合物共同对饲草料的产气量起调节作用。 从理论最大产气量与营养成分的关系来看, Nsahlai等 对豆科田菁属牧草的研究发现,理论 最大产气量与NDF、木质素和HC的含量呈显著负 关于产气量与干物质降解率的关系,Bonsi 等 副利用产气法评价不同添加成分(棉籽饼、田菁、 银合欢)的饲草料时发现,产气量与动物体内DM 降解率之间存在正相关关系。产气量可以很好地反 映样品DM降解率。本研究结果表明,4种豆科牧 草在开花期产气量均高于结实期,此时的牧草DM 降解率较高,饲用价值较高;4种豆科牧草产气速率 在开花期也均高于结实期,说明在该阶段植株本身 木质化程度低,较易被动物的瘤胃液消化。 4结论 ①结实期与开花期相比,本试验所选豆科牧草 CP的含量降低,而NDF、ADF的含量具有升高的 趋势。 ②与开花期相比,结实期的DMD、NDFD、AD. FD都下降,各产气动态参数也随之下降。 ③化学成分常规分析、体外产气试验和体外消 化试验结果表明,结实期棘豆、野豌豆、草木樨和紫 花苜蓿的营养价值低于开花期。 参考文献: [1]杨恩忠,蒋瑞芬,陈容.牧草营养物质及消化动态的 研究[J].中国草地,1987,6:36—39. [2]GARCIA—RODRIGUEZ A, MANDALUNIZ N, FLORES G,et a1.A gas production technique as a tool tO predict organic matter digestibility of grasslnad maize silage[J].Animal Feed Science and Technolo— gY,2005,123:267—276. [3] MARTI'NEZ M E,RANILLA M J,TEJIDO M L,et ia.The effect of the diet fed to donor sheep on/n vitro methane production and ruminal fermentation of diets of variable composiiton『J 1.Animal Feed Science and Technology,2010,158:126—135. [4] OSORO K,MATEOS S A,FRUTOS P,et ai.Ant— helmintic and nutritional effects of heather supplemen— 3期 张桂杰等:应用体外产气与体外消化法评定不同生育期豆科牧草营养价值 393 tation on Cashmere goats grazing perennial ryegrass— 体外消化率动态研究[J].草业科学,2005,12:48— 51. white clover pasture[J].Journal of Animal Science, 2007,85:861—870. [18] 程序.农牧交错带研究中的现代生态学前沿问题 [J].资源科学,1999,21:1—9. [19] 张丽英.饲料分析及饲料质量检测技术[M].北京: 中国农业大学出版社,2003. 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In conclusion,the nutritional values of the leguminous forages involved in this study at the seeding stage are low— er than hoste at the flowering stage.[Chinese Journal ofAnimal Nutrition,2011,23(3):387-394] Key words:leguminous forage;growing period;nutritional value;in vitro gas production;in vitro digestibility Corresponding author,LUO Haiifng,professor,E—mail:Luohailing@cau.edu.ca;ZHANG Yingjun,professor,E—mail:Zhangyj@cau.edu.en (编辑尚彬如)