作 业 指 导 书 公共场所毛巾、床上卧具微生物 检验方法大肠菌群测定操作规程 编号：ZQCDC/ZY02 第1页 共1页 第1次修订 实施日期：2011年5月1日 1、目的 依据GB/T18204.2—2000公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定，熟练掌握此规程，保证检验结果的准确性。 2、适用范围 本标准规定了公共场所公用毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。 3、责任 使操作者熟悉此规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。 4、内容： 4.1定义：大肠菌群 指一群在37℃、24h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 该菌主要来源于人畜粪便，故以次作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫生质量。 4.2 仪器：见GB/T 18204.3—2000中第3章。 4.3 培养基和试剂：见GB/T 18204.3—2000中第4章。 4.4 检验程序：见GB/T 18204.3—2000中第5章。 4.5 操作步骤 4.5.1 采样方法 4.5.1.1 随机法：随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。 4.5.1.2 涂抹法：用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。 4.5.1.3 纸片法：用灭菌生理盐水湿润5cm×5cm大肠菌群快速测定纸片两张，分别贴在毛巾、床上卧具规定部位和面积范围内，约30s后取下，置于无菌塑料袋内。 4.5.2 检验方法 4.5.2.1 发酵法 4.5.2.1.1 用测定细菌总数剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36℃±1℃培养箱内培养24h。 4.5.2.1.2 观察是否产算、产气，若有变黄和气体产生，该管推测是检验阳性。如不产酸、产气则为大肠菌群阴性。 4.5.2.1.3 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃培养箱培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。 4.5.2.1.4 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行染色镜检； 同时接种乳糖发酵管，只36℃±1℃培养24h。 4.5.3 纸片法 将已采样的纸片置36℃±1℃培养箱内培养16～18 h，观察结果。 4.6 结果报告 见GB/T18204.3—2000中第7章。 编号：ZQCDC/ZY03 作 业 指 导 书 第1页 共2 页 第1次修订 公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物 实施日期：2011年5月1日 检验方法细菌总数测定操作规程 1、目的： 公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方法细菌总数测定。 2、适用范围： 本标准适用于公共场所浴盆、脸（脚）盆细菌总数的测定。 3、责任： 使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。 4、内容 4.1定义 细菌总数：指公共场所浴盆、脸（脚）盆经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、PH值、需氧性质等），25cm2表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。 细菌总数可作为判定公共场所浴盆、脸（脚）盆被污染程度的标志，也可以为公共场所浴盆、脸（脚）盆消毒效果的判定和评价提供依据。 4.2仪器 见GB/T18204.1—2000中第四章 4.3培养基和试剂 4.3.1营养琼脂培养基 见GB/T18204.1—2000中4.1 4.3.2无菌生理盐水：分装125mL瓶供浴盆采样，50mL瓶供脸（脚）盆采样。 4.4采样 4.4.1采样必须在无菌操作下进行，采样用具应高压灭菌121℃20分钟。 4.4.2采样部位，选择在盆内侧壁二分之一至三分之一高度采样。 4.4.3采样布点，浴盆可在四壁及盆底呈梅花布点，脸（脚）盆可在相对两侧壁布点。 4.4.4采样方法 4.4.4.1涂抹法：用侵有无菌生理盐水的棉拭子在规格板（5 cm×5 cm）内来回均匀涂满整个方格，并随之转动棉试子，剪去手接触部位后，将涂抹浴盆的5个棉试子一并放入125mL生理盐水烧瓶中，涂抹脸（脚）盆的2个棉试子一并放入50ｍＬ生理盐水三角烧瓶中，充分振摇或在旋涡振荡器上振荡1 分钟，每毫升的菌浓度相当于1平方厘米的菌量。 4.4.4.2斑贴法：将5cm×5cm无菌滤纸片放入灭菌平皿中，注入灭菌生理盐水1mL片（吸满为止），以无菌操作将滤纸片贴到采样部位，1分钟后按序取下，将贴浴盆的5片滤纸一并放入125,mL生理盐1分钟，每毫升的菌尝试相当于1平方厘米的菌量。 4.5检验方法 4.5.1用1mL灭菌吸管吸取样品1mL,加到灭菌平皿内，同样再吸1mL加到 编号：ZQCDC/ZY03 作 业 指 导 书 第2页 共2 页 第1次修订 公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物 实施日期：2011年5月1日 检验方法细菌总数测定操作规程 一平皿内。 4.5.2如污染严重，可作10倍递增稀释，每递增稀释一次，换一支无菌吸客，每个稀释度接种两个平皿。 4.5.3稀释液移入平皿后，应及时将冷却至46℃的营养琼脂培养基（可放置46℃±1℃水浴保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48h. 4.6菌落计数方法 见GB/T18204.2—2000中第8章。 浴盆、脸（脚）的细菌数按式（1）计算： m=25k.n 式中：m—细菌总数，cfu/25㎡; k—稀释倍数； n—平均菌落数； 9 菌落计数的报告 见GB/T18204.2—2000中的第9章。 编号：ZQCDC/ZY04 作 业 指 导 书 第1页 共3页 公共场所茶具微生物检验方法细菌第1次修订 总数测定操作规程 实施日期：2011年5月1日 1、目的： 公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定。 2、适用范围： 本标准适用于公共场所茶具细菌总数的测定。 3、责任： 使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。 4、内容 4.1定义 细菌总数：指公用茶具经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、PH值、需氧性质等），1cm2表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。 细菌总数可作为判定公用茶具被污染程度的标志，也可以为公用茶具消毒效果的判定和评价提供了依据。 4.2仪器 高压蒸汽灭菌器。 干热灭菌箱。 培养箱：36℃±1℃。 冰箱。 电炉。 天平。 灭菌。 灭菌平皿：直径9cm. 灭菌刻度吸管：1mL,10mL 灭菌棉拭子。 灭菌剪刀。 放大镜。 PH计或精密PH试纸。 4.3培养基和试剂 4.3.1生理盐水 成分：氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000mL 制法：将氯化钠（ 8.5g）溶解于蒸馏水（1000mL）中，分装到试管内，每管10mL,121℃20min高压灭菌。 4.3.2营养琼脂 4.4检验程序 细菌总数检验程序如下： 作 业 指 导 书 公共场所茶具微生物检验方法 细菌总数测定操作规程 检样 振摇 编号：ZQCDC/ZY04 第2页 共3 页 第1次修订 实施日期：2011年5月1日 36℃±1℃ 各1ml加入二块菌平皿 48h 4.5 操作步骤 4.5.1 采样方法 4.5.1.1 随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。 2菌落计数 4.5.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具内、外缘，涂沫50cm，即1-1.5cm高处一圈（口唇接触处）。用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放入10ml生理盐水内，4h内送检。 4.5.2 检验方法 报告 4.5.2.1 将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。 4.5.2.2 以无菌操作，吸取2ml检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1ml。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1ml加到9ml灭菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。每个稀释度做两块平皿。 4.5.2.3 将已融化冷至45℃左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，并立即旋摇平皿。冷凝后放36℃±1℃培养基培养48h. 4.6 菌落计数方法 作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查为防遗漏，在记下平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数；若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。 实际公用茶具菌落数，按式（1）计算:a=b.n/50 式中：a—细菌总数，cfu/cm2 b—平均菌落数 c—稀释倍数。 4.7菌落计数的报告 4.7.1选择平均菌落在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告 编号：ZQCDC/ZY05 作 业 指 导 书 第1页 共2 页 第1次修订 公共场所毛巾、床上卧具微 实施日期：2011年5月1日 生物检验方法细菌总数测定 1、目的 依据GB/T18204.2—2000公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法大肠菌群测定，熟 练掌握此规程，保证检验结果的准确性。 2、运用范围 本标准规定了公共场所毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。 本标准规定了公共场所公用毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。 3、责任 使操作者熟悉此规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。 4、内容 4.1定义 细菌总数：指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、PH值、需氧性质等），25cm2表面上含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。 细菌总数可作为判定公用毛巾、床上卧具被污染程度的标志，检测细菌总数，公用毛巾、床上卧具消毒效果的判定和评价提供依据。 4.2仪器 见GB/T18204.2----2000中第4章 4.2.2培养基和试剂 见GB/T18204.2----2000中第5章 4.2.3检验程序 见GB/T18204.2—2000中第6章 4.3操作步骤 4.3.1采样方法 4.3.1.1随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具 4.3.1.2用灭菌生理盐水湿润棉试子，在毛巾、枕巾对折后两面的各面各 2.5cm2(5cm×5cm)面积范围；床单、被单在上下两部各25cm2面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉试子放入10mL生理盐水内，4h内送检。 4.3.2检验方法 4.3.2.1将放有棉试子的试管充分振摇。此液为1：10 4.3.2.2以无菌操作，吸取2mL检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1mL.如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1mL加到9mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。每个稀释度做两块平皿。 4.3.2.3将已融化冷至45℃左右的营养琼脂培养基倾入平皿，每皿约15mL,并立即旋摇平皿。冷凝后放入36℃±1℃培养箱培养48h. 编号：ZQCDC/ZY05 作 业 指 导 书 第2页 共2 页 第1次修订 公共场所毛巾、床上卧具微生物 实施日期：2011年5月1日 检验方法细菌总数测定 4.4菌落计数方法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数；若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。 公用毛巾、床上卧具细菌总数按公式（1）计算： m=k.n/2 式中：m---细菌总cfu/25cm2 k----稀释倍数； n----平均菌落数 4.5菌落数报告方式 见GB/T18204.2---2000中第9章 作 业 指 导 书
编号：ZQCDC／ZY02-05
公共场所微生物学检验操作规程
起草:东晓辉 2011年5月1日 审核:包图雅 2011年5月1日 批准:陈玉柱 2011年5月5日
