人血清白细胞介素6水平稳定性研究

文章编号：1673-8640（2019）02-0185-02 中图分类号：R446.1 文献标志码：B DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2019.02.021

人血清白细胞介素6水平稳定性研究

程云龙， 于　林， 李双法， 赵云霞（郑州安图生物实验室，河南 郑州 450016）

关键词：白细胞介素6；分析前变异；稳定性

白细胞介素6（interleukin 6，IL-6）是机体细胞因子网络中的重要成员，在健康人血清中的含量极低[1]，其不仅作用于免疫系统本身，亦广泛作用于神经、内分泌和心血管等系统。目前，IL-6检测已在临床实验室广泛开展。在检测分析过程中，样本的生物学变异（自然条件、年龄、性别和月经周期等）及分析前变异（血液采集、储存等）可能会对IL-6的检测结果造成一定的干扰。本研究拟探讨分析前变异对IL-6检测的影响，以便在进行检测前优化采血和储存程序。1　材料和方法1.1　研究对象

选取郑州市中心医院重症监护病房的术后患者5例（患者组），另选取郑州市中心医院健康志愿者（正常对照组）3名。将所有对象血液收集在3个10 mL和12个5 mL真空采血管中。1.2　IL-6稳定性测试方法

1.2.1　加速稳定性测试　将10 mL采血管中的血液在室温下凝结30 min，1 800×g离心25 min。将所有对象的血清汇集在50 mL无菌管中，并加入Proclin-300（终浓度为0.2%）混匀。随后分装在1.5 mL无菌一次性离心管中。将离心管放置在不同温度（4、20、30、40 ℃）下，在21 d内的等距时间点，从每个温度中取出1支-20 ℃冷冻。最后，将所有样本保存在-20 ℃直至检测。

1.2.2　凝血时间的影响　为了分析采血与离心之间的时间延迟及凝血温度的影响，将真空采血管进行处理：采血后立即将真空采血管放置于4 ℃和室温环境下，30 min后各取出1管，1 800×g离心25 min，立即收集血清并-20 ℃冷冻保存。在24、48和96 h时重复相同的步骤。

1.2.3　样本放置时间的影响　为了分析血液样本离心后血清与红细胞分离时间的影响，将真

作者简介：程云龙，男，1989年生，硕士，主要从事免疫学检验工作。

空采血管进行处理：采血后立即将真空采血管 1 800×g离心25 min，4 ℃静置，并于2、6、12、18 h吸出离心管内的血清，-20 ℃冷冻保存待测。1.2.4　反复冻融的影响　将血清样本6等分，- 20 ℃保存。取1份等分血清样本在室温下放置2 h解冻并再次冷冻，重复5次，一次分析对照和不同冻融级别的血清样本。1.3　IL-6检测

采用cobas e601全自动电化学发光免疫分析仪（瑞士罗氏公司）及配套试剂（电化学发光法）、质控品测定IL-6。该检测系统的分析间及分析内变异均<10 %。 1.4　统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析。呈正态分布的计量资料采用x±s表示，组间比较采用方差分析。计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。2　结果

2.1　IL-6的稳定性

在4、20和30 ℃条件下，血清IL-6水平21 d内保持相对稳定。但在40 ℃条件下，第14、18和21天的血清IL-6的平均回收率分别下降至90%、68%和64%（P<0.05）。见图1。

120回收率（%）10080604020

0

0 5 10 15 20 25

放置时间（d）注：◇4℃；□20℃；○30℃；△40℃

图1　不同温度下处理时间对血清IL-6水平稳定性的影响

·186·检验医学2019年2月第34卷第2期 Laboratory Medicine，February 2019，Vol. 34，No. 2

2.2　凝血时间的影响

与凝血时间为30 min的血清IL-6水平相比，凝血时间为24、48和96 h的血清IL-6水平均呈升高趋势。患者组血清IL-6水平的升高幅

度高于正常对照组，20 ℃时的升高幅度高于4 ℃。在凝血时间为96 h时，患者组20 ℃的血清IL-6水平升高幅度约为正常对照组4 ℃时的5倍。见表1。

凝血时间48 h521.56±63.25728.69±80.56862.55±102.261 002.30±124.91

表1　患者组与正常对照组不同凝血时间血清IL-6水平的变化率比较 （%，x±s）

组别正常对照组 4 ℃ 20 ℃患者组 4 ℃ 20 ℃

例数3

135.24±20.12

150.63±30.05

5

323.02±42.25382.24±32.28

3 213.77±360.415 014.25±591.241 222.72±156.251 589.26±203.28

24 h96 h注：以凝血时间为30 min的血清IL-6水平作为基线进行计算

2.3　样本放置时间的影响

与0 h比较，样本放置2、6 h时的血清IL-6水平差异均无统计学意义（P>0.05）；

受试者正常对照者1正常对照者2正常对照者3患者1患者2患者3患者4患者5

检测次数

33333333

0 h1.5±0.62.2±1.26.0±0.127.8±1.852.2±2.3101.8±12.3152.6±10.22 013.0±56.3

样本放置12 h、18 h时血清IL-6水平明显升高（P<0.05）；各受试者样本放置18 h时的血清IL-6水平升高2～3倍。见表2。

2 h1.6±0.62.1±0.46.2±0.125.3±2.055.6±3.5

6 h1.8±0.32.2±0.56.4±0.527.3±1.050.6±1.2102.3±10.2165.3±15.22 115.4±90.3

12 h1.9±0.4*3.0±0.2*7.4±0.5*30.5±1.2*60.3±4.1*150.2±7.5*201.3±13.4*3 211.5.0±110.2*

18 h4.0±0.1*5.3±0.6*16.6±1.2*53.0±3.6*78.6±5.2*235.6±12.5*502.5±20.5*5 362.2±120.5*

表2　样本放置不同时间对血清IL-6水平的影响 （pg/mL，x±s）

92.8±7.5158.6±9.82 010.0±78.0

注：与0 h比较，*P<0.05

2.4　反复冻融的影响

经过5次反复冻融后，样本回收率为101.5%。因此，反复冻融不影响IL-6的检测结果。3　讨论

IL-6在动脉粥样硬化、急性白血病和心力衰竭等多种疾病的免疫调节及疾病的诊断、预后判断中起重要作用[2-3]，因此临床对IL-6的检测愈加重视。本研究结果显示，用于IL-6测定的血清样本在-20 ℃下可以储存很长一段时间，反复冻融不会对IL-6的检测结果造成影响。这与文献报道基本相符[4-5]。本研究结果还显示，随着样本放置时间的不同，血清IL-6水平并非持续稳定，而是有一定的动态变化规律。血液样本离心后，IL-6水平在0～6 h内较稳定（P>0.05），随后其水平随放置时间的延长而升高（P<0.05），且升高幅度较大。建议在采血后及时离心分离血清，并在6 h内完成检测。测定后样本应及时冷冻保存，以备复查。

参考文献

[1]

中国医药教育协会感染疾病专业委员会. 感染相关生物标志物临床意义解读专家共识[J]. 中华结核和呼吸杂志，2017，40（4）：243-257.[2]

蒋小红. 心力衰竭合并肺部感染患者BNP、IL-6、PCT的变化及其与心功能的关系[J]. 检验医学，2015，30（11）：1125-1127.[3]

梁伟，杨晖，吴春芳，等. 不同调脂治疗方案对冠心病患者血脂和IL-6、TNF-α水平的影响[J]. 检验医学，2011，26（3）：193-197.[4]

KENIS G，TEUNISSEN C，DE JONGH R，et al. Stability of interleukin 6，soluble interleukin 6 receptor，interleukin 10 and CC16 in human serum[J]. Cytokine，2002，19（5）：228-235.[5]

FLOWER L，AHUJA R H，HUMPHRIES S E，et al. Effects of sample handling on the stability of interleukin 6，tumour necrosis factor-alpha and leptin[J]. Cytokine，2000，12（11）：1712-1716.

（收稿日期：2017-11-06）

（本文编辑：龚晓霖）