Co-IP实验步骤
一、 制备细胞样品
1. 10cm盘细胞用PBS清洗两次，加入1mL RIPA裂解液和10μL PMSF（100mM稀释至1mM）；
2. 充分混匀吹打后，冰上裂解4h，充分吹打吸入1.5mL EP管中，
-80℃保存；
3. 取出样品，1200rpm离心10min，取上清弃沉淀，测定蛋白浓度。
二、 Co-IP，拉出蛋白
1. 每管取出少量蛋白样（15~30μL）作为input；
2. 将磁珠充分混匀后，取出50μL于1.5mL EP管中，置于磁力架上，弃上清。（有几个样品就准备几管）；
3. 加入200μL Ab binding&washing Buffer（可用PBST代替），加入对应抗体，加入后轻弹混匀，360°混合仪上旋转30min；
4. 500rpm离心使管壁液体下来，弃上清，200μL PBS清洗（旋转5min）；
5. 加入1000μg 蛋白样品于EP管中，轻弹混匀，旋转1h，弃上清；
6. 加入200μL washing buffer（或PBST）清洗3次；
7. 加入100μL washing buffer 悬浮磁珠并将溶液转移至新的EP管中；
8. 弃上清，加入6μL 5×loading buffer，24μL Elution buffer（或 ddw，洗脱液）；
9. 100℃煮10min，吸取上清；
10. 进行WB或SDS-PAGE。
注意事项：
1. 标记：样品名+抗体名；
2. 抗体上必须标有“IP”字样，有推荐用量；
3. Co-IP中pull down 抗体与WB抗体的来源（M,R）必须不同；
4. PBST=PBS + 0.02% 吐温。
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