高效液相色谱法测定上清丸中绿原酸的含量

・１５９０・　￣ｕｍａｌ　０厂￣ｉｎｗａｌ　ａｎｄＥｘ￣ｍｅｎｔａｌＭｅｄｗｉｒ￣％ｆ．５，Ｎｏ．１０　Ｏｃｔ．２００６　高效液相色谱法测定上清丸中绿原酸的含量　赖怀恩（广东省宏兴集团股份有限公司　广东　潮州　５２１０１１）　上清丸是由菊花、自芷、连翘等１２味中药制成的中成药，具　积积分值ＲＳＤ＝０．９４％（ｎ＝５）。　有清热散风、解毒，通便之功效，用于治疗头晕耳鸣、目赤、口舌生　２．９加样回收率试验精密称取已知含量样品５份，分别加入　疮、牙龈肿痛、大便秘结。有效控制该产品的质量，对于保证其疗　对照品适量，混匀，按样品制备方法制备供试液，分别进样，记录　效有重要作用。菊花是处方中主要组分之一，能散风清热、平肝　色谱。见表１。　明目，用于风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花的治疗，与制　３样品测定结果（ｎ＝３）　见表２。　剂的疗效直接相关。因此，为更好地控制产品质量，本文对制剂　中菊花进行研究，采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定该制剂中菊　花中绿原酸的含量，方法简便快速准确…。　１仪器与试药　１．１仪器Ｌｃ一１０Ａｔｖｐ液相色谱泵Ｌｃ一１０Ａｔｖｐ液相色谱检测　图１供试液图谱图　器（日本岛津）Ｈｗ一２０００，型色谱工作站（千谱软件公司），　ＡＹ１２０电子天平（日本岛津），Ｃ５８６０超声波清洗脱气机（天津）。　１．２试药甲醇、氯仿、（甲醇为色谱纯，其他为分析纯）、重蒸馏　水，绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）、上　图２　菊花阳性对照液图谱图　清丸为广东省宏兴集团股份有限公司宏兴制药厂产品。　２实验方法　２．１　色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；０．１　ｍｏＬ／Ｌ　磷酸二氢钠缓冲液［取磷酸二氢钠（ＮａＨ　ＰＯ　・２Ｈ　Ｏ）１５．６　ｇ，加　水至１　０００　ｍｌ，制成０．１　ｍｏＬ／Ｌ的溶液，加入磷酸适量，使ｐＨ值为　图３对照液图谱　２．７］一甲醇（７０：３０）为流动相；检测波长为３２８　ｎｍ。　表１加样回收率试验　２．２对照液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶　中，加水制成每１　ｍｌ含０．１　ｍｇ的溶液，即得（１０℃以下保存）。　２．３供试液的制备本品约７　ｇ，精密称定，研细，置锥形瓶中，　精密加入甲醇５０　ｍｌ，称定重量，加热回流２　ｈ，冷却，再称定重量，　用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液１０　ｍｌ，蒸　干，残渣加氯仿５　ｒｎｌ，浸渍３　ｍｉｎ，弃去氯仿液，残渣挥去氯仿，加　水适量使溶解，并转移至５　ｍｌ量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孑Ｌ　滤膜（０．４５　ｍ）滤过，即得（应于当日测定）。　２．４阴性对照液的制备取按处方量及制备工艺要求制成不含　菊花的阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。　２．５菊花阳性对照液的制备按处方量及制备工艺要求制成只含　菊花的阳性对照品，按供试品溶液的制备方法制成阳性对照溶液。　４讨论　２．６空白试验按上述条件吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性　对照品和供试液在常温下仅能保证１０　ｈ内较稳定，如需保　对照溶液、菊花阳性对照溶液，分别注入液相色谱仪测定，从色谱　存时间较长，应置１０℃以下保存。本法具有回收率好，重现性　图可见，供试品溶液与菊花阳性、对照溶液的图谱（图１、２、３）较　好，处方中其他成分对测定没有干扰等优点，可以有效控制该制　一致，其他元素对绿原酸的测定无干扰，符合测定要求。　剂的质量。　２．７标准曲线制备精密吸取对照溶液２、４、６、８、１０　ｒｎｌ，分别置　参考文献　１０　ｍｌ量瓶中，加水至刻度，摇匀，分别吸取上述溶液各１０　，注　［１］国家药典委员会编．中华人民共和国药典［Ｓ］．北京：化学工业出版　入液相色谱仪，测定峰面积，并回归，得回归方程Ｙ＝８５０３２　Ｘ一　社，２０００：１５１—１５２，　２１９　ｒ＝０．９９９９。结果绿原酸在所试浓度３０—１５０　ｇ／ｍｌ范围内　［２］中华人民共和国卫生部药品标准，中药成方制剂［Ｓ］，卫药发　［１９９５］４９号．１６２—１６３．　与峰面积积分值呈良好的线性关系　Ｊ。　（收稿日期：２００６—０９—０１）　２．８精密度试验取同一供试品溶液，重复进样５次，测定峰面