小鼠总抗氧化能力的测定

刘小美 宋菊敏 （2006-10-24）

一、原理

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机体中有许多抗氧化物质，能使Fe3还原成Fe2，后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物，通过比色可测出其抗氧化能力的高低。

二、目的

1．掌握总抗氧化能力的测定方法。

2．观察血虚小鼠模型总抗氧化能力的变化。

3．观察中药对血虚小鼠模型总抗氧化能力的影响。 三、材料和方法

1．试剂：总抗氧化能力测定试剂盒（南京建成生物工程研究所） 2．材料：EF管（1.5ml） 120支，一次性试管（10ml）60支，移液器（P20ul、P100ul 、P1000ul）各2把及配套头各200支，玻璃比色皿（3ml，1cm光径）4只，温浴箱，分光光度计，漩涡混匀器1台，普通离心机大管、小管各1台，试剂瓶（125ml）1个，烧杯（150ml）2个，吸管（10ml）2支，吸球1支，量筒（200ml）1个，标签纸2张。

3．测定方法

（1）样本处理：取全血3500转/分离心15分钟得血清待测。 （2）试剂盒组成及配制：（50T） 试剂一：液体60ml×2瓶，40C保存。 试剂二：粉剂×2支，用时每支加双蒸水至120ml，室温保存。 试剂三：黄色贮备液10ml×1瓶，避光冷藏保存。贮备液得稀释液60ml×1瓶。

试剂三应用液的配制：临用前取贮备液以稀释液稀释，比例为1：19。需多少配制多少。

试剂四：溶液24ml×1瓶 试剂五：溶液24ml×1瓶，室温保存（天冷时会凝固，每次测试前适当加温以加速溶解，直至透明方可使用）。——测组织中总抗氧化能力时用到，测血清时不用。

（3）操作 单位：ml 试剂一 血清 试剂二 试剂三应用液 试剂四 蒸馏水 对照管 0.5 1.0 0.25 0.05 0.1 测定管 0.5 0.1 1.0 0.25 0.05 漩涡混匀器充分混匀，370C水浴30分钟。 漩涡混匀器充分混匀，室温放置10分钟，蒸馏水调零，1cm光径，520nm处

测各管吸光度。（370C时，每分钟每毫升血清使反应体系的吸光度（OD）值每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位）。 4）计算：

总抗氧化能力（单位/毫升血清）＝（测定管OD-对照管OD）÷0.01÷30×19 四、注意事项

1．室温放置10分钟后必须立即测定吸光度，否则吸光度会增加。 2．实验试剂用量较少，所以加量一定要仔细、准确。 3．每次加样后都必须在漩涡器上充分混匀。 4．难吸难打的试剂必须做到慢吸慢打。 五．思考题

1．小鼠血虚模型总抗氧化能力会出现什么样的变化？为什么会出现这样的变化？ 2．怎样用本实验的结果解释模型动物的某些主要症状？

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