第ｌ０期 黄广君，等：金银花有效成分绿原酸的提取工艺研究 ・９・ 金银花有效成分绿原酸的提取工艺研究 黄广君 ，梁锦添 ，蒋小－Ｘ－ （１．南宁学院机电与质量技术工程学院，广西南宁５３０２００；２．广西大学生命与科学技术学院，广西南宁５３０００４） 摘要：以广西产金银花为原料，对其有效成分绿原酸的提取工艺进行研究。采用酸醇回流提取法，探索不同条件下对金银花样品中绿原 酸提取率的影响因素。结果表明，单因素实验最佳提取条件：提取溶剂为８０％乙醇溶液，料液比为ｉ：３０，酸度为ｐＨ值＝５，提取时间为 １５０ｒａｉｎ；正交实验得出的最佳提取条件：提取溶剂为７０％乙醇溶液，料液比ｌ：３０，ｐＨ值为３，提取时间为１５０ｍｉｎ，按正交实验最佳提取条 件提取金银花样品中绿原酸，绿原酸提取率为８．１８％。 关键词：金银花绿原酸提取工艺 中图分类号：ＴＳ２０Ｉ．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８—０２１ｘ（２０１７）１０—０００９—０３ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ Ａｃｉｄ ａｓ Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ Ｓ Ａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｇｅｎｔ Ｈｕａｎｇ Ｇｕａｎｇｊｕｎ ，Ｌｉａｎｇ Ｊｉｎｔｉａｎ ，Ｊｉａｎｇ Ｘｉａｏｙｕｎ － （１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ—Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ａｎｄ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｎｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０２００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ Ｇｕａｎｇｘｉ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｅ ａｃｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｏｆ ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ ｗｅｒｅ ｅｘｐｌｏｒｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ａｃｉｄ ｒｅｆｌｕｘ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗｅｒｅ：ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｗａｓ ８０％ｅｔｈａｎｏｌ，ｒａｔｉｏ ｏｆ ｍａｔｅｒｉｌ ｔａｏ ｌｉｑｕｉｄ ｗａｓ １：３０，ｐＨ＝５，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｉｓ １５０ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗｅｒｅ：ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｗａｓ ７０％ｅｔｈａｎｏｌ，ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｍａｔｅｒｉａｌ ｗａｓ １：３０，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｗａｓ １５０ ｍｉｎ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ ８． １８％． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ；ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ；ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 金银花（Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ）成分复杂，主要含有有机酸、黄酮 类、三萜类、醇类、微量元素和挥发油等。近年来金银花的产品 ２结果与分析 ２．１ 金银花预处理 新鲜采集去杂后的金银花花蕾摊平于瓷盘中，置于６０￣Ｃ电 热鼓风干燥箱中恒温干燥２４ｈ至干。将烘干的金银花花蕾样 品于中草药粉碎机中粉碎，过８０目筛，样品装入磨口瓶中，４℃ 冰箱保存备用 。 质量以其含有的有效成分为主要指标，绿原酸（Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）作为金银花中药理活性最强的主要成分之一，使得对金银 花中绿原酸的研究已成为判定金银花产品质量的重要标准之 一 。根据药典规定 ，药用金银花中绿原酸的含量必须达 到１．５％，金银花的药用指标中绿原酸占据着重要的作用。本 实验对绿原酸的提取工艺进行了研究，采用酸醇回流提取法， ２．２酸醇回流法提取绿原酸 准确称取２．００ｇ金银花粉末样品，置于５００ｍＬ烧瓶中。加 入７０％的ＣＨ３ＣＨ２ＯＨ溶液４００ｍＬ，以１ｍｏＬ／Ｌ的Ｈ２ｓ０４溶液和 １０％ＮａＯＨ溶液在酸度计中调节ｐＨ值＝４．００（±０．０５）后，置于 探索不同条件下对金银花样品中绿原酸提取率的影响因素。 １ 实验材料 １．１ 材料与试剂 金银花（广西忻城县）；ＮａＯＨ、Ｈ２ＳＯ 、无水乙醇、ＫＣＬ等均 为分析纯。 １００℃水浴回流提取１２０ｍｉｎ，回流提取一次。提取结束后，待提 取液冷却至室温，布氏漏斗抽滤，弃滤渣，滤液于低速离心机 ５０００ｒ／ｒａｉｎ离心５ｒａｉｎ，收集滤液于１００ｍＬ容量瓶中，以７０％ １．２仪器与设备 超声波清洗机（ｓＢ一５２００Ｄ）；离心机（ＭＩＣＲＯＦＵＧＥ １６ ＣＨ ＣＨ：ＯＨ溶液定容，４￣Ｃ冰箱保藏待用０准确加入０．１ｍＬ提 取液于试管中，加入无水乙醇９．９ｍＬ于试管中，摇匀。于ＵＶ一 Ｃｅｎｔｉｒｆｕｇｅ）；电子分析天平（ＰＬ２００２）；紫外可见光分光光度计 （Ｕ Ｖ ２７ ０ ０）。 ２７００紫外分光光度计，２５０～５００ｎｍ波长范围内进行紫外光谱 扫描。扫描结果表明其最大吸收波长为３３０ｎｍ，与文献报道的 收稿日期：２０１７—０３—０７ 基金项目：南宁学院２０１３年度校级教授培育工程项目（２Ｏｌ３ＪＳＧＣ一７）；南宁学院２０１４年校级科研项目（２０１４ＸＪ１１）；南宁学院 教学质量与教学改革工程项目（２０１４ＸＪＺＤＺＹ０５） 作者简介：黄广君（１９８２一），硕士，讲师，研究方向：天然产物化学。 ・１０・ 山东化工 ＳＨＡＮＤ０ＮＧ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＩＮＤＵＳＴＲＹ ２０１７年第４６卷 最大吸收波长相符，即实验方法可行。紫外光谱谱图见图１。 图１ 提取液紫外光谱图 Ｆｉｇ．１ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔ 图２ 绿原酸标准溶液紫外光谱图 Ｆｉｇ．２ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ ｅｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ２．３ 绿原酸的定量方法 准确称取２．００ｒａｇ金银花标准品于小烧杯中，用无水乙醇 溶解，完全溶解后转移至５０ｍＬ容量瓶定容，即得到浓度为 ４０ｔ￣ｇ／ｍＬ的绿原酸标准对照溶液。准确吸取绿原酸标液３．５０， ４．Ｏ０，４．５０，５．Ｏ０，５．５０ｍＬ于ｌＯｍＬ容量瓶中，以无水乙醇定容， 即得ｌ４，１６，ｌ８，２（】，２２ ｇ／ｍＬ的标准工作液。设三组平行样， 以无水乙醇为参比液，取２０ｌｘｇ／ｍＬ标准工作液于ｕＶ一２７００紫 外分光光度计上２５０ｎｍ一５００ｎｍ波长范围内进行光谱扫描，扫 描结果显示其最大吸收波长为３３０ｎｍ，见图２。设定测定波长 为３３０．０ｎｍ，分别测定不同浓度的标准液吸光值，以绿原酸的浓 度Ｃ为横坐标，吸光值Ａ为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程 式为Ａ＝０．０５５９５～０．０６６０３，相关系数 ：０．０００２６。取２．２ 中的提取液各１ｍＬ，置于１．５ｍＬ ＥＰ管中，于１２０００ｒ／ｒａｉｎ离心 ５ｍｉｎ，精确吸取０．１ｍＬ于干燥试管中，准确加入９．９ｍＬ无水乙 醇，摇匀后，用无水乙醇为空白对照，在３３０ｎｍ波长下测吸光 值，每组提取液做三个平行样，取平均值计算绿原酸提取率。 绿原酸提取率的公式如下。 Ａ－ ０ ．０ ６６０３ ＿＿ｘ Ｖ ｘ Ｎ ｘ １０－ ＇ Ｗ＝ ： １０ｏ％ Ｍ×ｌ０ 式中：Ａ——金银花提取液中的吸光度；ｗ——金银花中绿原酸 的提取率，％；Ｖ——金银花提取液的体积，ｍＬ，；Ｎ——测吸光 度时滤液稀释倍数；Ｍ——金银花粉末的质量，ｇ。 ２．４单因素实验 ２．４．１ 乙醇浓度对金银花中绿原酸提取率的影响 ＼ 褂 鲻 蛹 乙醇浓度／％ 图３ 乙醇浓度对绿原酸提取率的影响 Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｅ ａｃｉｄ 锵 谣 骤 料液比 图４ 料液比对绿原酸提取率的影响 Ｆｉｇ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｔｏ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ 由图３可知，乙醇浓度在５０％一９０％范围内，随着乙醇浓 度增大，绿原酸提取率逐渐提高，在８０％时达最高，最高值为６． １９２％。在５０％～８０％之间金银花中绿原酸提取率随乙醇浓度 的增大而增大，可能是因为８０％乙醇浓度的极性更接近金银花 中绿原酸极性，使金银花中绿原酸得到较充分的释放，但是浓 度达到８０％之后，绿原酸的提取率反而降低，可能是因为高浓 度乙醇溶液使细胞内蛋白质凝固，绿原酸不易溶出而导致绿原 酸提取率下降，因此最佳乙醇提取浓度为８０％。 ２．４．２料液比对金银花中绿原酸提取率的影响 由图４可知，随着料液比的增大，绿原酸提取率逐渐提高， 料液比从１：１５到１：２０时绿原酸提取率的增长较快，可见提取 液的增加大大提高了传质速率，使得提取率明显增加；料液比 在１：２０之后，提取率增加速度明显变慢，这因为金银花中绿原 酸含量是一定的，当提取溶剂增加到一定程度的时候，金银花 中绿原酸提取的增长速度就会变慢；综合考虑，料液比选择１： ３０为宜。 ２．４．３提取时间对金银花中绿原酸提取率的影响 由图５可知，随着回流提取时间的增长，金银花中绿原酸 的提取率明显增加，而当时间大于１５０ｍｉｎ后，绿原酸的提取率 第ｌＯ期 黄广君，等：金银花有效成分绿原酸的提取工艺研究 表１（续） Ｔａｂｌｅｌ’Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ Ａｃｉｄ ｋ（３ ）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔａｂｌｅ 呈降低趋势，这是由于长时间加热致使绿原酸部分分解作用造 成的，可见，提取时间过长对绿原酸的提取不利，因此本实验中 最佳提取时间为１５０ｒａｉｎ。 ２．４．４ ｐＨ值对金银花中绿原酸提取率的影响 由图６可知，绿原酸的提取率具有不规律性，当提取溶液 的ｐＨ值向酸碱两个方向移动时，绿原酸的提取率提取率不断 减少，这是因为绿原酸为极性有机酸酯，往往通过水解和分子 内酯基迁移而产生异构化；当提取溶液的ｐＨ呈现较强的酸性 或碱性时，金银花中的绿原酸会因为ｐＨ的变化而发生一定的 化学反应或本身性质发生变化，从而不易被提取出来；当ｐＨ等 于５时，样品中绿原酸提取率达最高值。 ７．８ ７．７ 芝７ 由表１可以看出，对绿原酸提取率影响因素依次是乙醇浓 度，料液比，提取时间，影响因素最少的是ｐＨ值。根据各试验 因子的总和或平均数可以看出，Ａ＝Ａ ，Ｂ：Ｂ２，Ｃ＝Ｃ ，Ｄ＝Ｄ３ 时绿原酸的提取量最高，即金银花中提取绿原酸最优的提取条 件为：ｐＨ：３，乙醇浓度７０％，料液比１：３０，提取时间１５０ｍｉｎ。 莲 ・ ７． 隧 酶７． ７．２ ３结论 ６０ ９０ １２０ ｌ５Ｏ １８０ ７．１ 从单因素实验结果来看，为得到更高的绿原酸提取率，各 因素的最优条件分别为：乙醇浓度８０％，料液比ｌ：３０，ｐＨ值： ５，提取时间１５０ｒａｉｎ；正交实验中所得最优提取条件：料液比为 １：３０，乙醇浓度为７０％，ｐＨ值为３，提取时间为１５０ｍｉｎ。正交实 验结果有两项因素与单因素实验结果略有差别。分析可得，在 提取时间／舶ｉｎ 图５提取时间对绿原酸提取率的影响图 Ｆｉｇ．５ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｔｏ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ ７．８ ７．７ 从金银花中提取绿原酸的过程中，各因素并不是单独对提取率 产生影响，从图１中可看出，只改变乙醇浓度时，７０％分子质量 的乙醇与８０％分子质量的乙醇提取率差距不显著。通过研究 鍪７．６ 隧７．５ ７．４ 单因素实验与正交实验，得出实验室中使用酸醇提取法从金银 花中提取绿原酸的最佳提取条件：料液比为１：３０，乙醇浓度为 ７０％，ｐＨ值为３，提取时间为１５０ｒａｉｎ。以上条件下进行多次重 复实验，结果稳定，获得最大提取率为８．１８％。 ７．３ ７．２ 实验以广西本地金银花为原料，利用法酸醇回流提取法对 金银花中绿原酸的提取工艺进行了研究，逐一探索各单因素的 最优条件，并用正交试验寻找出实验室提取绿原酸的最佳综合 图６ ｐＨ值对绿原酸提取率的影响 Ｆｉｇ．６ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆＰＨ ｖａｌｕｅ ｔｏ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ 条件，为更好的开发广西大量金银花资源提供实验依据。 参考文献 ２．５ 正交实验 在单因素实验的基础上，选取影响绿原酸提取的四种因 ［１］兰雪萍，郭思卡弋，李焰芳，等．金银花中绿原酸的大孔树脂 素，即ｐＨ值、乙醇浓度、料液比、提取时间，分别记作Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ， 进行四因素三水平Ｌ９（３ ）正交实验。提取液稀释２００倍后，在 ３３０ｎｍ波长处测量各样品吸光值，处理数据结果见表１。 表１ 绿原酸Ｌ９（３ ）正交表 Ｔａｂｌｅｌ Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ Ａｃｉｄ Ｌ９（３ ）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔａｂｌｅ 纯化工艺［Ｊ］．食品科技，２０１５，４０（８）：２２３—２２８． ［２］靳维荣，李广华，孙强，等．自然诱变品种红金银花中绿 原酸含量初探［Ｊ］．现代中药研究与实践，２０１１，２５（５）： ２２． ［３］景小琦，武雪芬，雷敬卫．金银花枝叶中初黄酮、无机元 素和蛋白质含量测定［Ｊ］．河南中医，２００１，２１（４）：６６—６７ ［４］王立娟．金银花的研究进展［Ｊ］．医学信息，２０１０，５（８）： ２２９３—２２９５ ［５］国家药典委员会．中国药典［Ｓ］．北京：中国医药科技出版 社，２０１０：２０５． ［６］吉永奇，朱文学．金银花干燥工艺试验研究［Ｊ］．食品科技， ２００８（６）７９—８２． （本文文献格式：黄广君。梁锦添。蒋小云．金银花有效成分绿原 酸的提取工艺研究［Ｊ］．山东化工，２０１７，４６（１Ｏ）：９一ｌ１．）
