临床医药文献杂志 ２０１５年２月Ｂ第２卷第５期 ８２４ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ Ｆｅｂ．Ｂ ２０１５、ｂ１．２Ｎｏ．５ 流式细胞术在多发性骨髓瘤诊断中的应用研究 冯睿婷，李秀明，赵继智 （郑州人民医院肿瘤内科，河南郑州４５０００３） 【摘要】目的 分析探讨流式细胞术在多发性骨髓瘤（ＭＭ）诊断中的应用价值。方法选取２０１３￣－－２ 月～２０１４年２月本院收治的４２例多发性骨髓瘤患者，采用多参数流式细胞术对患者进行脊髓细胞免疫表面分 型测定，本次研究所用仪器为ＢＤ ＦＡＣＳｃＡＬＩＢｕＲ流式细胞仪。结果４２例脊髓瘤患者中检出ＣＤ３８、ＣＤ１３８ 阳性率最高，分别为９６．８８％和９３．７５％，其次是ＣＤ４５和ＣＤ１６，阳性率分剐为５３．１３％和４３．７５％，最后是ＣＤ５６ 和ＣＤ１９，其阳性率分别为３１．２５％和２５．ｏ０％。结论运用流式细胞分析术可以准确地鉴别骨髓瘤细胞，是诊 断多发性脊髓瘤的重要依据，对脊髓细胞瘤的预后监测有很大的帮助，值得在临床上大力推广。 【关键词】流式细胞术；多发性骨髓瘤；诊断 【中图分类号】Ｒ７３３．３ 【文献标识码】Ｂ 【文章编号】ＩＳＳＮ．２０９５．８２４２．２０１５．０５．８２４．０２ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ １ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｌｆｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ（ＭＭ）ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｖａｌｕｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ４２ ｃａｓｅｓ ｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１３～２Ｏ１４ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ｏｕｒ ｈｏｓｐｉｔａ１．ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆｓｕｂ．ｔｙｐｅ ｍｕｌｔｉ—ｐａｒａｍｅｔｅｒ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｔｉｅｎｔ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｉｎａｌ ＣＯｒｄ．ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ｆｏｒ ＢＤ ＦＡＣＳＣＡＬＩＢＵＲ ｌｆｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ４２ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｔｕｍｏｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ＣＤ３８，ＣＤ１３８ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ９６．８８％ａｎｄ ９３．７５％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ＣＤ４５ ａｎｄ ＣＤ１６．ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ５３．１３％ａｎｄ ４３．７５％。ｆｉｎａｌｌｙ，ＣＤ５６ ｎａｄ ＣＤ１９。ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ３１．２５％ａｎｄ ２５．００％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏ１１＿Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｌｆｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｃａｎ ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌｓ．ｉＳ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａ，ｎｔ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｐｉｎａｌ ｔｕｎｌｏｒｓ．ｓｐｉｎａ１ ｃｏｒｄ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｓ ｖｅｒｙ ｈｅｌｐｆｕ１．ｗｏｒｔｈ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ １ Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ；Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ 多发性骨髓瘤（ＭＭ）是一种恶性浆细胞病，属于Ｂ淋 ２结果 巴细胞淋巴瘤的一种，该病的特征是骨髓浆细胞异常增生 本次研究中３２例多发性骨髓瘤患者经流式细胞术检测， 伴有单克隆免疫球蛋白或轻链（Ｍ蛋白）过度生成，也有极 多项抗原表达呈阳性，其中ＣＤ３８、ＣＤ１３８阳性率最高，分 少数患者是不产生Ｍ蛋白的未分泌型骨髓瘤…。未分泌型和 别为９６．８８％和９３．７５％，其次是ＣＤ４５和ＣＤ１６，阳性率分别为 轻链型骨髓瘤都无法进行免疫固定电泳检测，并且由于多 ５３．１３％和４３．７５％，最后是ＣＤ５６和ＣＤ１９，其阳性率分别为 发性骨髓瘤起病徐缓，患者早期无明显症状，再加上其临 ３１．２５％和２５．００％，其余抗原阳性率过低。见表１。 床表现具有多样性，给临床诊断带来了一定的困难。近年 来流式细胞术在多发性骨髓瘤的诊断和疗效观察方面取得 表１ 本组多发性骨髓瘤患者细胞抗原表达阳性检出率情况 了较大的成效 ］。本次研究中采用ＣＤ４５／ＳＳＣ设门的多色免 疫荧光多参数流式细胞术对４２例多发性骨髓瘤患者进行细 胞免疫表型测定，现报告如下。 １资料与方法 １．１一般资料 选取２０１３年２月４２０１４年２月我院收治的３２例多发性骨 髓瘤患者，男１９Ｎ，女１３例，年龄４５～７８岁，平均年龄为 ３讨论 （５９．２±２．４）岁。所有患者均符合国内多发性骨髓瘤诊断 标准。 多发性骨髓瘤是一种多发于中老年人的恶性浆细胞 １．２方法 瘤，由于患者早期无明显症状或症状表现多样性，所以该 对所有患者抽取２ ｍＬ骨髓放入试管，加入肝素抗凝， 病误诊率较高。而且多发性骨髓瘤常伴有多发性溶骨性损 用Ｆｉｃｏｌｌ液分离单个核细胞，并按流式细胞术（ＦＣＭ） 害、高钙血症、贫血、肾脏损害，并且由于正常免疫球蛋 表面抗原和胞内抗原常规方法进行标记，在每只试管 白的生成受到抑制，很容易出现各种细菌性感染［３】。因此准 中各加入５０ Ｉ．ｔＬ骨髓血和２０“Ｌ荧光标记抗体。使用ＢＤ 确的诊断是十分重要的，有利于及时治疗。 ＦＡＣＳＣＡＬＩＢＵＲ流式细胞仪，以ＣＤ４５／ＳＳｃ设门，从每 流式细胞术可以快速、准确地检测正常浆细胞以 管获取１００００个细胞，检测骨髓有核细胞的各种抗原的表 及肿瘤细胞的生物学特性及特点。本次研究采用流式 达，并分析细胞抗原表达平均荧光强度。研究中所用抗体 细胞术检出患者细胞表面抗原ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＣＤ４５、 均产白ＢＤ公司。 ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＣＤｌ９表达阳性率依次为９６．８８％、９３．７５％、 １．３诊断标准 ５３．１３％、４３．７５％、３１．２５％、２５．００％。多此临床实践证明， 细胞抗原表达荧光强度在１０２～１０３为弱阳性，荧光强 ＣＤ３８和ＣＤ１３８抗原表达阳性检出率最高，因此ＣＤ３８、 度在１０３－－１０４在强阳性，细胞表面抗原表达≥２０％者可确定 ＣＤ１３８可以作为骨髓瘤筛选和纯化的特异性指标 ］。而 为抗原阳性。 ＣＤ５６、ＣＤ１９、ＣＤ４５等多项细胞表面抗原表达可以用来鉴 （下转第８２７页） ２０１５年２月Ｂ第２卷第５期 临床医药文献杂志 Ｆｅｂ．Ｂ ２０１５、ｂ１．２ Ｎｏ．５ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ ８２７ ３讨论 有不同程度的增加，增加幅度不宜，但这也反映出对于这 ＨＢｅＡｇＩ￣性、阳性慢性乙型肝炎两者在血清学、病毒 部分患者，定期检测脾脏厚度、门静脉内径对早期发现肝 学方面都存在差异，他们是慢性ＨＢＶ感染的两种不同类 纤维化具有重要的临床指导意义。 型，具有各自的临床表现。通常ＨＢｅＡｇｌｆ￣］性的慢性ＨＢＶ感 综上所述，对于ＡＬ，Ｔ小于正常上限２倍的ＨＢｅＡｇ阴性的 染者的年龄普遍偏大，疾病恶化的概率较大，易转化为肝 慢性ＨＢＶ感染患者，肝脏病变在Ｇ２或／和Ｓ２以上的患者仍较 硬化、肝细胞癌等，此外，进行抗病毒治疗疗效不理想， 多，对于这些患者，应密切关注预示肝脏病变隐匿进展的 这些都成为当前临床治疗的障碍【５］。所以在临床上判断 信号，如年龄、血清Ａｕ’、ＨＢＶ－ＤＮＡ、脾脏厚度、门静脉 ＨＢｅＡｇＩ￣性慢乙肝的治疗时机很重要。因此，我们分析了 内径等指标的变化，应定期进行临床随访，以及时、恰当 ６５例ＡＬＴ小于正常上限２倍的ＨＢｅＡｇＩ￣性慢性ＨＢＶ感染患者 的开始抗乙肝病毒治疗，以期改善患者的预后。 的肝脏病理及临床指标的关系，为早期、及时的进行抗病 参考文献 毒治疗方法的探索提供临床支持。 研究数据表明随着患者肝脏病变的恶化，患者的年 ［１］ 聂凡，童光东，周大桥．导致慢性ＨＢＶ携带者肝脏病理学改变的 龄、男性患者的比例显著增加，表明二者是ＡＬＴ小于正常上 相关因素［Ｊ］．中西医结合肝病杂志，２０１３，０１：６２—６５． 【２】 高敏，卢诚震，王 怡，等．慢性ＨＢＶ感染者血清肝炎ｅ抗原、 限２倍的ＨＢｅＡｇ阴性慢性ＨＢＶ感染患者肝脏病变加重的危险 ＨＢＶＤＮＡ载量与肝组织病理损伤的关系［Ｊ］．肝脏，２０１０，０３：１６７— 因素之一，这与多数学者研究结果一致［６］。同时，研究结果 还表明了ＡＬＴ的变化与肝脏炎症改变呈正相关，ＡＬＴ可能是 １７０． ＋ 决定抗病毒治疗时机的临床重要指标之一。 ［３ｌ 中华医学会肝病学分会中华医学会感染病学分会．慢性乙型肝 以往很多的研究报告认为慢乙肝患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ定 炎防治指南（２０１０年版）．中华ｌ｛缶床感染病杂志，２０１１，４（１）：１－１３． 量与肝组织病理学改变无关［７］。然而我们的研究发现，随着 ［４］ 中华医学会传染病与寄生虫病学分会，肝病学分会．病毒性肝炎 防治方案．中华肝脏病杂志，２０００，８（６）：３２４．３２９． 肝炎程度的不断加重， ＿一Ｔ小于正常上限２倍的Ｉ－ＩＢｅＡｇＮ性慢 ［５】 张绍全，赖菁，谢仕斌，等．ＨＢｅＡｇ阴性慢性乙型肝炎患者相同 性ＨＢＶ感染患者的ＨＢＶｏＤＮＡ定量亦显著升高，表明对于这 肝实质细胞体积分摊的血清ＨＢＶＤＮＡ载量与肝组织炎性分级 类患者而言，肝组织损伤机制除免疫攻击外，可能存在ＨＢＶ 的关系．中华临床感染病杂志，２０１０，３（１）：３１－３４． 病毒的直接侵害。因此，对于ＡＬＴｄ，于正常上限２倍、ＨＢｅＡｇ 阴性的慢性ＨＢＶ感染患者，血清ＡＬＴ及ＨＢＶ－ＤＮＡ定量的改变 【６］ 杨艳华，谢青准红莲，等．丙氨酸转氨酶持续正常的ＨＢｅＡｇ阴 可能与肝脏病理改变相关，有助于决定抗乙肝病毒的治疗时 性慢性乙型肝炎病毒感染者肝脏组织学改变及其影响因素．中 华传染病杂志，２００８，２６（１２）：７１９—７２４一 机。同时提示我们，在探讨此类患者Ｉ－ＩＢＶ－ＤＮＡ水平和肝组织 学改变之间的关系时，将ＨＢｅＡｇ阴性患者和阳性患者分别进 ［７］迟晓伟，戈国亮，杨微波，范晶华，张艳梅，陈一晖．肝炎ｅ抗原 行讨论结果可能更具有参考价值［８］。 阴性慢性ＨＢＶ感染者肝组织病理分析【Ｊ］．昆明医学院学 同时本研究还发现随着患者肝脏病理改变的进一步加 报，２００９，￥２：２６—２８． 重，彩超检验结果证实相对应的脾脏厚度及门静脉内径也 【８１ 李嘉，游绍莉，邢汉前，等．７ｌ例血清ＡＬ＿Ｔ正常的慢性ＨＢＶ感染 者临床与肝脏病理特征［Ｊ］．传染病信息，２００７，０２：１００．１０１＋１１４． （Ｉ－接第８２４页） 别骨髓瘤细胞和良性浆细胞，其中ＣＤ５６是介导造血细胞粘 参考文献 附的粘附分子之一，在抗原表达中是能显著区分良性浆细 ［１］ 丁润生，秦燕，陆伟，等．流式细胞术在多发性骨髓瘤诊断中 胞和骨髓细胞瘤的标志，将它与ＣＤ４５和ＣＤ１９等结合起来 的应用［Ｊ］．中国实验诊断学，２０１１，１５（７）． 检查表达阳性率，可以为多发性骨髓瘤的诊断和分型提供 【２】 秦燕，丁润生，陆伟，等．多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤 重要依据。此外，要注意流式细胞仪在使用前和使用过程 诊断中的价值【Ｊ］．交通医学，２００９，２３（２）：１３７．１３８，１４０． 中都要精心进行激光强度、液流速度和测量区的光路等调 【３】 李岩，吕忠文，魏洪涛，等．多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤 试，以保证工作的可靠性和最佳性。 诊疗中的应用［Ｊ１．中国实验诊断学，２０１３，１７（８）：１４９５．１４９６． 综上所述，流式细胞术有助于多发性骨髓瘤的诊断和 ［４］林 阳，万岁桂．流式细胞术免疫表型分析在多发性骨髓 分型，并能为该病的治疗和预后检测提供帮助，值得在临 瘤及其他浆细胞疾病诊断中的应用［Ｊ】．标记免疫分析与ｌ临 床上大力推广。 床，２０１３，２０（１）：６０—６２．