常见荧光素

罕见荧光素： 之蔡仲巾千创作

创作时间：二零二一年六月三十日 （1）异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate, FITC) ：FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末, 易溶于水和酒精溶剂.有两种异构体, 其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与卵白质结合力等方面都更优良.FITC分子量为389.4, 最年夜吸收光波长为490～495nm, 最年夜发射光波长为520～530nm, 出现明亮的黄绿色荧光.FITC在冷暗干燥处可保管多年, 是目前应用最广泛的荧光素.其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感, 通常切片标本中的绿色荧光少于红色.

（2）四乙基罗丹明 (rhodamine, RB200) ：RB200为橘红色粉末, 不溶于水, 易溶于酒精和丙酮, 性质稳定, 可长期保管.最年夜吸收光波长为 570nm, 最年夜发射光波长为595～600nm, 出现橘红色荧光.

（3）四甲基异硫氰酸罗丹明 (tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC)：TRITC为罗丹明的衍生物, 呈紫红色粉末, 较稳定.最年夜吸收光波长为 550nm, 最年夜发射光波长为620nm, 出现橙红色荧光, 与FITC的翠绿色荧光比较鲜明, 可配合用于双重标识表记标帜或比较染色.因其荧光淬灭慢, 也可用于独自标识表记标帜染色.

创作时间：二零二一年六月三十日

创作时间：二零二一年六月三十日

（4）镧系：镧系螯合物某些3价稀土镧系元素如铕（Eu3）、铽（Tb3）、铈（Ce3）等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光, 其中以Eu3 应用最广.Eu3螯合物的激发光波长范围宽, 发射光波长范围窄, 荧光衰变时间长, 最适合用于分辨荧光免疫测定. （5）藻红卵白（P-phycoerythrin, PE）：PE是在红藻中所发现的一种可进行光合作用的自然荧光色素, 分子量为240kD的卵白, 最年夜吸收峰为564 nm, 当使用488 nm激光激发时其发射荧光峰值约为576 nm, 对单激光器的流式细胞仪来说, 推荐使用585±21nm的带通滤光片, 双激光器的流式细胞仪推荐使用575±13nm的带通滤光片.FL2探测器检测PE.

（6）多甲藻叶绿素卵白 （peridinin chlorophyll protein, PerCP）：PerCP是在甲藻和薄甲藻的光学合成器中发现的, 是一种卵白复合物, 分子量约为35kD, 最年夜激发波长的峰值在490nm附近, 当被488nm氩离子激光激发后, 发射光的峰值约为677nm.FL3探测器检测PerCP.

（7）碘化丙啶（ propidium iodide, PI）：可选择性地嵌入核酸（DNA、RNA）的双螺旋碱基对中.在对DNA染色时, 需用RNase对细胞进行处置, 以排除RNA对DNA荧光定量精度的影响.在488nm波长激发下, PI的发射光谱为610-620nm. FL2探测器检测PI.

罕见荧光素的特性：

创作时间：二零二一年六月三十日

创作时间：二零二一年六月三十日

（1）FITC：黄色结晶粉末, 吸收光：490~495nm, 发射光：520~530nm, 明亮的黄绿色荧光.

（2）RB200：橘红色粉末, 吸收光570nm, 发射光595~600nm, 橘红色荧光.

（3）TRITC：紫红色粉末, 吸收550nm, 发射光620nm, 橙红色荧光.

（4）镧系：Eu、Tb

（5）PE：吸收光490～560nm, 发射光595nm, 红色荧光. （6）其它：酶作用后发生荧光物质. 酶作用后发生荧光物质：

酶

底物

产物 MU MU 二聚体

激发光 360 360 317

发射光 450 450 414

B-G MUG AP

MUP

HRP HPA

酶作用后发生荧光的物质某些化合物自己无荧光效应, 一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质.例如, 4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮, 后者可发出荧光, 激发光波长为360nm, 发射光波长为450nm.其他如碱性磷酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基苯乙酸等.镧系螯合物 某些3价稀土镧系元素如铕 (Eu3+)、铽 (Tb3+) 等的螯合物可发射特征性的荧光, 而且激发光波长范围宽、发射光波长范围窄、荧光衰变时间长, 最适合于时间分辨荧光免疫测定.

创作时间：二零二一年六月三十日 创作时间：二零二一年六月三十日