陕西中医２０１０年第３１卷第１１期 ・Ｉ５４５ 实验研究・ 雷公藤风湿药酒对大鼠肝肾组织形态学及功能的影响 杨军英杨献光刘锋瑞赵青青 河南师范大学生命科学学院（新乡４５３００７） 摘 要 目的：观察雷公藤风湿药酒的长期毒性反应。方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠连续给药３个月，停药后 观察２周。对样本进行体重、脏器指数、血液学、血液生化、组织病理学检查。结果：雷公藤 风湿药酒对雄鼠体重无影响，雌鼠体重明显增长。对大鼠的主要脏器指数和血液学指标 无影响。ＧＧＴ和ＢＵＮ显著性升高。停药后ＢＵＮ仍未恢复正常。给药组大鼠有不同程度 的肝坏死和肾近曲小管上皮细胞轻、中度水肿；大剂量组生殖细胞数量轻度减少。恢复期 病损情况明显好转。结论：雷公藤风湿药酒连续３个月给药后，雌性大鼠的体重显著增加， 对脏器重量和血液学指标无影响，有肝肾和生殖毒性。 主题词 毒性试验 动物，实验 大鼠 ＠雷公藤风湿药酒 【中图分类号１ Ｒ９９【文献标识码】Ａ【文章编号１ １００Ｏ一７３６９（２０１０）１１—１５４５—０３ 药／ｋｇ ＴｗＨＦ风湿药酒），每组２Ｏ只。每日ｉｇ给药１次，ｌｍＬ／ １００ｇ，连续给药３个月。停药后每组留下８只大鼠（雌雄各半）， 类风湿性关节炎以慢性关节炎症为特征，引起关节的疼痛 和肿胀 ］。大约有１／１０的患者由于关节损伤导致劳动能力丧 失甚至死亡＿２］。由于目前缺乏靶向治疗的药物，中药雷公藤 Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ Ｈｏｏｋ Ｆ在类风湿性关节炎治疗方面的 再常规饲养２周进行恢复期实验。 １．２．２观察指标：实验期及恢复期，每日观察动物外观体 作用备受人们关注 ］。雷公藤风湿药酒（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ Ｈｏｏｋ Ｆ ａｎｔｉ—ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｗｉｎｅ，ＴｗＨＦ风湿药酒）是 征、行为活动、大小便性状及其颜色、眼、鼻分泌物和死亡情况 等。死亡动物及时尸检，发现病变器官做病理学检查。每周称体 重，按体重调整给药量。给药结束及恢复２周均按常规进行血 液学、血液生化、系统尸检、脏器系数和组织病理学检查。 以雷公藤为主药，辅以牛膝等中药制成的酒剂，经长期临床应 用，疗效确切。为评价其安全性，以确定该药的毒性和安全剂 量，我们按照国家药品监督管理局《新药审批方法》中有关规定 和参考文献 ］，对该制剂进行了为期３个月的大鼠长期毒性实 验。 １．２．３统计学方法：实验数据用 ± 表示，实验结果采用ｔ 检验进行统计学处理。 ２ 结 果 １材料与方法１．１材料 １．１．１动物：Ｗｉｓｔａｒ大鼠，兰 一２．１ 一般指标：溶媒对照组和ＴｗＨＦ风湿药酒给药组第 州大学实验动物中心提供。 １．１．２药品和试剂：ＴｗＨＦ风湿药酒：酒泉市中医院制剂 室提供，每１０ｍＬ含生药２．５ｇ，和体积比１５ 的高粱酒。水浴浓 缩干燥后，用４７。高梁酒制备成所需浓度的药物（７．５、３．７５、１． ８７５ｇ生药／ｋｇ），分别为临床用药量的６Ｏ、３０、１５倍。溶媒对照 药：４７。高粱酒，用时稀释成１５。酒。血液生化分析试剂：四川迈 克科技股份有限公司生产。 周给药后大鼠精神振奋，活动增多。但大、小便正常，皮毛光 ２．２体重变化（表１）：除正常对照组外，多数动物在给药初 滑，鼻、眼、口未见异常分泌物。以后基本正常。 期体重均有不同程度减轻，且雌雄动物的体重变化不同。雌鼠 给后体重增长缓慢。和正常对照组相比，给药第１～３周，溶媒 组雌鼠体重比给药前明显减轻（尸＜Ｏ．Ｏ１），随后逐渐接近正常。 给药后和停药恢复期，ＴｗＨＦ风湿药酒中、小剂量组的雌鼠体 重明显增长（Ｐ＜Ｏ．０５，和溶媒对照组相比），且小剂量大鼠的体 重比对照组高（Ｐ＜０．０１）。 ２．３脏器指数：ＴｗＨＦ风湿药酒在实验中和停药后对大鼠 １．１．３仪器：ＡＩ ｃＹ０Ｎ ３００全自动生化分析仪（美国稚 培），ＭＩＫ一６１０８Ｋ型全自动血球计数仪（日本ＮｉｈｏｎＫｏｈｄｅｎ）， ｃＩ ４型半自动止凝血测定仪（德国ＢＥ），ＣＩ ＩＮＩＴＥＫ５０尿常规 分析仪（美国拜尔）。 １．２方法１．２．１动物分组和给药；取Ｗｉ￣ｔａｒ大鼠１００只， 的肝、脾、肾、肾上腺和皋丸重量均无明显影响。 ２．４血液学指标（表２）：ＴｗＨＦ风湿药酒给药３个月后，大 鼠的ＷＢＣ、ＬＹ、单核细胞（ＭＯ）、中性粒细胞（ＮＥ）、ＲＢＣ、 体重１５０￣２００ｇ，雌雄各半，分笼饲养。观察１周后，随机分为５ 组，分别为正常对照组（等容量水）、溶媒对照组（等容量１５。 酒）、ＴｗＨＦ风湿药酒大、中、小剂量组（７．５、３．７５和１．８７５ ｇ生 ＨＧＢ、平均红细胞体积（ＭｃＶ）、ＰＬＴ、平均血小板体积（ＭＰｖ）、 血小板压积（ＰＣＴ）和血小板分布宽（ＰＤＷ）等血液学指标均无 明显变化（和溶媒对照组相比）。ＭＣＨ、ＭＣＨＣ和ＲＤＷ在正常 ＊河南省自然科学研究计划项目（ＮＯ．２００８Ａ１８００１３）； 河南师范大学科研启动项目（ＮＯ．０７１４）； 河南省科技攻关项目（ＮＯ．０８２１０２３１０１０５）； 河南省基础与前沿项目（ＮＯ．０８２３００４５３２０１） 值范围显著性增加（Ｐ＜０．０５，和溶媒对照组相比）。停药恢复 后，ＴｗＨＦ风湿药酒组（和溶媒对照组相比）大鼠的血液学指标 均无明显变化。提示ＴｗＨＦ风湿药酒长期连续给药对大鼠的 血液学指标没有影响。 １５４６ 陕西中医２０１０年第３１卷第ｌ１期 表１ ＴｗＨＦ风湿药酒长期毒性实验大鼠体重增长情况（ ± ） 注：Ｉ：正常对照组，Ⅱ：溶媒对照组，Ⅲ：雷公藤风湿药酒大剂量组，Ⅳ：雷公藤风湿药酒中剂量组，Ｖ：雷公藤风湿药酒小剂 量组。 ， 和正常对照组比较，◆Ｐ＜Ｏ．０１，◇Ｐ＜０．０５；和溶媒对照组比较，Ａ Ｐ＜０．０５，▲Ｐ＜０．０１ 表２ ＴｗＨＦ风湿药酒长期毒性实验给药３个月对大鼠血液学４￣Ｓ－ｒ，的影响（ ±ｓ， ＝１２） ２．５血液生化指标（表３，４）：给药组的７一谷氨酸转氨酶 溶媒对照组相比）。停药恢复２周后，给药组（ｓＮ溶媒对照组相 （ＧＧＴ）和血尿素氮（ＢＵＮ）明显高于正常对照组和溶媒对照组 比）ＢＵＮ仍然高于正常。其余指标和对照组相比，无显著性差 （Ｐ＜Ｏ．０５），天冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）高于正常对照组（Ｐ＜ 异。提示溶媒和ＴｗＨＦ风湿药酒对大鼠肝脏和肾脏排泄功能均 ０．０１）。给药组的丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、碱性磷酸酶（ＡＬＰ） 有损伤，而且在恢复２周后，肾脏功能仍未恢复正常。 和血肌酐（ＣＲＥ）虽有升高趋势，但无显著性差异（Ｐ＞０．０５，和 表３ ＴｗＨＦ风湿药酒长期毒性实验给药３个月大鼠的生化指标（￣－－＿ｓ，Ｌ－－７／＂一１２） 陕西中医２０１０年第３１卷第ｌｌ期 ２．６ 病理组织学检查：ＴｗＨＦ风湿药酒连续给药３个月 后，各组动物器官、组织均无肉眼可见的病变。对大鼠心、肝、 脾、肺、肾、胃、十二指肠、肾上腺、睾丸及卵巢等进行组织形态 学镜检发现，正常对照组大鼠各脏器无明显组织学改变。ＴｗＨＦ 风湿药酒大剂量组大鼠部分肝细胞增大，胞浆颗粒变性，偶见 小灶性坏死灶。中、小剂量组个别肝小叶内有点状坏死灶。各剂 量组肾近曲小管上皮细胞轻、中度水肿。大剂量组可见卵巢、睾 １５４７ Ｗｉｌｓｏｎ。ＲＮ，Ｒｏｙ Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ，ＭＤ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ Ｈｏｏｋ Ｆ Ｖｅｒｓｕｓ Ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ． ２００９，１５１（４）：２２９－２４０． ［３］ Ｑｉｕ Ｄ，Ｋａｏ ＰＮ．Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ａｎｄ ａｎｔｉ— ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ，ｔｈｅ ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ａｃｔｉｖｅ ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｈｅｒｂ Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ Ｈｏｏｋ．ｆ．Ｄｒｕｇｓ Ｒ Ｄ．２００３；４：ｉ－１８． 丸内生殖细胞数量轻度减少。其余组织的形态、结构未见明显 异常。恢复期各给药组病损情况较给药期均有明显好转，其中 中、小剂量组未见明显病理改变，大、中剂量组偶见肝细胞点状 坏死。 ［４］ 中华人民共和国食品药品监督管理局．中药新药研 究指南［ｓ３．北京：中国中医药出版社，２００４：１２３． ［５］ Ｅｄｍｏｎｄｓ ＳＥ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ ＪＣ．Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｌｅｉ ｇｏｎｇ ｔｅｎｇ［Ｊ－］． ＢＪＯＧ．２００３；１１０（１）：７７—８． ３讨论 雷公藤及其制剂在类风湿性关节炎的治疗方 面取得了可喜的疗效。但其对生殖系统的毒性［５ ］、肝毒性、肾 毒性口 等极大的妨碍了其临床应用。大量的筛选性研究证实， 采用新的剂型和采用中药复方能够有效对抗雷公藤的毒性作 用，甚至达到增效减毒的目的［９］。 雷公藤风湿药酒分别以相当于人临床剂量的６Ｏ、３０和１５ 倍连续３个月ｉｇ给药，大鼠的一般状况良好，雌鼠体重明显大 Ｅ６３ Ｇｕ Ｊ，Ｚｈｕ Ｃ，Ｗａｎｇ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｌｅｉ Ｇｏｎｇ Ｔｅｎｇ ｏｎ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｈｏｒｍｏｎｅｓ口］．Ｊ Ｔｒａｄｉｔ Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ． ２００１；２１（１）：５０—１． ［７］ Ｍｅｉ Ｚ，Ｌｉ Ｘ，ｗｕ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｈｅ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｈｅｐａｔ０ｔ０ｘ ｉｔｙ ｏｆ ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ— 于对照组，这可能与雷公藤内酯与糖皮质激素受体结合，作用 ｌｏａｄｅｄ ｓｏｌｉｄ ｌｉｐｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ［Ｊ３．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ．２００５；５１ （４）：３４５—５１． 于下丘脑一皮质一肾上腺轴有关口 ，给药组的血液学指标和脏器 系数检查与对照组之间无显著性差异。肝脏和肾脏以及卵巢、 睾丸等组织均出现了不同程度的损害，这可能与雷公藤通过线 ［８］ Ｙａｏ Ｊ，Ｊｉａｎｇ Ｚ，Ｄｕａｎ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ 粒体途径诱导的细胞凋亡有关 ］。停药后肝脏功能恢复，形态 学损伤减轻，肾脏功能没有恢复正常。以上结果提示雷公藤风 湿药酒长期、大剂量、连续给药对大鼠的肝、肾和生殖器官均有 损害。且对肝脏和肾脏的损伤是不可逆的。 ｈｕｍａｎ ｎｏｒｍａｌ ｌｉｖｅｒ Ｌ一０２ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌ１．２００８；３１ （４）：５９２—７． ［９］窦建卫，雷［１Ｏ］ 莹，王嗣岑．雷公藤毒性的研究现状［Ｊ］． 陕西中医，２００６，２７（４）：４８５—４８７． 参考文献 ［１］ Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ ＧＳ．Ｅｖｏｌｖｉｎｇ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｏｆ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２００３；４２３：３５６－６１． Ｂｒｉｎｋｅｒ ＡＭ，Ｍａ Ｊ，Ｌｉｐｓｋｙ ＰＥ，Ｒａｓｋｉｎ Ｉ． Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ｇｅｎｕｓ Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ （Ｃｅｌａｓｔｒａｃｅａｅ）ＥＪ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００７，６８：７３２—６６． （收稿２０１０—０３—１２；修回２０１０—０５—１３） ［２］ Ｒａｐｈａｅｌａ Ｇｏｌｄｂａｃｈ—Ｍａｎｓｋｙ，ＭＤ，ＭＨＳ，Ｍｉｌｄｒｅｄ 骨质糖浆对肾阳虚模型小鼠的实验研究 惠爱武董银兰△赵 岗 杨甫昭 陕西省中医药研究院（西安７１０００３） 摘 要 目的：探讨骨质糖浆对小鼠肾阳虚模型的治疗作用。方法：将雄性小鼠分为６组，除正常对 照组外，其余各组小鼠用氢化可的松注射液制造肾阳虚模型，然后，各组给水或给药，连续 １０ｄ。结果：骨质糖浆１０ｍＬ／ｋｇ、５ｍＬ／ｋｇ组体重增加量均显著高于模型对照组，１０ｍＬ／ｋｇ 组小鼠体温显著高于模型对照组，骨质糖浆１ＯｍＬ／ｋｇ、５ｍＬ／ｋｇ纽能明显延长阳虚证小鼠 低温游泳耗竭时间，１０ｒｎＬ／ｋｇ、５ｍＬ／ｋｇ、２．５ｍＬ／ｋｇ能使阳虚小鼠胸腺指数显著升高（Ｐ ＜Ｏ．０５）。结论：骨质糖浆能明显增加阳虚证小鼠体重、体温和延长低温游泳耗竭时间的作 用，明显改善肾阳虚小鼠胸腺萎缩状况。 主题词 复方／药理学 ＠骨质糖浆 动物，实验 小鼠 【中图分类号】Ｒ２５６．５【文献标识码】Ａ【文章编号】１０００—７３６９（２０１０）１ｌ一１５４７—０３ 味中药组成，具有补益肝肾，活血通络，强筋壮骨之功效，符合 中医辩证施治的原则，主要适用于骨质疏松等属肝肾亏虚、血 △山西师范大学生命科学学院（临汾０４１００４） 瘀痹阻证型者。本实验通过观察骨质糖浆对肾阳虚模型小鼠的 骨质糖浆为临床经验方，主要由熟地、肉苁蓉、骨碎补等七
